Sử dụng phần mềm Minitab 16 để bố trí thí nghiệm và phân tích kết quả thí nghiệm tối ưu. Ngoài ra, đề tài còn sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2007 để xử lý số liệu.
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.1. Khảo sát một số đặc điểm sinh học của giống
Trong nghiên cứu vi sinh, giống là một trong những yếu tố quan trọng. Đề tài này, chúng tôi sử dụng chủng Corynebacterium glutamicum VTCC-B-0632 từ Trung tâm lưu giữ giống vi sinh vật Đại học Quốc Gia Hà Nội. Đây là chủng tự nhiên đã được sàng lọc để sản xuất L-lysine.
Khảo sát đặc điểm đại thể, vi thể, sinh lý, sinh hóa của Corynebacterium glutamicum VTCC-B-0632 làm tiền đề cho các thí nghiệm sau được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Đặc điểm chủng Corynebacterium glutamicum VTCC-B-0632
Đại thể Kích thước 1-1,5mm Hình dạng Tròn đầy, trơn bóng Màu sắc Vàng nhạt Vi thể Kích thước 1x1,5µm Hình dạng Que ngắn
Cách sắp xếp tế bào Hình chữ V hoặc song song Bào tử Không hình thành bào tử
Gram Dương (+)
Sinh lý, sinh hóa
Catalase Có enzyme catalase
Glucose + Sucrose + Fructose + Maltose + Ethanol + Acid acetic + Dịch bắp + Rỉ đường + Urê + (NH4)2SO4 + Peptone + (+): có khả năng đồng hóa.
(a) (b)
Hình 3.1 Khuẩn lạc Corynebacterium glutamicum VTCC-B-0632 (a) và hình dạng tế bào Corynebacterium glutamicum VTCC-B-0632 (b).
Những khảo sát tiền đề cho thấy, chủng thuộc nhóm vi khuẩn Gram dương (+). Dưới kính hiển vi ở vật kính 100X, quan sát thấy tế bào có dạng que ngắn, xếp hình chữ V hoặc song song, bắt màu tím của thuốc nhuộm crystal. Tuy nhiên, chủng là vi khuẩn Gram biến đổi nên khi tế bào già chuyển sang Gram âm (-), bắt màu hồng của thuốc nhuộm fuchsin.
Trên môi trường thạch đĩa, khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu vàng nhạt, trơn bóng, kích thước 1-1,5 mm sau một ngày nuôi cấy.
Chủng có khả năng đồng hóa nhiều nguồn carbon như glucose, sucrose, fructose, maltose…và một số nguồn carbon tự nhiên như dịch bắp, rỉ đường do trong hệ gen có những gen tham gia tổng hợp enzyme phân giải những nguồn carbon này [13, 35].
Urê, peptone và (NH4)2SO4 là những nguồn nitơ phổ biến được đưa vào môi trường lên men chủng thu nhận L-lysine. NH4+ là nguồn nitơ dễ hấp thụ nhất. Urê được phân giải thành NH3 và CO2 nhờ enzyme urease. Peptone là nguồn nitơ hữu cơ, nhờ hoạt động của enzyme deaminase biến đổi thành NH3. NH3 xâm nhập qua thành tế bào và tham gia vào quá trình hình thành amino acid [4].