a, Phương pháp chiết dịch chiết thực vật thô bằng nước (theo quy trình thực hiện tại Bộ môn DượcỜ Khoa Chăn nuôi thú y- Trường đHNNHN).
* Quy trình chiết tách dịch chiết thực vật thô:
- Mẫu thực vật ựược cắt thành những ựoạn nhỏ nhỏ khoảng 10 Ờ 15 cm - Bổ sung nước cất 2 lần với lượng vừa ựủ ngập mẫu thực vật. Thông thường nước cất ựược bổ sung với tỷ lệ 1:2 (100g mẫu thực vật + 200ml nước cất 2 lần).
- Hỗn hợp ựược ựun sôi 30 phút. Trong quá trình ựun, hỗn hợp ựược ựảo ựều bằng ựũa thủy tinh ựể dược liệu ngấm ựều nước nhằm ựảm bảo quá trình chiết xuất ựược tối ưụ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 26 - Dịch chiết thực vật sau khi lọc ựược bảo quản trong tủ lạnh
b, Phương pháp chiết dịch chiết thực vật thô bằng dung môi hữu cơ (Ann. Ẹ Hagerman, 2002)
* Chuẩn bị mẫu thực vật cần chiết dịch thô
Mẫu sau khi ựược thu thập về ựược sấy ở 60ồ C, 12h ựể làm khô mẫụ 1g mẫu khô ựược nghiền trong nitơ lỏng ựến khi thành bột mịn. 0,5g bột mẫu mịn ựược ựưa vào ống falcon 50ml.
* Chuẩn bị dung môi ựể tách chiết dịch chiết thực vật thô
Có 4 loại dung môi khác nhau ựược sử dụng trong quá trình chiết dịch chiết thực vật thô bao gồm: (1) 70% Methanol: 30% nước cất 2 lần; (2) 85% Methanol: 15% nước cất 2 lần, (3) 70% Acetone: 30% nước cất 2 lần, (4) 70% Acetonitrile: 30% nước cất 2 lần.
* Quy trình chiết tách dịch chiết thực vật thô
25ml mỗi loại dung môi ựược bổ sung riêng rẽ vào ống falcon 50ml chứa 0,5g bột mẫu thực vật. Sau ựó, ống ựựng dung dịch mẫu ựược xử lý bằng sóng siêu vi trong ựiều kiện lạnh, 10 phút ựể phá vỡ tế bào thực vật. Hỗn hợp dung dịch sau ựó ựược ly tâm 4000 vòng/phút trong 10 phút. Phần dịch nổi phắa bên trên ựược thu và ựược bảo quản ở - 200C ựể sử dụng cho các thắ nghiệm tiếp saụ