lên hoạt tắnh enzyme urease thương mại
Thắ nghiệm ựược tiến hành theo phương pháp khuếch tán ựĩa thạch dựa trên nguyên lý: Trên môi trường chỉ thị, enzyme urease hoạt ựộng phân giải urê sinh NH3 làm thay ựổi pH môi trường. pH môi trường chuyển từ acid sang bazơ làm cho môi trường ựổi màu từ màu vàng sang màu hồng. Môi trường có màu hồng ựậm khi enzyme urease có hoạt tắnh càng mạnh. Nếu dịch chiết thực vật có khả năng kìm hãm hoạt tắnh enzyme urease thì màu hồng xuất hiện trên môi trường giảm dần.
* Phương pháp tiến hành:
30ộl dịch chiết thực vật thô ựược trộn ựều với 3ộl enzyme urease trong 20ộl ựệm sodium phosphat buffer. Hỗn hợp ựược ủ ở 370C, 10Ỗ. Sau ựó, hỗn hợp ựược nhỏ vào giếng thạch chứa môi trường ChristensenỖs Urea Agar
với lượng 40 ộl/CT/giếng (Satoshi, 2003). Quan sát màu xuất hiện trên giếng thạch.
* Công thức thắ nghiệm:
- Thắ nghiệm 1: đánh giá ảnh hưởng của dịch chiết thực vật thô ựược chiết bằng dung môi nước ựến hoạt tắnh enzyme urease thương mại
CT1: 20 ộl SB + 30 ộl dịch chiết thực vật (DCTV) gốc + 3 ộl Urease CT2: 20 ộl SB + 30 ộl DCTV pha loãng 2 lần + 3 ộl Urease
CT3: 20 ộl SB + 30 ộl DCTV pha loãng4 lần + 3 ộl Urease CT4: 20 ộl SB + 30 ộl DCTV gốc + 3 ộl nước deion
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 33
- Thắ nghiệm 2: đánh giá ảnh hưởng của dịch chiết thực vật ựược chiết bằng các dung môi hữu cơ khác nhau ựến hoạt tắnh enzyme urease thương mạị
CT1: 20 ộl SB + 30 ộl dịch chiết thực vật (DCTV) gốc + 3 ộl Urease CT2: 20 ộl SB + 30 ộl DCTV pha loãng 2 lần + 3 ộl Urease
CT3: 20 ộl SB + 30 ộl buffer + 3 ộl ộl nước deion CT4: 20 ộl SB + 30 ộl DCTV gốc + 3 ộl nước deion CT5: 20 ộl SB + 30 ộl nước deion + 3 ộl Urease
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 34