PMA là chất kích hoạt cho họ protein kinase C (PKC). PKC là một họ lớn các protein tham gia vào điều khiển chức năng của nhiều protein khác thông quá phosphoryl hóa các nhóm hydroxyl của serine và threonine của các protein này. Vì vậy PKC đóng vai trò quan trọng trong các chuỗi truyền tín hiệu trong tế bào và ảnh hưởng đến nhiều quá trình sinh học khác.
Để khảo sát ảnh hưởng của PMA tới nồng độ Ca2+ nội bào, thí nghiệm đã được tiến hành với các tế bào hồng cầu có chứa Fluo-4. Huyền phù tế bào trong dung dịch đệm sinh lý có nồng độ Ca2+ 2mM. Tương tự như thí nghiệm với LPA, sau khi tế bào lắng xuống đáy, PMA được bổ sung vào với các nồng độ khác nhau (2-10 µM). Cường độ huỳnh quang được đo ngay sau khi PMA được bổ sung. Kết quả cho thấy PMA có tác động làm tăng nồng độ Ca2+ nội bào, tuy nhiên tác động này không rõ ràng và nhanh chóng như A23187 và LPA. Tuy nhiên, PMA không gây ra hiện tượng tan vỡ tế bào như LPA ngay cả ở nồng độ tương đối cao (10 µM) (Hình 3.9).
Thời gian cảm ứng để tăng Ca2+ nội bào diễn ra chậm, đồng thời cường độ huỳnh quang của các tế bào khi sử dụng PMA thấp hơn đáng kể so với cường độ huỳnh quang đo được khi tiến hành thí nghiệm với A23187 và LPA
(Hình 3.10). Sự khác nhau này là do cơ chế tác động của PMA. PMA không kích hoạt kênh vận chuyển Ca2+ mà chỉ kích hoạt protein kinase C. PMA không trực tiếp tham gia vào con đường vận chuyển Ca2+ từ bên ngoài vào tế bào mà chỉ có tác động gián tiếp thông qua kích hoạt protein kinase C dẫn đến hoạt hóa các protein khác. Hàm lượng Ca2+ nội bào khi xử lý tế bào bằng PMA 6 µM được trình bày trong Hình 3.11
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 32
Hình 3.9.Ảnh hưởng của LPA tới nồng độ Ca2+ nội bào
Bên trái: Trước khi bổ sung PMA Bên phải: Sau khi bổ sung PMA 6 µM 10 phút.
Hình 3.10 Biến động của Ca2+ nội bào bởi PMA
Mỗi đường thể hiện sự dao động của nồng độ Ca2+ nội bào của mỗi tế bào đơn. Thí nghiệm được đo liên tục trong 20 phút
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 33
Hình 3.11 Ảnh hưởng của PMA tới nồng độ Ca2+ nội bào