Ba dòng vi tảo B3, M6 và D14 được tiếp tục sử dụng để giải trình tự nhằm kiểm tra tính đặc hiệu của cặp mồi chuyên biệt đã thiết kế. Việc lựa chọn 03 dòng vi tảo này dựa trên những cơ sở sau: Thứ nhất, ba dòng vi tảo này được phân lập từ 3 loại lá khác nhau là lá bần (dòng B3), lá đước (dòng D14) và lá mắm (dòng M6). Thứ hai, các mẫu lá được lấy từ 2 tỉnh khác nhau là Bến Tre (B3 và M6) và Trà Vinh (D14). Thứ ba, dựa vào kết quả phân tích bằng cặp mồi chuyên biệt đã thiết kế trong nghiên cứu này, dòng B3 và M6 thuộc chi Schizochytrium và dòng D14 thuộc chi Thraustochytrium. Thêm vào đó, cả 3 dòng vi tảo này đều có khả năng sản xuất được DHA và DPA khá cao (Theo báo cáo của Trần Thị Xuân Mai et al., 2014)
Sản phẩm PCR của 3 dòng vi tảo B3, D14 và M6 bằng cặp mồi Thraus-Schi2 (khoảng 1.000bp) được đem giải trình tự.
Kết quả trình tự: - Dòng B3: CCAAGCATATGCCAAAACGTGTGCCACATAAAAAAGCTNGTANGTAA ATTTTCTGCGATGGGCGANCGGGTGGTCTCTCCCTGAANGGGGATGAATTN NCNGGTGCCTTNGCCCATTTTTTCTTCTTTTNGGGGGAGAATTTTTCACTGA AAACAAACAAGGTTTCCCAAACCAGGTTTTTGACCCGGATATTTTTTTTAG GGAAAAAAGAAAGGGCTTGGGGGGCTTTTTTTTGGTTTCCCCCCCTGAAAA AGGTTAAAAGGAACACTTGGGGGGATTTGTTTTTTGGGGCTTAGGGGGAA
ATTTTTGGATTTTCGAAAAACCGAATTAAGGGGAGGCCTTTTCCAAACAAG TTTTCCTTAAACAAGAAAAAAAATTTGGGGGTTGAAAAAGATTTAAAACC ATTGGGGTTTAGGCCCTAAAAAAAGCCCACCTGGGAATTTTGGGGGCTTTT TTTAAGGGCCTCAGCAGCCGCCCCTGAGAAATCAAAGTTTTTGGGTTCCGG GGGGGGTATGGTTGCAAGGGTGAAAATTAAAGGAAATGGCGGAAGGGCC CCCCCCGGGGGGGGGCCCGCGGGTTAATTTGACTCAACCCGGGAAAAATT TCCCGGTCCCGACAAAGGGAGGATTGACAGATTGAGGGGTTTTTCAAGGTT TTATGGGGGGGGGGGCATGGCCGTTTTTAGGTGGGGGGGGGAATTGTTTG GGTAATTCCGTTAAAGAAAGGGACCTCGGCCTACTAAAAAGGGGGGGGGA AGGCAACAAAGGACGTTTTTAACTTTTTAAAGGGACATGTCCGGTTTACGG GCAGGAAGTTGGAGGCAATAACAGGTTGGGGATGCCCTTAAAGGTTTTGG GCCCCCCCCCCGCTCCACTAAGGGGTTCATCGGGTTTAAATTCAATATTTA TGGATATTGAGTGCTTCTAGGAATGG
Khi so sánh trình tự gen dòng B3 với ngân hàng GenBank trên NCBI đã cho thấy được dòng B3 có sự đồng hình với Schizochytrium sp. SKA10 với 79%.
Hình 18. Kết quả BLAST từ NCBI của dòng B3
- Dòng 14: AGTAGTTGAATTATCTTANGCACTGGGTCGACCGGTGCTTTCCTATGA ATGGGGATTGATTGTCTGTGTTGCCTTGGCCATCTTTTTCTTTTCTTTATTGG GGAGAAATCTTTCACTGTAATCAAAGCAGAGTGTTCCAAGCAGGTCGTATG ACCGGTATGTTTATTATGGGATGATAAGATAGGACTTGGGTGCTATTTTGT TGGTTTGCACGCCTGAGTAATGGTTAATAGGAACAGTTGGGGGTATTCGTA TTTAGGAGCTAGAGGTGAAATTCTTGGATTTCCGAAAGACGAACTAGAGC GAAGGCATTTACCAAGCATGTTTTCATTAATCAAGAACGAAAGTCTGGGG ATCGAAGATGATTAGATACCATCGTAGTCTAGACCGTAAACGATGCCGACT TGCGATTGTTGGGTGCTTTTTTATGGGCCCCACCACCACCCCACGAGAAAA
CTAAATCTTTTGGGTCCCGGGGGGGAATGGGCCCAAGGGGGAAACTCTAA GGAAATTAGGGAAAGGGACCCCCCGGGGTGGGGCCCGCGGGTTTATTTTA CTCTCAACGGGAAAACTTTCCCCGGGCCCACACATGGGGGGTTTTCACATT TAGAGCTCTCTCTCGAGACTATGGGGGGGGGGGCGCGGGGCCTCTCATTTT GGGTAGAGATATGTGTGGGGAATTCCCTGTACGCACGAGACCCCGCGCTCT CCTAAATGGCGTGTGGTGGGCCCATATAAAGCTTTTACGCTTTAAAACGGG CATTTTGCGTGTATCGGGGCGGAAATCTAGGGAAATACAGTCCTGTGAAGC CACTCAAAGATTATGGGCGCANCGCCGCATCAGATGGCGCTGTCGAGGGT GTATAATCTGTTTCTATGCATATNAGAGATATACAGAAGGTCTTGGAGAAG CTCGTGTAA
Khi so sánh trình tự gen dòng D14 với ngân hàng GenBank trên NCBI đã cho thấy được dòng D14 có sự đồng hình với Thraustochytrium sp. BP3.2.2 với 93%.
Hình 19. Kết quả BLAST từ NCBI của dòng D14
- Dòng M6 TATATAATAAATANNCCTTTTCTTATTTCCCCGCTCCAATAGCAATAT GCTAAACGTTGTCTGCAGATAAAAAAGCTCGTAGTTGAAATTCTTGGCATG GGCCGACCGGTGCTTTTCCCTGAAATGGGGATTGATTTGTCTGTGTTGCCTT GGCCATTTTTTTCTTTTCTTTATTGATAAGAAATCTTTCACTGTAATCAAAG CAGAGTGTTCCAAGCAGGTCGTATGACCGGTATGTTTATTATGGGATGATA AGATAGGACTTGGGTGCTATTTTGTTGGTTTGCACGCCTGAGTAATGGTTA ATAGGAACAGTTGGGGGTATTCGTATTTAGGAGCTAGAGGTGAAATTCTTG GATTTCCGAAAGACGAACTAGAGCGAAGGCATTTACCAAGCATGTTTTCAT TAATCAAGAACGAAAGTCTGGGGATCGAAGATGATTAGATACCATCGTAG TCTAGACCGTAAACGATGCCGACTTGCGATTGTTGGGTGCTTTTTTTATGG GCCTCAGCAGCAGCACATGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCCGGGGGGAG TATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAG
GAGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGAAAACTTACCAGGT CCAGACATAGGTAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTTTCATGATTCTATGGG TGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCC GTTAACGAACGAGACCTCGGCCTACTAAATAGTGCGTGGTATGGCAACAT AGTACGTTTTAACTTCTTAGAGGGACATGTCCGGTTTACGGGCAGGAAGTT CGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTTTGGGCCGCACGCGC GCTACACTGATGGGTTCATTAGGGCAGAGTTATATTTTAGGATATTGACTG CTTCT
Khi so sánh trình tự gen dòng M6 với ngân hàng GenBank trên NCBI đã cho thấy được dòng M6 có sự đồng hình với Schizochytrium sp. KRT1 với 98%.
Hình 20. Kết quả BLAST từ NCBI của dòng M6 4.5. Xây dựng cây phả hệ:
Dựa vào trình tự của ba dòng vi tảo B3, M6 và D14, cây phả hệ được xây dựng bằng phần mềm MEGA 6.0 bằng phương pháp Maximum likelihood với số bootstrap là 1.000.
Cây phả hệ của dòng B3:
Kết quả BLAST từ NCBI (Hình 18) cho thấy dòng B3 này có sự đồng hình cao nhất với dòng Schizochytrium sp. SKA10, nhưng từ cây phả hệ (Hình 21) có thể thấy rằng dòng B3 có mối quan hệ họ hàng rất gần với dòng Aurantiochytrium sp. BR- MP4-A1. Cũng như trong cây phả hệ của dòng B3 chúng ta có thể thấy được rằng 2 dòng vi tảo Schizochytrium và Aurantiochytrium có mối quan hệ mật thiết với nhau, khó có thể phân biệt rõ ràng. Theo nhiều nghiên cứu trước đây, dựa vào các đặc điểm hình thái thì 2 chi Aurantiochytrium và Schizochytrium được xếp vào cùng 1 chi là
Schizochytrium. Theo nghiên cứu của Yokoyama và Honda (2007), dựa vào kỹ thuật sinh học phân tử, chi Aurantiochytrium đã được tách ra khỏi chi Schizochytrium. Mặc dù vậy, trong nghiên cứu này, dựa vào cây phả hệ, hai chi Aurantiochytrium và
Schizochytrium đều cùng thuộc về một nhóm. Như vậy, dòng B3 có thể thuộc về cả 2 nhóm Schizochytrium và Aurantiochytrium.
Cây phả hệ của dòng M6:
Tương tự như dòng B3, dòng M6 có kết quả BLAST (Hình 22) từ NCBI đồng hình cao nhất với Schizochytrium sp. KRT1, và kết quả cây phả hệ (Hình 22) cho thấy mối quan hệ thân thuộc với các dòng thuộc Aurantiochytrium và Schizochytrium. Từ đó cũng cho thấy được rằng dòng M6 có thể cũng thuộc về 2 nhóm Aurantiochytrium
và Schizochytrium.
Cây phả hệ của dòng D14:
Dựa vào cây phả hệ (Hình 23) cũng như kết quả BLAST (Hình 19) từ NCBI có thể thấy được rằng dòng D14 có thuộc chi Thraustochytrium.
Cây phả hệ chung cho 3 dòng vi tảo B3, M6 và D14:
Dựa vào cây phả hệ có thể thấy được rằng 3 dòng vi tảo B3, M6 và D14 có mối quan hệ gần gũi với nhau, ba dòng vi tảo này đều được phân lập ở các vùng biển thuộc Đồng Bằng Sông Cửu Long. Đặc biệt, 2 dòng vi tảo B3 và M6 có mối quan hệ gần gũi hơn so với dòng D14. Cây phả hệ cũng cho thấy dòng B3 và M6 thuộc 2 dòng vi tảo
Auratiochytrium và Schizochytrium, trong khi dòng D14 thuộc nhóm
Thraustochytrium. Điều này cũng phù hợp với kết quả nhận diện của các cặp mồi trong nghiên cứu này. Từ đó cho thấy các cặp mồi chuyên biệt được thiết kế trong nghiên cứu này có thể được sử dụng để nhận diện nhanh vi tảo cho hiệu quả cao. Cũng từ cây phả hệ cho thấy 3 dòng vi tảo B3, M6 và D14 có khoảng cách di truyền xa so với 2 loài vi tảo Thraustochytrium striatum và Thraustochytrium aureum. Điều này cũng phù hợp với kết quả nhận diện của hai cặp mồi chuyên biệt cho hai loài vi tảo này.
CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận
Trong số 9 dòng vi tảo nghiên cứu, bằng kết quả nhận diện của các cặp mồi được thiết kế cho thấy tất cả 9 dòng đều thuộc nhóm Thraustochytrium và Schizochytrum, trong đó có 2 dòng thuộc Thraustochytrium (dòng D14 và M19) và 7 dòng thuộc
Schizochytrium (B1, B3, M3, M6, M7, M8 và M10).
5.2. Đề nghị
Hai cặp mồi chung để nhận diện Thraustochytrium và Schizochytrium, và cặp mồi chuyên biệt nhận diện dòng Schizochytrium cần được nghiên cứu sâu hơn trên nhiều dòng vi tảo thuộc thraustochytrid.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Anh
Aki, T., K. Hachida, M. Yoshinaga, Y. Katai, T. Yamasaki, S. Kawamoto, T. Kakizono, T. Maoka, S. Shigeta, O. Suzuki and K. Ono. 2003. Thraustochytrid as a potential source of carotenoids. J. Am. Oil Chem. Soc, 80:789-794
Arafiles, K.H.V., J.C.O. Alcantara, J.A.L. Batoon, F.S. Galura, P.R.F. Cordero, E.M. Leaño and G.R. Dedeles. 2011. Cultural optimization of Thraustochytrids for biomass and fatty acid production. Mycosphere, 2(5):521–531.
Bongiorni, L., R. Jain, S. Raghukumar and R.K. Aggarwal. 2005. Thraustochytrium gaertnerium sp. nov.: a New Thraustochytrid Stramenopilan Protist from Mangroves of Goa, India. Protist, vol.156, pp.303-315.
Bremer, G.B. 1976. The ecology of marine lower fungi. Recent Advances in Aquatic Mycology. Elek Sclence. London, pp.313-331.
Bremer, G.B. 1995. Lower marine fungi (Labyrinthulomycetes) and the decay of mangrove leaf litter. Hydrobiologia, 295: 89-95
Bremer, G.B. and G. Talbot. 1995. Cellulolytic enzyme activity in the marine protist SchizochyMum aggregatum. Bot Mar., 38: 37-41
Burja, A.M., H. Radianingtyas, A. Windust and C.J. Barrow. 2006. Isolation and characterization of polyunsaturated fatty acid producing Thraustochytrium species: screening of strains and optimization of omega-3 production. Appl Microbiol Biotechnol, 72(6):1161-1169.
Burja, A.M., R.E. Armenta, H. Radianingtyas and C.J. Barrow. 2007. Evaluation of Fatty Acid Extraction Methods for Thraustochytrium sp. ONC-T18. J. Agric. Food Chem., 55, pp.4795−4801.
Carvalho, A.P., L.A. Meireles and F.X. Malcata, 2006. Microalgal reactors: a review of enclosed system designs and performances. Biotechnol. Prog, 22: 1490-1506.
Cavalier-Smith, T., M.T.E.P. Allsopp and E.E. Chao. 1994. Thraustochytrids are chromists, not fungi: 18S rDNA signatures of heterokonia. Philos Trans R Soc Lond Ser B Biol Sci, 346:387-397.
Chatdumrong, W., W. Yongmanitchai, S. Limtong and W. Worawattanamateekul. 2007. Optimization of docosahexaenoic acid (DHA) production and
improvement of astaxanthin content in a Schizochytrium limacinum isolated from mangrove forest in Thailand. Kasetsart Journal (Nat. Schi.), 41: 324-334. Coleman, N.Y. and J.R. Vestal. 1987. An epifluorescent microscopy study of
enzymatic hydrolysis of fluorescein diacetate associated with the ectoplasmic net elements of the protist Thraustochytrium striatum. Can J Microbiol, 33:841-843 Colorado State University. n.d. Agarose Gel Electrophoresis of DNA. Retrieved June
13, 2014, from http://www.arbl.cvmbs.colostate.edu.
Colorado State University. n.d. Principles of Gel Electrophoresis. Retrieved June 12, 2014, from http://www.arbl.cvmbs.colostate.edu.
Croome, R.L. and P.A. Tyler. 1985. Distribution of silica-scaled Chrysophyceae (Paraphysomonadaceae and Mallomonadaceae) in Australian inland waters.
Australian Journal of Marine and Freshwater Research, 36(6): 839-853.
Fell J.W. and S.Y. Newell. 1998. Molecular approaches to the study of the ocean, Chapter 12. Chapman & Hall Publishers, London, pp.262-263.
Fitch Haumann, B. 1999. Alternative sources for n-3 fatty acids. INFORM, 9:1108– 1119
Gandhi, S.R., and Weete, J.D. 1991. Production of the polyunsaturated fatty acids arachidonic acid and eicosapentaenoic acid by the fungus Pythium ultimum. J Gen Microbiol, 137:1825–1830
Giuseppe, C.Z. and M.L. Gijsbert, 2005. Molecular phylogeny of the genus Tribonema
(Xanthophyceae) using rbcL gene sequence data: monophyly of morphologically simple algal species. Phycologia, 44(4):384-392.
Gordon, D.A. and S.J. Giovannoni, 1996. Detection of stratified microbial populations related to Chlorobium and Fibrobacter species in the Atlantic and Pacific Oceans. Appl Environ Microbiol, 62:1171-1177.
Hall, B.G. 2008. Phylogenetic Trees Made Easy: A How-to Manual 3rd Ed. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts, pp. 60-160.
Hall, B.G. 2013. Building Phylogenetic Trees from Molecular Data with MEGA. Mol Biol Evol., 30(5): 1229-1235
Hibberd, D.J. and G.F. Leedale, 1971. A new algal class - The Eustigmatophycaee.
Honda, D., T. Yokochi, T. Nakahara, S. Raghukumar, A. Nakagiri, K. Schumann and T. Higashihara. 1999. Molecular phylogeny of Labyrinthulids and Thraustochytrids based on the sequencing of 18S ribosomal RNA gene. J. Eukaryot. Microbiol, 46(6):637-647.
Jostensen, J.P., and Landfald, B. 1997. High prevalence of polyunsaturated fatty acid– producing bacteria in arctic invertebrates. FEMS Microbiol Lett, 151:95–101. Kinsella, J.E. 1987. Seafoods and Fish Oils in Human Health and Disease. New York:
Marcel Decker.
Krienitz, L., B. Christina, K. Kotut and L. Wei. 2012. Picocystis salinarum
(Chlorophyta) in saline lakes and hot springs of East Africa. Phycologia
51(1):22-32.
Lewis T. E., P. D. Nichol and T. A. McMeekin. 1999. The biotechnological potential of thraustochytrids. Mar Biotechnol, 1:580-587.
Lewis, T.E., Mooney, B.D., McMeekin, T.A., and Nichols, P.D. 1998a. New Australian microbial sources of polyunsaturated fatty acids. Chem Aust, 65:37– 39.
Lewis, T.E., Nichols, P.D., Hart, P.R., Nichols, D.S., and McMeekin, T.A. 1998b. Enrichment of rotifers (Brachionus plicatilis) with eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid produced by bacteria. J World Aquacult Soc, 29:313–318 Lombardi, A.T. and A.A.H. Vieira, 1998. Copper and lead complexation by high
molecular weight compounds produced by Synura sp. (Chrysophyceae).
Phycologia, 37(1):34-39.
Marie, A.R.T. and M.O. Larrance, 1976. Influence of pesticides on Chlorella,
Chlorococcum, Stigeoclonium (Chlorophyceae), Tribonema, Vaucheria
(Xanthophyceae) and Oscillatoria (Cyanophyceae). Phycologia 15(1):25-36. Michael, J.W. and S. Loiseaux, 1976. Recent advances in life history studies of the
Phaeophyta. Phycologia 15 (3 and 4):435-452.
Mo, C., J. Douek and B. Rinkevich. 2002. Development of a PCR strategy for thraustochytrid identification based on 18S rDNA sequence. Marine Biology,
Molyneaux, M., and Chong, M.L. 1998. The U.S. market for marine nutraceutical products. Food Technol, 52:56–57.
Moss, S.T. 1986. Biology and phylogeny of the Labyrinthuales and Thraustochytoriales. In Moss ST (ed) The biology of marine fungi. Cambridge Universlty Press, Cambridge, pp.105-129.
Mukherjee, K.D. 1999. Production and use of microbial oils. INFORM, 10:308–313. Naganuma, T., H. Takasugi and H. Kirnura. 1998. Abundance of thraustochytrids in
costal plankyon. Mar Ecol Prog Ser, 162:105-110
Nakahara T., T. Yokochl, T. Higashihara, S. Tanaka, T. Yaguchi and D. Honda. 1996. Production of docosahexaenoic and docosapentaenoic acid by Schizochytrium sp. isolated from Yap Islands. JAOCS, 73:1421-1426
New, M., and Csavas, I. 1995. The use of marine resources in aquafeeds. In:
Sustainable Fish Farming: Proceedings of the First International Symposium on Sustainable Fish Farming, Reinertsen, H., and Harlaand, H. (eds.). Rotterdam: A.A. Balkema, pp.43–78.
Nichols, D.S., Hart, P., Nichols, P.D., and McMeekin, T.A. 1996. Enrichment of the rotifer Brachionus plicatilis fed an Antarctic bacterium containing polyunsaturated fatty acids. Aquaculture, 147:115–125.
Nichols, D.S., Nichols, P.D., and McMeekin, T.A. 1993. Polyunsaturated fatty acids in Antarctic bacteria. Antarct Sci, 5:149–160.
Paul, A.B., O. Shuji and I. Manfred, 1997. A comparison of strains of Xanthonema (Heterothrix, Tribonematales, Xanthophyceae) from Antarctica, Europe, and New Zealand. Phycologia, 36(2):164-171.
Paula, E.J. de and E.C. Oliveira, 1982. Wave exposure and ecotypical differentiation in Sargassum cymosum (Phaeophyta - Fucales). Phycologia, 21(2):145-153. Perveen, Z., H. Ando, A. Ueno, Y. Ito, Y. Yamamoto, Y. Yamada, T. Takagi, T.
Kaneko, K. Kogame and H. Okuyama, 2006. Isolation and characterization of a novel thraustochytrid like microganism that efficiently produces docosahexaenoic acid. Biotechnol Lett, 28(3):197-202.
Phillips, T. n.d. Requisites for Superior PCR Results. Retrived June 12, 2014, from http://biotech.about.com.
Pike, I.H., and Barlow, S.M. 1999. Fish meal and oil to the year 2010: supplies for aquaculture. Presented at World Aquaculture, Sydney, Australia. Abstract, 603. Prasad, A.K.S.K., J.A. Nienow, and R.J. Livingston, 1990. The genus Cyelotella
(Bacillariophyta) in Choctawhatchee Bay, Florida, with special reference to C. striata and C. choctawhatcheeana sp. nov. Phycologia: , 29(4): 418-436.
Raghukumar, S., C. Rahukumar and A. Rajendran. 1990. Abundance of thraustochytrid fungi in the Arabian Sea. Estuar Coast Shelf Sci, 31:351-358. Raschke, R.L., 1993. Diatom (Bacillariophyta) community response to phosphorus in
the Everglades National Park, USA. Phycologia, 32(1): 48-58.
Ratledge, C. 1993. Single cell oils—have they a biotechnological future? Trends Biotechnol., 11:278–284.
Rees, J.F., Cure, K., Piyatiratitivorakul, S., Sorgeloos, P., and Menasveta, P. 1994. Highly unsaturated fatty acid requirements of Penaeus monodon postlarvae—an experimental approach based on Artemia enrichment. Aquaculture, 122:193–207 Robert, E.D.W., 1976. The phenology of three species of Sargassum (Sargassaceae,
Phaeophyta) in Hawaii. Phycologia, 15(2):175-183.
Rogers, S.O., and A.J. Bendich. 1988. Extraction of DNA from plant tissues. Plant Molecular Biology Manual, A6:1 – 10.
Sajbidor, J., Dobronova, S., and Certik, M. 1990. Arachidonic acid production by
Mortierella sp S-17: influence of C/N ratio. Biotechnol Lett, 12:455–456.
Salhi, M., Izquierdo, M.S., Hernandezcruz, C.M., Gonzalez, M., and
Fernandezpalacios, H. 1994. Effect of lipid and n-3 HUFA levels in microdiets on growth, survival and fatty acid composition of larval Gilthead seabream (Sparus aurata). Aquaculture, 124:275– 282.
Schneider, J. 1977. Fungi. In: Rheinhelmer G (ed) Microbial ecology of a brackish water environment. Springer-Ver- lag, Berlin, pp.90-102.
Shafique S. 2012. Polymerase Chain Reaction: Procedure, Principles, Real time PCR, Optimization, Applications, PCR Arrays, Array System Performance, Protocol, Variations. Lambert Academic Publishing, pp.15-17.
Simopoulos, A.P. 1989. Summary of NATO Advanced Research Workshop on dietary w3 and w6 fatty acids: biological effects and nutritional essentiality. J Nutr,
119:521–528.
Sylvia, A.E., 1968. Phaeophyta of the Eastern Gulf of Mexico. Phycologia 7(2):71- 254.
Tacon, A.G.J. 1995. Feed ingredients for carnivorous fish species: alternatives to fishmeal and other fishery resources. In: Sustainable Fish Farming; Proceedings of the First International Symposium on Sustainable Fish Farming, Reinertsen, H., and Harlaand, H. (eds.). Rotterdam: A.A. Balkema, pp.89–116
Tacon, A.G.J. 1997. Aquafeeds and feeding strategies. FAO Fisheries Circular 886 (Rev 1) 1–6.
Takahata, K., Monobe, K., Tada, M., and Weber, P.C. 1998. The benefits and risks of n-3 polyunsaturated fatty acids. Biosci Biotechnol Biochem, 62:2079–2085. Tatyana, A.K., Sung-Ho Kang, Ga Youn Cho, Curt M. Pueschel, John A. West, and
Gwang Hoon Kim, 2006. Biology of a terrestrial green alga, Chlorococcum sp. (Chlorococcales, Chlorophyta), collected from the Miruksazi stupa in Korea.
Phycologia, 45(3):349-358.
Vierstraete, A. 1999. Principle of the PCR. Retrieved from
http://users.ugent.be/~avierstr/principles/pcr.html.
Volkman, J.K., Jeffrey, S.W., Nichols, P.D., Rogers, G.I., and Garland, C.D. 1989. Fatty acid and lipid composition of 10 species of microalgae used in mariculture.
J Exp Mar Biol Ecol, 128:219–240.
Ward, O. 1995. Microbial production of long-chain PUFAs. INFORM, 6:683–688. Watanabe, K., Sezaki, K., Yazawa, K., and Hino, A. 1992. Nutritive fortification of
the rotifer Brachionus plicatilis with eicosapentaenoic acid-producing bacteria.
Nippon Suis Gakkai, 58:271– 276.
Yamaoka, Y., M.L. Carmona and S. Oota. 2004. Growth and Carotenoid Production of Thraustochytrium sp. CHN-1 Cultured under Superbright Red and Blue Light- emitting Diodes. Biosci. Biotechnol. Biochem., 68 (7): 1594-1597.
Yang, H.L., C.K. Lu and S.F. Chen. 2009. Isolation and Characterization of Taiwanese Heterotrophic Microalgae: Screening of Strains for Docosahexaenoic Acid (DHA) Production. Mar Biotechnol, 12:173-185.
Yokochi, T., Honda, D., Nakahara, T., and Higashihara, T. 1997. Classification of DHA-producing thraustochytrids by their fatty acid profile. Presented at the 4th International Marine Biotechnology Conference, Italy. Abstract, 263.
Yokoyama R. and D. Honda. 2007. Taxonomic rearrangement of the genus
Schizochytrium sensu lato based on morphology, chemotaxonomic
characteristics, and 18S rRNA gene phylogenety (Thraustochytriaceae, Labyrinthulomycetes): emendation for Schizochytrium and erection of
Aurantiochytrium and Oblongichytrium gen. nov. Mycoscience, 48:199-211. Tiếng Việt
Dương Tấn Phát. 2013. Phân lập một số dòng vi tảo biển dị dưỡng Thraustochytrid sản xuất carotenoid ở tỉnh Cà Mau. Luận văn tốt nghiệp Đại học. Viện Nghiên Cứu và Phát Triển Công Nghệ Sinh Học. Đại Học Cần Thơ.
Hoàng Thị Lan Anh, Đinh Thị Ngọc Mai, Ngô Thị Hoài Thu và Đặng Diễm Hồng. 2010. Phân lập chủng vi tảo biển dị dưỡng mới thuộc chi Thraustochytrium giàu DHA và carotenoid từ đầm ngập mặn Thị Nại - Bình Định. Tạp chí Công nghệ Sinh học. 8(3A). tr:459-465.
Lê Bích Tuyền. 2013. Phân lập và nhận diện một số dòng vi tảo biển dị dưỡng có khả năng sản xuất carotenoid. Luận văn tốt nghiệp Cao học. Viện Nghiên Cứu và Phát Triển Công Nghệ Sinh Học. Đại Học Cần Thơ.
Mạc Văn Trọng. 2013. Thiết bị điện di. Khoa Công Nghệ Sinh Học - Đại Học Văn Lang
Nguyễn Lân Dũng và Nguyễn Hoài Hà. 2006. Chương trình vi sinh vật học. Vietsciences, Hà Nội.
Trần Nhân Dũng và Nguyễn Vũ Linh. 2011. Giáo trình Tin Sinh Học. Nhà Xuất Bản Đại Học Cần Thơ, trang 65-81.
Trần Thị Xuân Mai, Nguyễn Thị Liên, Lê Bích Tuyền và Dương Tấn Phát. 2014.
Nhận diện và tuyển chọn một số dòng vi tảo biển dị dưỡng Thraustochytrid có khả năng sản xuất acid béo không no và carotenoid ở một số vùng biển thuộc
Đồng bằng Sông Cửu Long. Đề tài Khoa học và Công nghệ cấp Trường. Đại học