CHẤT LIỆU ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Hình 2.1 : Sơ đồ nghiên cứu
Tiến hành nghiên cứu theo sơ đồ trên.Theo thông tin của nhà sản xuất, liều dùng Sagydi ở người khoảng 6 viên/ngày. Dựa trên phương pháp tính liều ngoại suy để tính liều cho động vật thực nghiệm trong nghiên cứu là chuột nhắt trắng liều 1,5 viên/kg/ngày (liều tương đương với liều dùng trên người) [57].
Nghiên cứu tác dụng của Sagydi trên chuột được gây mô hình ĐTĐ dạng typ2
- Mục đích thí nghiệm: đánh giá tác dụng hạ glucose máu của thuốc thử
Sagydi ở liều 1,5 viên/kg/ngày (liều tương đương liều dùng trên người) và liều cao 7,5 viên/kg/ngày (gấp 5 lần liều dùng trên người) khi uống thuốc thử liên tục trong 2 tuần trên chuột nhắt trắng được gây mô hình ĐTĐ dạng typ 2.
- Động vật thực nghiệm: chuột nhắt trắng đực
- Lô thí nghiệm:
Lô 1 (lô chứng sinh học): chế độ NFD + uống nước cất 0,2ml/10g chuột
Lô 2 (lô mô hình): Chế độ HFD + tiêm STZ liều 100mg/kg + uống nước cất
Chóc máu (rễ) Giảo cổ lam
Sagydi
Tác dụng trên chuột nhắt được gây ĐTĐ dạng typ 2
Tác dụng trên Lipid máu Tác dụng trên glucose máu
Lô 3 (lô chứng dương): Chế độ HFD + tiêm STZ liều 100mg/kg + uống gliclazid liều 80mg/kg/ngày.
Lô 4 (Sagydi liều 1,5 viên/kg): Chế độ HFD + tiêm STZ liều 100mg/kg + uống thuốc Sagydi liều cao 1,5 viên/kg/ngày.
Lô 5 (Sagydi liều 7,5 viên/kg): Chế độ HFD + tiêm STZ liều 100mg/kg + uống thuốc Sagydi liều 7,5 viên/ kg/ngày.
- Tiến hành:
+ Gây mô hình ĐTĐ typ 2: áp dụng mô hình gây ĐTĐ dạng typ 2 bằng
chế độ ăn HFD kết hợp với STZ liều 100mg/kg tiêm màng bụng, theo phương pháp của Fabiola và Srinivasan [38], [58].
Bảng 2.1. Chế độ ăn NFD và HFD tính trên 100g thức ăn
Chế độ ăn bình thường (NFD)
Chế độ ăn giàu chất béo (HFD)*
Protein (%) 28,05 18,23
Chất béo no (%) 12,14 42,89
Carbonhydrat (%) 59,81 38,88
Tổng 100 100
Năng lượng (kcal) 467,5 614,5
*Siro fructose 55% được thêm vào trong thức ăn của chuột nhắt có chế độ ăn HFD Tất cả chuột 5 lô được lấy máu đuôi định lượng glucose máu lần 1 khi bắt đầu tham gia nghiên cứu. Trước khi lấy máu, chuột được cho nhịn đói qua đêm (nhịn đói qua đêm – 16h). Chuột lô 1 được nuôi bằng chế độ NFD - normal fat diet (chế độ ăn bình thường), các lô từ 2 đến 5 được nuôi bằng chế độ HFD - high fat diet (chế độ ăn giàu chất béo) trong 8 tuần liên tục. Sau 8 tuần tất cả chuột được lấy máu đuôi để định lượng glucose máu lần 2 (nhịn đói qua đêm – 16h).
Sau đó, tiến hành tiêm STZ liều 100mg/kg cho chuột các lô từ 2 đến 5, lô 1 tiêm dung dịch đệm citrat pH 4,2 là dung môi pha STZ. Sau tiêm STZ và
dung dịch đệm 72 giờ, định lượng glucose máu lần 3. Tiếp theo chọn các chuột ở lô tiêm STZ bị ĐTĐ (có mức glucose lúc đói trên 10mmol/l) được tham gia nghiên cứu. Các chuột này được chia ngẫu nhiên vào các lô từ 2 đến 5 để đánh giá tác dụng hạ glucose máu của thuốc thử Sagydi.
+ Đánh giá tác dụng hạ glucose máu của thuốc thử Sagydi: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
• Chuột lô 1 và 2 đựợc uống nước cất liên tục trong 2 tuần. • Chuột lô 3, 4, 5 uống thuốc thử liên tục trong 2 tuần.
• Chuột được uống nước hoặc thuốc thử mỗi ngày một lần vào buổi sáng bằng kim đầu tù với thể tích 0,2 ml/10g chuột.
• Sau 2 tuần chuột được nhịn ăn qua đêm, lấy máu đuôi tiến hành định lượng glucose máu tại các thời điểm t0 (chưa uống thuốc), t1 (sau 1 tuần uống thuốc thử liên tục), t2 (sau 2 tuần uống thuốc thử liên tục). Đồng thời, sau 2 tuần uống thuốc thử liên tục, chuột được lấy máu định lượng các thành phần lipid máu gồm TC, TG, HDL-C. Từ đó, tính thêm chỉ số LDL-C bằng công thức Friedewald:
LDL-C = TC – (HDL-C) – (TG/2,2) (mmol/L) [59]
Chuột ở các lô được mổ chuột lấy gan, tụy để đánh giá cân nặng, giải phẫu bệnh về mặt đại thể. 30% số chuột mỗi lô được làm tiêu bản mô bệnh học gan, tụy.