IV. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
3. Phương pháp nghiên cứu
3.1.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn Streptococcus sp
Sơ đồ 1: Quy trình phân lập vi khuẩn Streptococcus sp
Thu mẫu nội tạng động vật
Bổ sung nước muối sinh lý 0,9%
Nghiền, thu dịch huyền phù Tăng sinh trong pepton môi
trường kiềm
Cấy ria trong môi trường LB rắn
Soi nhuộm Gram, đọc hình thái vi khuẩn
Ria thuần trong môi trường BHI agar
Giữ giống trong môi trường BHI lỏng, 50% glycerol
Thử các phản ứng sinh hóa
•Phương pháp tăng sinh vi khuẩn: Chuẩn bị túi PF vô trùng và găng tay sạch, thu mẫu nội tạng. Sau đó, bổ sung 10ml nước muối sinh lý 0,9%, nghiền nhỏ, hút lấy dịch huyền phù để tăng sinh trong pepton kiềm. Tỷ lệ tăng sinh là 1:10 (1ml dịch mẫu: 10ml môi trường trong ống fancol 15). Nuôi lắc trong 37oC, 24 giờ.
•Phương pháp làm thuần vi khuẩn: Sau 24 giờ nuôi lắc, kiểm tra các ống môi trường, thấy tăng sinh khối. Tiến hành chuẩn bị môi trường, pha loãng và cấy trang trên LB rắn. Nuôi tủấm 37oC, 24 giờ.
•Quan sát và ghi lại hình thái, màu sắc khuẩn lạc: độ trong, đục, màu, viền, độ nhăn, lồi,… Lựa chọn các khuẩn lạc có hình thái màu sắc điển hình, cấy ria trên môi trường LB rắn, nuôi tủấm 37oC, trong vòng 24-48 giờ.
•Sau khi trên môi trường thạch xuất hiện khuẩn lạc, tiến hành soi nhuộm gram, đánh dấu thu nhận các khuẩn lạc cho kết quả nhuộm hình cầu và là gram dương (+). Cấy ria thuần các chủng này trên BHIA.
•Phương pháp giữ giống vi khuẩn: Cuối cùng sau khi đã thu được các chủng cầu khuẩn thuần, tiến hành giữ giống trong môi trường BHI lỏng, có bổ
sung Glyceron 50%, bảo quản lạnh [2][17][18]
•Quá trình phân lập tiến hành trong 2 tháng từ ngày 25 tháng 12 năm 2013 đến 24 tháng 1 năm 2014 và từ ngày 12 tháng 2 năm 2014 tới ngày 13 tháng 3 năm 2014 thu được 24 chủng liên cầu khuẩn, gram dương.