Protein Nucleocapsid sau khi kiểm tra tính kháng nguyên được đưa vào thử nghiệm tạo kít chẩn đoán bệnh PRRS dưới dạng que thử nhanh. Theo nguyên tắc cấu tạo và hoạt động của các test sắc ký miễn dịch, các loại màng là những yếu tố chủ yếu cấu thành test và thực hiện các chức năng cơ bản của phản ứng phát hiện. Que chẩn đoán bệnh được cấu tạo bởi các loại màng: Màng hút mẫu, màng chứa kháng thể cộng hợp, màng nitrocellulose (màng gắn kháng thể) và màng hấp thụ. Kháng thể khángIgG lợn, protein N tái tổ hợp được phun lên màng nitrocellulose (màng gắn kháng thể) bằng máy phân phối Biojet 3050 quanti – dispenser. Sau khi màng được sấy khô trong tủ sấy 50oC trong 30 phút và được cố định bởi 0,5% casein trong 50mM đệm acid boric (pH 8,5) trong 30 phút, rửa bằng 50mM Tris – HCl (pH 7,4) chứa 0,5% sucrose và 0,05% sodium cholate, màng nitrocellulose được để ở nhiệt độ phòng qua đêm cho khô. Cuối cùng màng đã được phun kháng nguyên và kháng thể (màng nitrocellulose), màng hút mẫu và màng chứa kháng thể cộng hợp đã qua xử lý được gắn vào tấm bìa chuyên dụng và cắt thành từng que chẩn đoán có chiều rộng 2-3mm bằng máy cắt chuyên dụng.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 33
1: Màng hút mẫu; 2&3: Màng chứa chất cộng hợp màu; 4: Màng Nitrocellulose (màng gắn kháng thể); 5(a),(b): Vị trí trải kháng nguyên, kháng thể lên màng; 6:
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 34
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả kiểm tra tính kháng nguyên của protein nucleocapsid