Trên thế giới
Quy trình sản xuất chế phẩm HaNPV (Grzywacz, 2011). Gồm có bốn bước cơ bản:
Bước 1: Chuẩn bị thức ăn nhân tạo.
Sử dụng khay nhựa (420 mm x 300 mm) để đựng thức ăn sau khi được nấu xong. Thức ăn phải được đổ dày ít nhất 1 cm. Bề mặt thức ăn nhân tạo phải thật phẳng và mịn. Công thức thức ăn nhân tạo dưới đây đủ cho ba khay tương đương với 1.500 ấu trùng.
2400 mL nước cất 50 g agar
290 g mầm lúa mì 270 g nấm men (dạng khô) 50 g đường cát trắng 50 g bột casein
1,2 g bột cholesterol 10 g acid sorbic
12 g methyl-4-hydroxybenzoate 24 µL acid linoleic (24 giọt) Bước 2: chủng vi rút lên thức ăn nhân tạo và thả sâu vào.
Nồng độ sử dụng để chủng vi rút là 2 x 105
PIB/ấu trùng. Trên mỗi khay sẽ có khoảng 500 ấu trùng, do vậy tổng số PIB cần dùng là 1 x 108
và lượng nước cần dùng là 5 mL.
Sâu cần được nuôi riêng lẻ để tránh hiện tượng chúng ăn thịt lẫn nhau. Để thực hiện điều này thì có thể dùng loại vỉ nhôm có dạng tổ ong đặt vào khay, điều này sẽ tạo ra những ô riêng biệt vừa đủ cho một ấu trùng.
Bước 3: thu lại ấu trùng đã nhiễm bệnh.
Công tác này có thể được tiến hành vào ngày thứ 5. Tiêu chuẩn để chọn sâu nhiễm bệnh thích hợp là chúng đã được khối lượng tối đa, có triệu chứng bệnh đặc trưng nhưng vẫn còn sống. Không thu thập nhưng con đã chết hoặc bị
16
nhũn nhằm hạn chế tối đa sự bội nhiễm của vi khuẩn. Nếu sâu chưa đạt các tiêu chuẩn trên thì việc thu thập có thể diễn ra vào các ngày tiếp theo.
Bước 4: xử lý ấu trùng bị nhiễm bệnh.
Nghiền ấu trùng với nước cất thanh trùng và bột phụ gia. Sau đó tiến hành các bước lọc và ly tâm cần thiết để thu được vi rút sạch.
Nhìn chung, về cơ bản không có sự khác biệt giữa hai quy trình sản xuất chế phẩm vi rút. Cả hai quy trình đều dựa trên nguyên tắc sử dụng nguồn sâu sạch được nhân nuôi trong phòng thí nghiệm để làm nguyên liệu sản xuất. Sau đó cho lây nhiễm vi rút và chờ một thời gian thích hợp để vi rút đạt mật số tối đa. Công đoạn cuối cùng là thu lại sâu sống, mang đi nghiền, lọc và ly tâm để tinh sạch vi rút. Điều này chứng tỏ hướng nghiên cứu trong nước là đúng đắn và phù hợp với sự phát triển khoa học trên thế giới.