16 Macroptilium mosaic Puerto Rico virus MaMPRV AF449192 Puerto Rico
3.4. Phát triển kỹ thuật chẩn đoán KuMV bằng LAMP
Triệu chứng của các bệnh virus trên cây họđậu nhìn chung ít có giá trị chẩn đoán vì có nhiều virus hại trên cây họđậu, kể cả KuMV, thường tạo triệu chứng giống nhau. Chính vì vậy, có được một kỹ thuật chẩn đoán hiệu quả KuMV có ý nghĩa thực tiễn lớn trong quản lý bệnh. Đối với các begomovirus, kỹ thuật chẩn đoán bằng PCR thường được sử dụng vì virus có bản chất bộ gene là DNA và kháng huyết thanh của các begomovirrus thường không đặc hiệu (do mức độ bảo thủ cao của vỏ protein).
Gần đây, một kỹ thuật chẩn đoán virus tương đối mới đã được phát triển là LAMP. Kỹ thuật LAMP được biết đến như một kỹ thuật có khả năng phát hiện nhanh, tính đặc hiệu cao, không yêu cầu máy móc phức tạp, phản ứng diễn ra trong điều kiện đẳng nhiệt, giá thành thấp hơn và độ nhạy cao hơn kỹ PCR (Notomi et al.,
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53
2000). Kỹ thuật LAMP cũng đã được phát triển để chẩn đoán các begomovirus khác như Tomato yellow leaf curl virus và Squash leaf curl virus (Kuan et al., 2010; Almasi et al., 2013).
Mục tiêu của nghiên cứu này là xây dựng được kỹ thuật chẩn đoán KuMV bằng LAMP. Phản ứng LAMP diễn ra trong điều kiện đẳng nhiệt (60-650C) và nồng độ các chất phản ứng tương đối ổn định nên chúng tôi không tiến hành tối ưu hóa các nhiệt độ và các thành phần phản ứng. Trong nghiên cứu này chúng tôi chỉ tập chung vào thiết kế, đánh giá tính đặc hiệu, độ nhạy và khả năng phát hiện của kỹ thuật LAMP với các mẫu cây bệnh.
Phản ứng LAMP được thực hiện ở 630C trong thời gian 60 phút, kết thúc phản ứng ở nhiệt độ 800C trong 5 phút. Nồng độ các chất phản ứng được sử dụng theo Wei et al. (2012) (Phần 2.3).