trí khác nhau của cây Đương quy Nhật Bản in vitro dưới sự ảnh hưởng của thành phần khoáng và vitamin trong môi trường nuôi cấy
2.2.2.1. Thí nghiệm 2a: Mẫu cấy phiến lá
Vật liệu
Mẫu cấy xuất phát từ chồi in vitro được nuôi cấy trước đó trên môi trường MS có bổ sung 30 g l-1 sucrose. Mỗi mẫu là 1 phiến lá của lá thứ 2, thứ 3 hoặc thứ 4 tính từ chồi ngọn xuống được cắt thành 3 phần, rạch 3 đường tạo thành 3 vết thương trên mỗi phần (Hình 2.1).
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm kế thừa kết quả của thí nghiệm trước, môi trường thí nghiệm có bổ sung 30 mg l-1 sucrose, 8 mg l-1 agar, 6 mg l-1 NAA và 1 mg l-1 kinetin.
Thí nghiệm 2 yếu tố:
- Yếu tố A là thành phần môi trường, có 2 mức độ: khoáng MS và Vitamin Morel hoặc khoáng B5 và vitamin B5.
- Yếu tố B là vị trí mẫu, có 3 mức độ: lá mở 2, 3 hoặc 4 tính từ chồi ngọn xuống Bảng 2.3. Bố trí thí nghiệm 2a STT Tên Nghiệm thứcx Thành phần môi trường Vị trí lá Khoáng Vitamin 1 M2 MS Morel 2 2 M3 MS Morel 3 3 M4 MS Morel 4 4 B2 B5 B5 2 5 B3 B5 B5 3 6 B4 B5 B5 4
Ghi chú: xM hoặc B bên trái đại diện cho khoáng MS, vitamin Morel hoặc khoáng B5, vitamin B5, các số bên phải đại diện cho vị trí lá thứ 2, 3 hoặc 4
Điều kiện thí nghiệm
- Môi trường nuôi cấy có thành phần khoáng MS, vitamin Morel, 30 g l-1
sucrose, 8 g l-1 agar. Môi trường được điều chỉnh pH đến 5,8 và hấp vô trùng ở 121o
C, 1 atm trong thời gian 20 phút.
- Bình nuôi cấy dạng chai nước biển (V = 130 ml) chứa 18 ml môi trường. - Thí nghiệm có 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 5 bình, được lặp lại 3 lần,
mỗi bình chứa 1 mẫu cấy là 1 phiến lá. Tổng số mẫu cấy là 90 mẫu. - Mẫu được nuôi trong tối, ở nhiệt độ phòng 24 + 2 o
C, độ ẩm 65 + 5 % - Thời gian thí nghiệm: 42 ngày.
Chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ mẫu chết (%)
- Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) - Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) - Số rễ/mẫu
- Chiều dài rễ/mẫu (mm)
- Trọng lượng tươi rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng khô rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng tươi mẫu (mg) - Trọng lượng khô mẫu (mg) - TLT rễ/TLT mẫu (%) - TLK rễ/TLK mẫu (%) - (%) chất khô rễ
2.2.2.2. Thí nghiệm 2b: Mẫu cấy cuống lá
Mẫu cấy xuất phát từ chồi in vitro được nuôi cấy trước đó trên môi trường MS có bổ sung 30 g l-1
sucrose. Mỗi mẫu là 1 cuống lá của lá thứ 2, thứ 3 hoặc thứ 4 tính từ chồi ngọn xuống được cắt thành 3 phần, rạch 6 đường tạo thành 6 vết thương trên mỗi phần (Hình 2.3).
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm kế thừa kết quả của thí nghiệm trước, môi trường thí nghiệm có bổ sung 30 mg l-1 sucrose, 8 mg l-1 agar, 6 mg l-1 NAA và 1 mg l-1 kinetin.
Thí nghiệm 2 yếu tố:
- Yếu tố A là thành phần môi trường, có 2 mức độ: khoáng MS và Vitamin Morel hoặc khoáng B5 và vitamin B5.
- Yếu tố B là vị trí mẫu, có 3 mức độ: lá mở 2, 3 hoặc 4 tính từ chồi ngọn xuống Bảng 2.4. Bố trí thí nghiệm 2b
STT Tên
Nghiệm thứcx
Thành phần môi trường Vị trí cuống lá Khoáng Vitamin 1 M2 MS Morel 2 2 M3 MS Morel 3 3 M4 MS Morel 4 4 B2 B5 B5 2 5 B3 B5 B5 3 6 B4 B5 B5 4
Ghi chú: xM hoặc B bên trái đại diện cho khoáng MS, vitamin Morel hoặc khoáng B5, vitamin B5, các số bên phải đại diện cho vị trí lá thứ 2, 3 hoặc 4.
Điều kiện thí nghiệm
- Môi trường nuôi cấy có thành phần khoáng MS, vitamin Morel, 30 g l-1 sucrose, 8 g l-1 agar. Môi trường được điều chỉnh pH đến 5,8 và hấp vô trùng ở 121o
C, 1 atm trong thời gian 20 phút.
- Bình nuôi cấy dạng chai nước biển (V = 130 ml) chứa 18 ml môi trường. - Thí nghiệm có 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức có 5 bình, được lặp lại 3 lần,
mỗi bình chứa 1 mẫu cấy là 1 cuống lá. Tổng số mẫu cấy là 90 mẫu. - Mẫu được nuôi trong tối, ở nhiệt độ phòng 24 + 2 oC, độ ẩm 65 + 5 %. - Thời gian thí nghiệm: 42 ngày.
Chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ mẫu chết (%)
- Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%) - Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) - Số rễ/mẫu
- Chiều dài rễ/mẫu (mm)
- Trọng lượng tươi rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng khô rễ/mẫu (mg) - Trọng lượng tươi mẫu (mg) - Trọng lượng khô mẫu (mg) - TLT rễ/TLT mẫu (%) - TLK rễ/TLK mẫu (%) - (%) chất khô rễ