Xác định hàm lượng ergosterol trong cao PE

2.4.4.1. Khảo sát độ hấp thu cực đại của ergosterol [2]

Đo phổ tử ngoại – khả kiến của mẫu chuẩn ở bước sóng 275 – 290 nm. Chọn bước sóng làm bước sóng đo độ hấp thu (OD) cho ergosterol để định lượng.

2.4.4.2. Dựng đường chuẩn

Cân chính xác 1 mg ergosterol chuẩn hòa vào MeOH và định mức chính xác 10 ml. Ta được dung dịch chuẩn trong MeOH với nồng độ chất chuẩn là 100 μg/ml. Từ dung dịch mẫu chuẩn ban đầu tiến hành khảo sát trên 7 ống nghiệm với nồng độ ergosterol chuẩn từ 10–50 μg/ml.

Quy trình xây dựng đường chuẩn.

Thứ tự ống 1 2 3 4 5 6 7

Dung dịch chuẩn 100 μg/ml (ml) 1 2 2,5 3 3,5 4 5 Hòa với MeOH định mức thành 10 ml

Nồng độ chuẩn (μg/ml) 10 20 25 30 35 40 50 Lắc đều, khảo sát bước sóng hấp thụ của ergosterol.

2.4.4.2. Xác định hàm lượng ergosterol trong mẫu

Dung dịch thử: Cân khoảng 100 - 200 mg mẫu cần phân tích, sấy ở 105oC đến khối lượng không đổi, hòa trong MeOH, pha loãng mẫu sao cho mẫu có nồng độ từ 10 - 50 μg/ml. Đem đo OD tại bước sóng đã khảo sát ở chất chuẩn.

Dung dịch chuẩn: Hòa tan 250 g ergosterol trong 10 ml MeOH được dung dịch chuẩn có nồng độ 25 g/ml.

Đo độ hấp thu các mẫu ở bước sóng hấp thu cực đại trên máy quang phổ tử ngoại khả kiến.

Công thức tính hàm lượng ergosterol trong cao:

c c t C m d OD OD C%  104 

Với m: khối lượng mẫu cao đem thử (g) OD t: độ hấp thu của mẫu thử. ODc: độ hấp thu của mẫu chuẩn. Cc: nồng độ dung dịch chuẩn (g/ml).

d: độ pha loãng