phiến lá và cuống lá của cây Đương quy Nhật Bản in vitro
2.2.3.1. Thí nghiệm 3a: Mẫu cấy phiến lá
Vật liệu
Mẫu cấy xuất phát từ chồi in vitro được nuôi cấy trước đó trên môi trường khoáng MS, vitamin Morel có bổ sung 30 g l-1
thứ 2 tính từ chồi ngọn xuống được cắt thành 3 phần, rạch 3 đường tạo thành 3 vết thương trên mỗi phần (Hình 2.1).
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm kế thừa kết quả của thí nghiệm trước, môi trường thí nghiệm có thành phần khoáng B5 và vitamin B5 có bổ sung 30 mg l-1
sucrose, 8 mg l-1 agar, 6 mg l-1 NAA.
Thí nghiệm có 2 yếu tố:
- Yếu tố A là loại cytokinin, có 3 mức độ: BA, kinetin hoặc TDZ.
- Yếu tố B là nồng độ của mỗi loại cytokinin, có 3 mức độ: 0,1; 0,5 hoặc 1 mg l-1 Bảng 2.5. Bố trí thí nghiệm 3a
Số TT
Tên
Nghiệm thứcx Loại cytokinin Nồng độ cytokinin mg l-1 1 B0,1 BA 0,1 2 B0,5 BA 0,5 3 B1 BA 1,0 4 K0,1 Kinetin 0,1 5 K0,5 Kinetin 0.5 6 K1 Kinetin 1,0 7 T0,1 TDZ 0,1 8 T0,5 TDZ 0,5 9 T1 TDZ 1,0
Ghi chú: xB, K, T bên trái đại diện cho BA, Kinetin hoặc TDZ; các số bên phải đại diện cho nồng độ (0,1; 0,5 hoặc 1 mg l-1
).
Điều kiện thí nghiệm
- Môi trường nuôi cấy có thành phần khoáng B5, vitamin B5, 30 g l-1
sucrose , 8 g l-1 agar, 6 mg l-1 NAA. Môi trường được điều chỉnh pH đến 5,8 và hấp vô trùng ở 121 oC, 1 atm trong thời gian 20 phút.
- Bình nuôi cấy dạng chai nước biển (V = 130 ml) chứa 18 ml môi trường. - Thí nghiệm có 9 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 3 bình, được lặp lại 3 lần,
mỗi bình chứa 1 mẫu cấy là 1 phiến lá. Tổng số mẫu cấy là 81 mẫu. - Mẫu được nuôi trong tối, ở nhiệt độ phòng 24 + 2 oC, độ ẩm 65 + 5 %. - Thời gian thí nghiệm: 42 ngày.
Chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ mẫu chết (%)
- Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) - Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) - Số rễ/mẫu
- Chiều dài rễ/mẫu (mm)
- Trọng lượng tươi rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng khô rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng tươi mẫu (mg) - Trọng lượng khô mẫu (mg) - TLT rễ/TLT mẫu (%) - TLK rễ/TLK mẫu (%) - (%) chất khô rễ
2.2.3.2. Thí nghiệm 3b: Mẫu cấy cuống lá
Vật liệu
Mẫu cấy xuất phát từ chồi in vitro được nuôi cấy trước đó trên môi trường khoáng MS, vitamin Morel có bổ sung 30 g l-1
sucrose. Mỗi mẫu là 1 cuống lá của lá thứ 2 tính từ chồi ngọn xuống, được cắt thành 3 phần, rạch 6 đường tạo thành 6 vết thương trên mỗi phần (Hình 2.1).
Bố trí thí nghiệm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thí nghiệm kế thừa kết quả của thí nghiệm trước, môi trường thí nghiệm có thành phần khoáng B5 và vitamin B5 có bổ sung 30 mg l-1
sucrose, 8 mg l-1 agar, 6 mg l-1 NAA.
Thí nghiệm 2 yếu tố:
- Yếu tố A là loại cytokinin, có 3 mức độ: BA, kinetin hoặc TDZ.
- Yếu tố B là nồng độ của mỗi loại cytokinin, có 3 mức độ: 0,1; 0,5 hoặc 1 mg l-1 Bảng 2.6. Bố trí thí nghiệm 3b
Số TT
Tên
Nghiệm thứcx Loại cytokinin Nồng độ cytokinin mg l-1 1 B0,1 BA 0,1 2 B0,5 BA 0,5 3 B1 BA 1,0 4 K0,1 Kinetin 0,1 5 K0,5 Kinetin 0.5 6 K1 Kinetin 1,0 7 T0,1 TDZ 0,1 8 T0,5 TDZ 0,5 9 T1 TDZ 1,0
Ghi chú: xB, K, T bên trái đại diện cho BA, Kinetin hoặc TDZ; các số bên phải đại diện cho nồng độ (0,1; 0,5 hoặc 1 mg l-1
).
Điều kiện thí nghiệm
- Môi trường nuôi cấy có thành phần khoáng B5, vitamin B5, 30 g l-1 sucrose , 8 g l-1 agar, 6 mg l-1 NAA. Môi trường được điều chỉnh pH đến 5,8 và hấp vô trùng ở 121 o
C, 1 atm trong thời gian 20 phút.
- Bình nuôi cấy là chai nước biển (V = 130 ml) chứa 18 ml môi trường.
- Thí nghiệm có 9 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 3 bình, được lặp lại 3 lần, mỗi bình chứa 1 mẫu cấy là 1 cuống lá. Tổng số mẫu cấy là 81 nmẫu.
- Mẫu được nuôi trong tối, ở nhiệt độ phòng 24 + 2 oC, độ ẩm 65 + 5 %. - Thời gian thí nghiệm: 42 ngày.
Chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ mẫu chết (%)
- Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) - Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) - Số rễ/mẫu
- Chiều dài rễ/mẫu (mm)
- Trọng lượng tươi rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng khô rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng tươi mẫu (mg) - Trọng lượng khô mẫu (mg) - TLT rễ/TLT mẫu (%) - TLK rễ/TLK mẫu (%) - (%) chất khô rễ