IV. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1. Kết quả phân lập một số chủng vi khuẩn Streptococcus sp
1.2. Đặc điểm hình thái tế bào và đặc tính sinh lí, sinh hoá của các chủng
vi khuẩn Streptococcus sp phân lập được
Theo Dương Văn Hợp và Nguyễn Lân Dũng (2007), phương pháp phân loại truyền thống vi sinh vật vẫn dựa căn bản trên các đặc tính hình thái, sinh lý và hóa vi sinh vật: nhuộm, hình dạng tế bào, khuẩn lạc, khả năng di động, nhu cầu dinh dưỡng, khả năng sinh acid trong môi trường cũng như sắc tố tạo thành [17][18]… Từ đó, chúng tôi đã tập trung nghiên cứu các phản ứng sinh hóa đặc trưng cho vi khuẩn Streptococcus sp và đã thực hiện các thử nghiệm như khả năng lên men đường glucose, lactose, sinh gas, sinh H2S, sinh Indol, sinh enzyme catalase và khả năng dung huyết. Đặc điểm hình thái và đặc tính sinh lí, sinh hoá chung của vi khuẩn Streptococcus sp như sau:
• Đặc điểm hình thái: là liên cầu khuẩn, bắt màu gram dương, không có tiên mao, đôi khi có hình trứng
• Đặc điểm sinh hóa: vi khuẩn Streptococcus sp có khả năng lên men
đường glucose, không lên men lactose, không có khả năng sinh hơi, không sinh H2S, không sinh indol và không sinh enzyme catalase. Vi khuẩn có khả năng gây tan máu trên môi trường thạch máu 5%
Các chủng vi khuẩn phân lập được nuôi cấy ở nhiệt độ 37oC, 48h trên môi trường BHIA, kết quả cho thấy xuất hiện 7 chủng vi khuẩn có hình thái như sau: kích thước nhỏ, màu trắng sữa, tròn đều, bóng, tâm lồi thấp. Hình thái tế bào dưới kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần cho thấy các chủng vi khuẩn đều bắt màu gram dương, tế bào vi khuẩn dạng hình cầu, đôi lúc hình trứng, xếp thành chuỗi hoặc đứng riêng lẻ. Như vậy, trong số 24 chủng vi khuẩn phân lập được thì chúng tôi đã sàng lọc ra được 7/24 chủng vi khuẩn là các chủng S3.6.1 , S4.5.2, S5.4.2, S7.3.1, S8.1.1, S8.2.3, S8.5.2 có đặc điểm hình thái khuẩn lạc và hình thái tế bào phù hợp với các chỉ tiêu và tài liệu nghiên cứu vềStreptococcus sp.
Các chủng vi khuẩn phân lập có đặc điểm hình thái khuẩn lạc và hình thái tế bào đặc trưng tiếp tục được khảo sát đặc tính sinh lí sinh hoá. Khi nuôi cấy trong môi trường Kligler Iron Agar (KIA), sau 24h các chủng gây hiện tượng đổi màu ở phần thạch đứngvì vậy được đánh giá là có khả năng lên men đường glucose, không đổi màu phần thạch nghiêng, không lên men
đường lactose. Cũng trên môi trường KIA, 7 chủng vi khuẩn phân lập không tạo kết tủa màu đen FeS vì vậy không sinh H2S.
Phản ứng sinh indol được đánh giá bằng thuốc thử Kovac′s. Canh khuẩn của các chủng nghiên cứu cho kết quả không có hiện tượng tạo vòng phản ứng màu đỏ với thuốc thử Kovac’s, do đó nó không khả năng sinh indol. Khi thử nghiệm khả năng sinh enzyme catalase với thuốc thử H2O2 30%, các chủng cũng cho kết quả âm tính. Trên môi trường thạch máu, khuẩn lạc vi
khuẩn có màu trắng, vòng phân giải hồng cầu có màu trắng sáng. Đây là đặc trưng của kiểu dung huyết β. Kết quảđược trình bày tại bảng 2.2 và hình 2.1.
Bảng 2.2: Kết quả thử nghiệm sinh hóa trên 24 chủng vi khuẩn đã sàng lọc
STT Ký hiệu chủng
Đặc điểm sinh hóa
Glucose Lactose Gas H2S Indol Catalase huyết Dung
1 S3.2.2 - - - + Β 2 S2.1 + - - - - + Β 3 S3.6.1 + - - - Β 4 S3.6.2 + - - - - + Β 5 S4.2.1 - - - + Β 6 S4.5.2 + - - - Β 7 S5.5.2 + - - - - + Γ 8 S5.2.3 - - - + Γ 9 S5.4.2 + - - - Β 10 S5.6.1 + + - - - - Γ 11 S5.6.3 + + - - - - Γ 12 S5.7.1 + + - - - + Γ 13 S5.8.3 + + - - - - Β 14 S6.3.3 - - - + Γ 15 S6.4.3 + + - - + - Β 16 S6.5.1 + - - - + + Β 17 S6.7.4 - - - + Γ 18 S7.1.1 + - - - - + Β 19 S7.3.1 + - - - Β 20 S8.1.1 + - - - Β 21 S8.2.2 + + - - - + Γ 22 S8.2.3 + - - - Β 23 S8.4.1 + - - - - + Β 24 S8.5.2 + - - - Β
Sau đây là kết quả thử nghiệm một số phản ứng sinh hóa đặc trưng của vi khuẩn Streptococcus sp:
Hình 2.1: Đặc điểm hình thái và sinh hóa của một số chủng Streptococcus sp đã sàng lọc
(A-Hình thái khuẩn lạc, B-Hình thái tế bào vi khuẩn, C- Khảo sát khả năng sinh enzyme catalase, D- Khảo sát khả năng lên men đường trong môi trường KIA, E- Hình ảnh khả năng dung huyết trong môi trường BHIA 5% máu cừu, F- Khảo sát khả năng sinh Indol). A B C D E Thử calase mẫu 8.1.1 F
Căn cứđặc điểm hình thái và đặc tính sinh lí, sinh hoá của các chủng vi khuẩn phân lập được tại bảng 2.1, 2.2 và hình 2.1, so sánh với các chỉ tiêu sinh hóa được mô tả trong cuốn cẩm nang Cowan and Steel’s ( G. I. Barrow, R.K.A. Feltham 1993) [11][19] và theo các tài liệu nghiên cứu trước đó
(Nguyễn Hồng Quân và cs, 2013; Đặng Thị Hoàng Oanh và Nguyễn Thang
Phương, Tạp chí Khoa học, 2012) [6][7], chúng tôi kết luận đã phân lập và sàng lọc được 7 chủng vi khuẩn có đặc điểm hoàn toàn phù hợp với đặc điểm sinh trưởng của Streptococcus, đó là 7 chủng Streptococus sp với kí hiệu lần lượt là S3.6.1 , S4.5.2, S5.4.2, S7.3.1, S8.1.1, S8.2.3, S8.5.2.