Hình 3.11: Cây con từ thí nghiệm ra rễ sau 21 ngày
59
Tại lô thí nghiệm chỉ bổ sung vào môi trường CĐHTTTV là NAA và thí nghiệm đối chứng là môi trường MS không bổ sung CĐHTTTV kết quả cho thấy trên tất cả cây con in vitro đều cho ra rễ. Tuy nhiên, ngoại trừ tại môi trường MS và môi
trường MS có bổ sung NAA với nồng độ 0,2mg/l cây con phát triển và ra rễ với mức độ tương đối bình thường, còn tại các thí nghiệm bổ sung gia tăng nồng độ NAA (0,4 – 1mg/l) đều thu nhận kết quả với biểu hiện quá mức về sự gia tăng kích thước theo bề ngang của mẫu: mẫu phù, thân mập xốp, mọng nước, lá có bản to dày và hơi vàng, hệ rễ kém phát triển. Nồng độ NAA càng tăng thì số lượng rễ tạo ra càng lớn, bên cạnh đó hầu hết các rễ này chỉ gia tăng kích thước trở nên phù, mập nhưng không phát triển theo chiều dài. Tại môi trường MS bổ sung NAA 0,2mg/l cho kết quả với số rễ con tạo ra lớn nhất 10,60 ± 0,69, chiều dài rễ 2.51± 0,15 (cm) , chiều cao thân 3,21±0,08 (cm) và kích thước lá 4,4×2,5 (cm), đây là kết quả tốt nhất tại lô thí nghiệm chỉ bổ sung NAA vào môi trường tạo rễ.
Tại lô thí nghiệm có bổ sung thêm THT với nồng độ cố định là 0,2g/l bên cạnh việc bổ sung NAA, kết quả thu nhận được tại tất cả các lô đều có rễ con mới xuất hiện. Tuy nhiên, ngoài biểu hiện khác nhau về số lượng rễ con mới tạo nên các đặc điểm còn lại như chiều dài rễ, kích thước cây con và lá hầu như không có nhiều khác biệt rõ rệt. Nghiệm thức có sự phối hợp giữa NAA và THT có số lượng rễ hình thành ít hơn các nghiệm thức chỉ bổ sung NAA. Ở các nồng độ NAA bổ sung THT, số lượng rễ hình thành thấp, cao nhất là nghiệm thức bổ sung NAA 0,2mg/l với số rễ hình thành trung bình là 6,47. Tuy nhiên, cây có thân cao, rễ phát triển dài hơn, nồng độ NAA 1mg/l cho kết quả rễ dài nhất (17,37cm).
Việc sử dụng auxin trong thí nghiệm tạo rễ đã được sử dụng nhiều trong nuôi cấy mô in vitro, các chất điều hoà thuộc nhóm auxin thường được bổ sung vào môi trường nuôi cấy như: NAA, IAA, IBA, 2,4-D, trong đó NAA là chất được sử dụng thường xuyên nhất. Hàm lượng NAA cao hơn thì có sự ức chế kéo dài rễ và kích thích rễ mới hình thành, điều này là do auxin ở nồng độ cao sẽ kích thích sự tạo sơ khởi rễ nhưng sẽ cản trở sự tăng trưởng của các sơ khởi rễ này (Bùi Trang Việt, 2000). Ngoài ra, NAA còn có tác dụng kích thích sự giãn tế bào, làm tăng thể tích và làm tế bào trương nước do đó làm cho mẫu cấy phình to ở đế, xuất hiện mô xốp.
60
Mẫu cấy trên môi trường có bổ sung THT sẽ ra rễ dài hơn. Điều này có thể được giải thích thông qua tính chất của THT. THT có hệ thống các lỗ nhỏ với diện tích bề mặt bên trong rất lớn, là nơi rất nhiều chất bị hấp thu. THT có khả năng hấp thu không thuận nghịch chất ức chế và chất độc, làm đen môi trường nuôi cấy, tăng cường độ thoáng khí của môi trường nuôi cấy, phóng thích các chất có trong THT có khả năng kích thích tăng trưởng, hấp thu nhiều chất điều hòa tăng trưởng dùng trong nuôi cấy mô (Mohamed-Yaseen và cs, 2001) [24]. THT đôi khi cũng giúp ích cho sự tạo rễ. Trong nuôi cấy mô in vitro, cho THT vào môi trường nuôi cấy ngoài tác dụng khử độc còn kích thích tăng trưởng và gia tăng việc hình thành rễ. Khả năng kích thích sự tăng trưởng của tế bào mô thực vật là do than kết hợp với các hợp chất phenol độc do mô tiết ra trong suốt quá trình nuôi cấy. THT thường được bổ sung vào môi trường nuôi cấy với nồng độ 0,5 – 3% (Edwin, 1993). THT còn được mô tả là cải thiện sự sinh trưởng của cây trồng in vitro và sự sống sót của cây sau khi trồng ra ngoài.
Kết thúc thí nghiệm tạo rễ cho thấy tại môi trường MS có bổ sung 0,2g/l THT
và 0,2mg/l NAA cho kết quả tạo rễ tốt nhất với các chỉ số: số rễ con hình thành
6,47±0,42, chiều dài rễ 13,33±0,19 (cm), chiều cao thân 7,48±0,11 (cm), kích thước lá 5,8×2,6 (cm).