Các xét nghiệm hóa sinh máu đ-ợc thực hiện nhờ máy phân tích hóa sinh tự động Olympus AU640 (Nhật Bản).
2.2.5.1. Ph-ơng pháp định l-ợng glucose huyết [51]
Máu sử dụng để định l-ợng glucose huyết là máu toàn phần lấy từ đuôi chuột. Định l-ợng glucose huyết bằng máy đo đ-ờng huyết tự động và bộ kít thử t-ơng ứng (One Touch Ultra, Johnson & Johnson, USA). Nguyên tắc của ph-ơng pháp dựa trên phản ứng đặc hiệu của glucose oxidase (GOD) có trong kit thử với glucose trong máu tạo thành axit gluconic và H2O2 (phản ứng 1). H2O2 tạo thành đ-ợc peroxydase phân hủy giải phóng oxy, oxy hoá O- Dianisidin tạo phức chất mầu vàng nâu (phản ứng 2).
Glucose + H2O2 + O2 axit gluconic + H2O2 (1)
O-Dianisidin + H2O2 phức hợp nâu vàng + H2O2 (2)
C-ờng độ mầu đ-ợc xác định theo ph-ơng pháp đo quang t-ơng ứng với l-ợng glucose trong máu cần định l-ợng.
2.2.5.2. Định l-ợng Triglycerid huyết thanh [5, 19]
Nguyên lý: Thuỷ phân Triglycerid bằng enzyme lipase, định l-ợng glycerol giải phóng ra bằng ph-ơng pháp đo màu của quinonimin tạo thành từ 4-aminoantipyryl và 4-chlorophenol phản ứng với peroxide hydrogen theo các phản ứng sau:
Triglycerid lipoproteinlipase Glycerol + acid béo
Glycerol + ATP glycerolkinase Glycerol–3–phosphate + ADP Glycerol–3–phosphate +O2 g lycero l3 p h o sp h a teo xid a se Dihydroxyacetone phosphate + H2O2
H2O2 + aminoantipyrine + 4–chlorophenol peroxidase quinonimin + 4HCl + 4H2O
Tính kết quả: Đo mật độ quang học quinonimin ở b-ớc sóng 546 nm rồi so với chuẩn.
2.2.5.3. Định l-ợng cholesterol toàn phần trong huyết thanh [5, 13]
Nguyên lý: Thuỷ phân cholesterol este bằng enzyme cholesterol esterase (CHE) và oxy hoá bằng cholesterol oxydase (CHO). Đo mật độ quang của quinonimin tạo nên từ phản ứng của hydrogen peroxide với 4- aminophenazone và phenol nhờ xúc tác của peroxidase. Các phản ứng:
Cholesterol este + H2O CHE Cholesterol + acid béo Cholesterol + O2 CHO Cholesterol–3– one + H2O2 2H2O2 + 4 – aminophenazone + phenol Peroxidase Quinonimin + H2O
Ch-ơng 3. kết quả và thảo luận