- Cột sắc ký: RP18 - Nhiệt độ cột: 35cC - Tốc độ dòng: 1ml/min - Thể tích bơm: 20µl - Bước sóng: 290nm - Áp suất: 77 bar - Pha động: Me0H 100%
2.5. Khảo sát đánh giá phương pháp
2.5.1. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp
Giới hạn phát hiện (LOD) (limit of detection) được định nghĩa là nồng độ nhỏ nhất của chất phân tích mà có tín hiệu sắc ký lớn gấp 3 lần tín hiệu đường nền. Đây là một thông số đặc trưng cho độ nhạy của phương pháp.
LOD = tín hiệu chiều cao peak/nhiễu đường nền ≥ 3.
Giới hạn định lượng (LOQ) (limit of quantitation) là nồng độ nhỏ nhất đo được của phương pháp, đó là nồng độ tối thiểu của một chất trong một nền mẫu xác định mà thiết bị có thể đo đúng được với một RSD% quy định nồng độ chất phân tích mà cho tín hiệu gấp 10 lần tín hiệu đường nền
2.5.2. Khảo sát độ lặp
- Độ lặp lại được dùng để đánh giá độ phân tán của các kết quả. Đại lượng này đặc trưng cho độ gần về giá trị trung bình của hai hay nhiều phép đo nhận được trong những điều kiện giống nhau.
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Xác định và định lượng ergosterol
3.1.1. Xác định khoảng tuyến tính và đường chuẩn của ergosterol
Dãy chuẩn ergosterol trong Nấm được khảo sát có nồng độ như sau: 25ppm; 50ppm; 1000 ppm. Phân tích các chuẩn nói trên và xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích các peak. Kết quả được trình bày ở bảng 3.1 và hình 3.1.
Bảng 3.1: Diện tích peak của ergosterol trong nấm tương ứng với từng nồng độ chuẩn Nồng độ chuẩn (ppm) Diện tích peak m B R2 50 127,12099 2,51607 16,16249 0,99994 100 283,43860 1000 2531,40381
Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng ergosterol như sau:
Phương trình hồi qui của đường chuẩn theo diện tích peak có dạng: y = mx +b x là nồng độ, y là diện tích peak
m= 2,51607 b = 16,16249 Hệ số hồi quy tuyến tính là R2 =0,99994
Hình 3.1. Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích peak và nồng độ các chuẩn ergosterol
Giá trị LOD và LOQ của phương pháp qua 3 lần đo ở các nồng độ khác nhau ở mẫu nấm. Kết quả thu được ghi ở bảng 3.2:
Bảng 3.2: Giá trị LOD và LOQ của ergosterol
Giá trị Chuẩn ergosterol (ppm)
LOD 0,46969
LOQ 1,56563
Ghi chú :
LOD = LOQ =
m: là hệ số góc của phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Sy = Xtb = Sy = 0,39392 Trong đó: Sy: Độ lệch chuẩn Xi: Nồng độ lần thứ i Xtb: Nồng độ trung bình 3*Sy m 10*LOD 3 Σ( Xi – Xtb )2 n-1 ΣXi n
Qua bảng số liệu ta thấy phương pháp có giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng rất nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, có thể phát hiện và định lượng được hàm lượng ergosterol có trong mẫu phân tích.