- IFAP: 5’ CATAGGAGCAGCTGAAATATATACC3’ EAP : 5’AGTGCTTTACAGCCCGC3’
7. Ứng dụng chỉ thị phân tử liên kết với gen thơm trong chọn các cáthể và dòng thuần mang gen thơm
F1BC4 của 2 tổ hợp này. Các cây xanh này sẽđược đưa kiểm tra, đánh giá gen thơm để chọn cây đầu dòng trong vụ Xuân 2011.
7. Ứng dụng chỉ thị phân tử liên kết với gen thơm trong chọn các cá thể và dòng thuần mang gen thơm thuần mang gen thơm
Sử dụng chỉ thị phân tử chọn cá thể và dòng thuần mang gen thơm fgr được tiến hành từ năm 2008. Đối với chọn cá thể, mẫu lá được lấy ở thời kỳ cây được 30 – 35 ngày tuổi, cây được phát hiện mang gen thơm được đánh dấu cho chọn lọc; đối với chọn dòng, mẫu lá được khi cây được 7 ngày tuổi sau khi gieo (giai đoạn mạ), mỗi dòng lấy mẫu 3 cá thểđể kiểm tra gen thơm. Gen thơm fgr sẽđược xác định bằng chỉ thị BADH2, trong đó 2 mồi ngoài ESP và EAP nhân đoạn 580bp trong đó có cả vùng gen thơm, ESP và IFAP nhân gen lặn fgr – thơm 257bp, INSP và EAP nhân gen trội Fgr – không thơm 355bp. Nếu xuất hiện cả 3 vệt băng thì giống đó chứa gen thơm dị hợp. Kết quả được thống kê trong Bảng 12.
Hình 21.Đại diện hình ảnh điện di sản phẩm PCR con lai tế hệ F1 BC4 bằng máy điện di mao quản.
Kết quả năm 2008, trong tổng số 712 cây xanh đầu dòng được kiểm tra gen thơm chúng tôi đã xác định được 55 cá thể đầu dòng dòng thuần mang gen thơm để đưa vào đánh giá và chọn lọc trên đồng ruộng.
Năm 2009, trong tổng số 109 dòng được lấy mẫu ADN, chạy PCR và điện di để xác định kiểu gen thông qua chỉ thị BADH2 thì có 49 dòng mang gen thơm fgr, trong đó có 39 dòng đồng hợp tử và 10 dòng dị hợp về gen này.
Bảng 12. Kết quả sử dụng chỉ thị phân tử trong BADH2 trong chọn lọc cá thể và dòng thuần mang gen thơm
Dòng/cáthể mang gen thơm fgr Năm Số dòng/cá thể lấy mẫu Tổng Dị hợp tử Đồng hợp tử Năm 2008 712 181 125 55 Năm 2009 109 49 10 39 Năm 2010 195 110 21 69 Tổng 1016 340 156 163