3.3.1Phương pháp lấy mẫu
Mẫu phân tích (30 mẫu thức ăn hỗn hợp cho gà) được lấy ngẫu nhiên từ công ty Vinacert - Chi nhánh Cần Thơ.
3.3.2Phương pháp phân tích
Mẫu được xay cho đồng nhất, lấy một lượng nhất định hòa tan bằng MeOH:H2O (4:1), lắc và ly tâm bỏ cắn. Dịch lọc được sử dụng để thực hiện chiết pha rắn để làm sạch và làm giàu mẫu. Mẫu được thổi khô sau đó được định mức lại bằng H2O:ACN (4:1) và đem tiến hành phân tích bởi hệ thống HPLC-MS/MS.
3.3.3Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu được xử lý bằng chương trình ứng dụng Microsoft Excel.
Hoạch định thí nghiệm
3.4
- Tối ưu hóa hệ thống HPLC-MS/MS. - Tối ưu hóa quy trình chiết.
36
- Tiến hành phân tích trên một số mẫu tại công ty Vinacert.
Tiến hành thí nghiệm
3.5
3.5.1Tối ưu hóa hệ thống HPLC-MS/MS [12], [13]
Khảo sát một số điều kiện chạy máy HPLC được công bố trên một số bài báo uy tín, kết hợp điều kiện sẵn có của phòng thí nghiệm để chọn các thông số tối ưu cho hệ thống.
Điều kiện hệ thống HPLC-MS/MS 1 (Phương pháp 1):
Nghiên cứu của Amedeo Pietri và cộng sự (2010) đã tìm được điều kiện cho hệ thống HPLC-MS/MS như sau:
- Kích thước cột: cột pha đảo C18, 150 mm x 2,1 mm, 5μm; - Thể tích tiêm: 5 μL;
- Tốc độ dòng 0,3 mL/phút; - Pha động A: ACN;
- Pha động B: H2O;
Cả hai pha được acid hóa với 0,4% acid acetic. Tại thời điểm bắt đầu, pha động A/pha động B (A/B) là 15/85; tăng dần tuyến tính đến tỉ lệ A/B là 65/35 trong vòng 9 phút, giữ nguyên tỉ lệ pha động và chạy tiếp 5 phút.
Bảng 3.1 Một số thông số cài đặt cho MS1
Source ESI+
Collision Gas Argon
Spray capillary voltage 4 kV
Sheath gas Nitrogen, 41 psi
Auxiliary gas Nitrogen, 5 psi
TEM 270 oC
Điều kiện hệ thống HPLC-MS/MS 2 (Phương pháp 2):
Nghiên cứu của Riwei Wei và cộng sự (2013) đã tìm được điều kiện tối ưu để phân tích aflatoxins và ochrotoxin A. Điều kiện như sau:
- Kích thước cột: C18, 50 mm x 2,5 mm, 3,5 μm; - Pha động A: H2O;
37
Cả hai pha đều có 0,1% FA. Bắt đầu chạy với tỷ lệ A/B là 90/10 trong vòng 0,6 phút, thay đổi tuyến tính đến tỉ lệ A/B là 5/95, giữ 2,5 phút. Sau đó trả về tỉ lệ ban đầu là 90/10.
Bảng 3.2 Một số thông số cài đặt cho MS2
Source ESI+
Ion spray voltage 5500 V
Curtain gas 15 psi
Ion source gas 1 55 psi
Ion source gas 2 50 psi
Điều kiện hệ thống HPLC-MS/MS 3:
Sau khi tham khảo các bài báo từ những nhà nghiên cứu khác nhau, tiến hành thí nghiệm với điều kiện chạy HPLC-MS/MS như sau:
Cột C18, 50 mm x 2 mm, 3,5 µm; Pha động A: H2O;
Pha động B: ACN; Thể tích tiêm: 10 µL; Tốc độ dòng 0,3 mL/phút.
Bảng 3.3 Một số thông sô cài đặt cho MS3
Source ESI+
Ion source Turbo Spray
Curtain gas 25 psi
Ion spray voltage 4500 V
TEM 400 oC
Ion source gas 1 35 psi
38