đến khả năng hạ đ-ờng huyết ở chuột ĐTĐ type 2
Sau khi tiến hành xây dựng mô hình chuột ĐTĐ tpye 2 thành công, chúng tôi tiến hành nghiên cứu khả năng hạ đ-ờng huyết bằng các phân đoạn
độ glucose huyết tăng cao ( 18 mmol/l, sau 72h) tiến hành cho uống cao các phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh. Cụ thể là:
1. Lô 1 nhóm chứng cho uống n-ớc cất (lô đối chứng) 2. Lô 2 điều trị bằng phân đoạn cao ethanol ( 1000mg/kg g) 3. Lô 3 điều trị bằng phân đoạn cao n- hexan ( 1000mg/kg) 4. Lô 4 điều trị bằng phân đoạn cao ethylacetate ( 1000mg/kg) 5. Lô 5 điều trị bằng thuốc metformin ( 500mg/kg)
Sau khi cho uống các phân đoạn của thảo quyết minh chúng tôi tiến hành theo dõi và đo nồng độ glucose máu của chuột.
3.7.2.1 Tác dụng của các phân đoạn dịch chiết lên chuột tiêm STZ sau 10h điều trị
Sau khi hàm l-ợng glucose huyết của chuột tăng cao chúng tôi tiến hành điều trị cho chúng bằng phân đoạn cao ethanol, phân đoạn n- hexan, phân đoạn cao ethylacetate và bằng thuốc metformin, tiến hành đo nồng độ glucose huyết của chuột tại các thời điểm 2h, 4h, 8h và 10h sau khi cho uống các phân đoạn dịch chiết. Sau khi cho uống cao của các phân đoạn dịch chiết thì nồng độ glucose huyết của chuột giảm một cách đáng kể, kết quả đ-ợc trình bày trong bảng 3.16.
Bảng 3.16. ảnh h-ởng của các phân đoạn dịch chiết đến nồng độ glucose huyết (mmol/l) của chuột ĐTĐ type 2
0h 2h 4h 8h 10h %Tăng /giảm Lô 1 23,75 3,05 23,87 1,94 23,92 2,03 23,98 1,16 24,8 1,76 ↑4,42 Lô 2 25,42 2,86 25,83 0,79 25 1,68 24 1,43 23,5 1,01 ↓7,55 Lô 3 23,5 2,9 22,25 2,48 21,75 2,58 20,75 2,45 18,75 2,4 ↓20,21 Lô 4 24,25 3,93 23,33 2,24 20,75 2,17 19,83 2,65 17,83 1,99 ↓26,47 Lô 5 20,87 1,39 20,5 1,21 19,77 0,93 18,37 0,99 17,17 1,09 ↓17,72
0 5 10 15 20 25 30 0h 2h 4h 8h 10h H à m l - ợ n g (m m o l/ l)
Lô 1 Lô 2 Lô 3 Lô 4 Lô 5
Hình 3.13. Biểu đồ sự thay đổi nồng độ glucose (mmol/l) huyết ở chuột ĐTĐ type 2 sau khi uống các phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh 10h
Từ bảng số liệu 3.16 và đồ thị hình 3.13, chúng ta thấy, những con chuột lô đối chứng ( tiêm STZ, không điều trị), chỉ cho uống n-ớc cất thì sau 2, 4, 8, 10 giờ nồng độ glucose huyết không giảm mà còn tăng nhẹ (tăng 4,42%). Trong khi đó ở tất cả các lô đ-ợc điều trị bằng các phân đoạn dịch chiết và metformin với nhóm đối chứng ở cùng thời điểm thì nồng độ glucose huyết đều giảm. Tuy nhiên tác dụng giảm glucose máu ở các phân đoạn có sự khác biệt t-ơng đối. Thể hiện ở lô điều trị bằng dịch chiết phân đoạn ethanol chỉ giảm 7,55%, trong khi đó ở lô điều trị bằng ethylacetate và n - hexan giảm t-ơng đối mạnh, mức giảm t-ơng ứng 26,47% và 20,21% hơn hẳn so với lô điều trị bằng ethanol. Cũng so sánh mức giảm này với lô điều trị bằng metformin thì ta thấy khả năng hạ glucose huyết của 2 phân đoạn này hơn hẳn ( lô điều trị metformin chỉ giảm có 17,72%).
Những lô chuột ở trên, sau khi tiêm STZ thì nồng độ glucose huyết cũng tăng rất cao, có thể ch-a cao so với một số mô hình ĐTĐ type 2 thực nghiệm [59, 61]. Nh-ng khả năng giảm nồng độ glucose huyết của các lô
chiết thảo quyết minh trên mô hình chuột tiểu đ-ờng type 2 thực nghiệm chắc chắn cũng rất khả quan. Về tác dụng chữa bệnh, điều này mở ra h-ớng có thể dùng thảo quyết minh trong hỗ trợ cho các bệnh nhân bị tiểu đ-ờng type 2, cũng nh- các bệnh nhân béo phì.
3.7.2.2.Tác dụng của các phân đoạn dịch chiết lên chuột ĐTĐ type 2 sau 21 ngày điều trị
Với các lô chuột ở trên, sau khi đ-ợc điều trị trong 10h, chúng tôi tiếp tục điều trị cho chúng trong 21 ngày tiếp theo. Kết quả giảm nồng độ glucose của chúng đ-ợc trình bày trong bảng 3.17.
Bảng 3.17. Nồng độ glucose huyết (mmol/) của chuột ĐTĐ type 2 sau 21 ngày điều trị
Lô Ngày 1 ĐT đ-ợc 7 ngày ĐT đ-ợc 14 ngày ĐT đ-ợc 21 ngày % Tăng giảm 1 23,75 3,05 23 0,72 21,83 1,78 19,5 1,31 ↓17,89 2 25,42 2,86 20 2,09 15,5 2,01 12 1,68 ↓52,79 3 23,5 2,9 17,5 1,31 14,08 3,84 11,08 1,93 ↓52,85 4 24,25 3,93 15,92 2,3 11,88 3,28 9,67 2,56 ↓60,12 5 20,87 1,39 16,05 3,52 11,75 3,08 8,67 1,45 ↓58,45
23.75 25.42 23.5 24.25 20.87 20.87 19.5 12 11.08 9.67 8.67 0 5 10 15 20 25 30
Lô 1 Lô 2 Lô 3 Lô 4 Lô 5
H à m l - ợ n g ( m m o l/ l) Ngày 1 Ngày 21 Hình 3.14. Sự thay đổi nồng độ glucose huyết (mmol/l) của chuột ĐTĐ type 2
sau 21 ngày điều trị bằng các phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh Từ bảng số liệu 3.17 và hình 3.14 cho ta thấy, ở tất cả các lô chuột nồng độ glucose máu đều giảm. Ngay ở lô 1 ( béo tiêm STZ, uống n-ớc muối sinh lý) nồng độ glucose máu cũng giảm 17,89%, có thể nhận thấy do sự thay đổi chế độ ăn từ thức ăn giàu lipid sang thức ăn th-ờng, uống n-ớc muối sinh lý thì sau 21 ngày cũng làm nồng độ glucose máu của chuột ĐTĐ type 2 giảm. Tuy nhiên, việc thay đổi chế độ ăn tác động đến việc giảm glucose máu không nhiều so với các lô đ-ợc điều trị bằng cao phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh và metformin. Qua số liệu trên cho thấy tác động làm giảm glucose mạnh nhất là phân đoạn dịch chiết ethylacetate giảm mạnh nhất, giảm 60,12% (p <0,05) t-ơng đ-ơng với chuột điều trị bằng metformin ( giảm 60,85%, p < 0,05) một loại thuốc điều trị ĐTĐ và béo phì đ-ợc bán trên thị tr-ờng hiện nay. Bên cạnh đó, lô chuột đ-ợc điều trị bằng cao phân đoạn ethanol và n - hexan cũng giảm t-ơng đối mạnh, ở lô điều trị bằng n- hexan giảm là 52,85% ( p <0,05), ethanol là 52,79% ( p <0,05). Điều này chứng tỏ trong dịch chiết của cây thảo quyết minh có rất nhiều hợp chất có tác dụng rất tốt trong việc giảm nồng độ glucose máu của chuột ĐTĐ type 2.
Kết luận và kiến nghị
Kết luận
Từ kết quả nghiên cứu thu đ-ợc, chúng tôi đ-a ra những kết luận sau:
1. Kết quả phân tích thành phần hoá học các hợp chất tự nhiên cho thấy trong thành phần cây thảo quyết minh có mặt hầu hết những hợp chất thiên nhiên quan trọng nh-: flavonoid, tannin, alkaloid, glycoside và polyphenol bằng các phản ứng định tính, kỹ thuật sắc ký mỏng. Hàm l-ợng polyphenol trong phân đoạn dịch chiết ethylacetate là cao nhất ( chiếm 7,7% khối l-ợng cao).
2. Đã xây dựng thành công mô hình chuột béo phì thực nghiệm bằng chế độ ăn giầu lipid và cholesterol. ở chuột nuôi bằng chế độ béo sau 6 tuần nuôi, trọng l-ợng cơ thể của chuột béo phì tăng hơn chuột bình th-ờng là 60,81%. Các chỉ tiêu lipid máu chứng minh cho tình trạng béo phì là: Cholesterol tăng 68,96%; Triglycerid tăng 52,8%; LDL-c tăng 37,14% và HDL-c giảm 26,22%, Lipase máu giảm 42,8 %, bên cạnh đó nồng độ glucose huyết tăng 29,85%. Điều này là hợp với quy luật về rối loạn trao đổi lipid – gluxid ở chuột béo phì.
3. Đã xây dựng thành công mô hình chuột ĐTĐ mô phỏng type 2 bằng cách kết hợp nuôi béo bằng thức ăn giàu lipid và cholesterol với việc tiêm STZ liều thấp ( 110-120mg/kg). Kết quả đạt đ-ợc là sau 72h tiêm STZ nồng độ glucose máu của tất cả chuột đều đ-ợc duy trì ở mức cao và ổn định (> 18mmol/l).
4. Đã xác định liều độc cấp LD50 của dịch chiết thảo quyết minh trên chuột bạch chủng Swiss theo liều uống là 8g/kg thể trọng và chứng minh đ-ợc dịch chiết thảo quyết minh không có tính độc cấp.
5. Về tác dụng của dịch chiết các phân đoạn thảo quyết minh đến khả năng chống béo phì sau 21 ngày điều trị:
- Trọng l-ợng của chuột đ-ợc điều trị bằng dịch chiết các phân đoạn đã giảm từ 17,12% đến 23,34% ( giảm hơn điều trị bằng metformin). trong đó giảm mạnh nhất là phân đoạn ethylacetate giảm 23,34%, kế tiếp là n- hexan 20,44%, cuối cùng là ethanol giảm 17,44%.
- Các chỉ số hoá sinh trong máu chuột béo phì nh- glucose, triglycerid, LDL- c, cholesterol đều giảm, còn HDL-c, lipase máu thì tăng. Cụ thể:
+ Giảm cholesterol t-ơng ứng là: 7,37% và 22,27%.
+ Giảm Triglycerid t-ơng ứng là: 26,54% và 27,2%.
+ Giảm LDL -c t-ơng ứng là: 25,25% và 29,64%. + Giảm glucose huyết t-ơng ứng là: 11,45% và 13,9%. + Tăng HDL-c t-ơng ứng là: 24% và 32,48%.
+ Tăng lipase máu t-ơng ứng : 41,43% và 66,82%. Trong đó cao ethylacetate có hiệu quả tốt hơn cả.
6. Sau 21 ngày điều trị cho chuột ĐTĐ mô phỏng type 2 bằng các phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh, đã chứng minh glucose huyết giảm từ 52,79% đến 60,12% (giảm hơn điều trị bằng metformin). Cụ thể: Lô điều trị bằng ethylacetate giảm 60,12%, n- hexan giảm 52,85%, điều trị bằng ethanol giảm 52,79%.
7. Trong tất cả các phân đoạn dịch chiết của thảo quyết minh đã tiến hành thí nghiệm thì dịch chiết phân đoạn ethylacetate có tác dụng giảm trọng l-ợng cơ thể chuột béo phì và hạ đ-ờng huyết là tốt nhất ( ở ngay sau khi điều trị đ-ợc 10h và 21 ngày). Trọng l-ợng chuột giảm 23,34% còn đ-ờng huyết giảm 60,12%.
Kiến nghị
1. Tiếp tục nghiên cứu, tìm hiểu sâu hơn về thành phần hoá học của các hợp chất tự nhiên có trong cây thảo quyết minh, đặc biệt là xác định thành phần và cấu trúc hóa học của một số hợp chất từ phân đoạn ethylacetate có hiệu quả làm giảm glucose huyết ở chuột ĐTĐ.
2. Tiếp tục nghiên cứu quy trình điều trị theo liều l-ợng và thời gian tối -u có tác dụng giảm trọng l-ợng và một số chỉ số lipid máu của các phân đoạn dịch chiết từ thảo quyết minh.
3. Tiếp tục hoàn thiện mô hình chuột ĐTĐ type 2 và nghiên cứu tác dụng hạ đ-ờng huyết của các phân đoạn dịch chiết thảo quyết minh trên các dung môi khác nhau. Mục lục Trang Mở đầu……….…….1 1. Lý do chọn đề tài……….……..1 2. Mục đích nghiên cứu……….………3 3. Nhiệm vụ nghiên cứu………..…..…...3 4. Đối t-ợng và phạm vi nghiên cứu……….……3 5. Ph-ơng pháp nghiên cứu………...…4