61 gaaaccaacc gggattgcct cagtaacggc gagtgaagcg gcaagagctc aaatttgaaa 121 gctggctcct tcggagtccg cattgtaatt tgcagaggat gctttgggtg cggcccccgt 181 ctaagtgccc tggaacgggc cgtcagagag ggtgagaatc ccgtcttggg cggggtgtcc 241 gtgcccgtgt aaagctcctt cgacgagtcg agttgtttgg gaatgcagct ctaaatgggt 301 ggtaaatttc atctaaagct aaatactggc cggagaccga tagcgcacaa gtagagtgat 361 cgaaagatga aaagcacttt gaaaagagag ttaaacagca cgtgaaattg ttgaaaggga 421 agcgcttgcg accagactcg cccgcggggt tcagccggca ttcgtgccgg tgtacttccc 481 cgtgggcggg ccagcgtcgg tttgggcggc cggtcaaagg cccctggaat gtagtgccct 541 ccggggcacc ttatagccag gggtgcaatg cggccagcct ggaccgagga acgcgcttcg 601 gcacggacgc tggcataatg gtcgtaaacg acccgtcttg aaacacggac caaggagtct 661 aacatctacg cgagtgttcg ggtgtcaaac ccgtgcgcgc agtgaaagcg aacggaggtg 721 ggagccccct tgcggggcgc accatcgacc gatcctgatg tcttcggatg gatttgagta 781 agagcgtagc tgtggggacc cgaaagatgg tgaactatgc ctgaataggg cgaagccaga
Hình 3.30.Trình tự nucleotit 28S rARN của chủng nấm mốc HN18 Bảng 3.30.Mức độ tương đồng gen 28S rARN của chủng nấm mốc HN18 với
trình tự của các chủng trên GenBank
Mã Thông tin chủng % tương đồng
PRJNA19263 Aspergillus niger CBS 513.88 100
AM270052.1 Aspergillus niger contig An03c0100 100
FJ345354.1 Paecilomyces variotii ATCC 10865 99
JN642222.1 Penicillium solitum 20-01 99
Kết quả sau phân tích genở bảng 3.30 và hình 3.30 cho thấy chủng nấm HN18thể hiện mức độ tương đồng cao về trình tự nucleotit của đoạn gen 28S rARN
K16 71Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật
so với loàiA. nigerlà 100%. Như vậy có thể khẳngđịnh chủng HN18 thuộc loàiA. niger, được ký hiệu A. niger HN18.
3.5. XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH NẤM MỐC VÀ VI KHUẨN HIẾU KHÍTRONG KHÔNG KHÍ MÔI TRƢỜNG LAO ĐỘNG HIẾU KHÍTRONG KHÔNG KHÍ MÔI TRƢỜNG LAO ĐỘNG
Từ các kết quả nghiên cứu trên, xây dựng quy trình phân tích nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động
Hình 3.31.Quy trình phân tích nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động
Mô tả chi tiết quy trình phân tích nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động:
Thu mẫu không khí Thiết bị thu mẫu: UIL Spin AIR
Vận tốc: 100 l/ phút Nhiệt độ: phòng
Nuôi nấm mốc
Môi trường: Sabouraund Nhiệt độ: 28 ± 0,5 oC Nhân nuôi trên đĩa thạch Thời gian: 3 ÷ 5 ngày
Nuôi vi khuẩn hiếu khí
Môi trường: MacConkey; thạch máu
Nhiệt độ: 37 ± 0,5 oC Nhân nuôi trên đĩa thạch Thời gian: 2 ÷ 3 ngày Xác định số lượng nấm
Đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch Petri
Xác định vi khuẩn hiếu khí
Đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch Petri Vận chuyển mẫu mẫu
Thiết bị kín, vô trùng Nhiệt độ: 4 oC Nhận dạng từng loại chủng nấm Các đặc điểm điển hình Nhận dạng từng loại vi khuẩn Các đặc điểm điển hình
K16 72Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật
Bước 1:Thu mẫu không khí: Thiết bị thu mẫu: UIL spin AIR Vận tốc: 100 l/ phút nhiệt độ: phòng
Bước 2:Vận chuyển mẫu mẫu: thiết bị kín, vô trùng; điều kiện nhiệt độ 4 oC
Bước 3:Nhân nuôi vi sinh vật trong không khí
+ Nuôi nấm mốc: Môi trường nuôi Sabouraud, nhân nuôi trên đĩa thạch, trong điều kiện nhiệt độ: 28 ± 0,5 o (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
C, thời gian 3 ÷ 5 ngày.
+ Nuôi vi khuẩn hiếu khí: Môi trường nuôi MacConkey; thạch máu; nhân nuôi trên đĩa thạch, trong điều kiện nhiệt độ: 37 ± 0,5 o
C, thời gian 2 ÷ 3 ngày.
Bước 4:Xác định số lượng tổng nấm và vi khuẩn hiếu khí tổng số bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch Petri.
Bước 5: Nhận dạng các chủng nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí đặc trưng trong không khí.
K16 73Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật
1. Đã khảo sát chọn được môi trường nghiên cứu là MacConkey cơ bản và thạch máu cho TVKHK, môi trường Sabouraud cho tổng nấm. Dùng môi trường cứng để lấy mẫu trực tiếp bằng thiết bị hút với tốc độ 100 lít/phút
2. Đã khảo sátđánh giá chứng minh độ chính xác của phương pháp xácđịnh được độ lệch chuẩn lần lượt và độ tái lặp cho kết quả, phương pháp hút trực tiếp Sr 0,041 và CV % là 1,53 với lượng mẫu không khí được lấy 100 lít đối với môi trường MacConkey. Với môi trường thạch máu thì cần phải lấy 200 lít không khí mẫu, cho độ chính xác tốt nhất, có Sr là 0,120. Quan trắc nấm trên môi trường Sabouraud cho độ lệch chuẩn tốt nhất lượng mẫu 50 ÷ 100 lít có Sr 0,036 và 0,048 và CV %: lần lượt là 1,31 và 1,78.
3. Đã xácđịnh được độ không đảm bảođo của quy trình phân tích TVKHK và tổng nấm trong không khí bằng phương pháp hút trực tiếp với thiết bị hút tốc độ 100 lít/phút lần lượt là TVNHK U % (4,25) và tổng nấm U % (4,94).
4. Đã quan trắc môi trường mùa nóng và mùa lạnh tại công ty sản xuất thứcăn gia súc, kết quả thu được tổng nấm và TVKHK một số vị trí sản xuấtđã vượt tiêu chuẩn so sánh, điều kiện môi trường làm việc là chưa đảm bảo cho người lao động.
5. Đã đánh giá chất lượng môi trường không khí khu vực có người lao động làm việc tại Công ty Proconco cơ sở tại Hà Nội, Hưng Yên và Hải Phòng, thực hiện quan trắc các vị trí nguyên liệu, phối trộn, đóng gói thành phẩm, kho vận, tổng số lượng mẫu đã được quan trắc81 mẫu không khí. Kết quả quan trắc đã xác định mật độ nấm mốc, vi khuẩn hiếu khí trong không khí dao động từ 1,2.102 ÷ 2,1.103 CFU/m3 không khí. Các loại vi sinh vật được xác định như Bacillus sp., Penicillium
sp., Aspergillus sp., Staphycoccus sp. Cụ thể trong nghiên cứu này đã xác định được chủng B. subtilis(1,95.102) chiếm 7,9 %, A. flavus (3,37.102 CFU/m3) chiếm xấp xỉ 16 %, A. niger(4,8.102 CFU/m3) chiếm 23 %, A. parasiticus(2,0.102 CFU/m3) chiếm 10 %, Penicillium sp. chiếm 8,5 % số vi sinh vật thu được.
6. Đã xây dựng quy trình phân tích nấm mốc và vi khuẩn hiếu khí trong không khí môi trường lao động, dùng các kỹ thuật lấy mẫu bằng thiết bị hút trực tiếp và dùng kỹ thuật sinh học phân tử để phân lập, định danh đến loài các vi sinh vật có mặt trong không khí môi trường lao động.