Để xác định nồng độ Ca2+ nội bào trong điều kiện sinh lý, tế bào sau khi ủ với Fluo-4 được đưa vào dung dịch đệm sinh lý với nồng độ Ca2+ ngoại bào 2 mM. Cường độ huỳnh quang của mỗi một tế bào hồng cầu được phân tích bằng cách sử dụng kính hiển vi huỳnh quang. Cường độ huỳnh quang thực sẽ được xác định sau khi trừ giá trị nền của kính hiển vi trường. Trong điều kiện sinh lý (đối chứng), cường độ huỳnh quang của các tế bào hồng cầu rất thấp và ổn định, không có sự thay đổi đáng kể trong thời gian 20 phút quan sát (Hình 3.2), chứng tỏ không có sự gia tăng nồng độ Ca2+ nội bào mặc dù nồng độ Ca2+ ngoại bào là 2 mM. Kết quả này là do hoạt động của bơm canxi đã đẩy Ca2+ ra khỏi tế bào. Do ở điều kiện bình thường, tế bào hồng cầu có nồng độ Ca2+ nội bào rất thấp, luôn được ổn định bởi hoạt động của bơm Ca2+.
Hình 3.2.Tế bào hồng cầu ở điều kiện sinh lý
Hình ảnh tế bào hồng cầu sau 20 phút quan sát ởđiều kiện sinh lý
Dòng Ca2+đi vào và ra khỏi tế bào (Ca2+ flux) được biểu diễn dưới dạng các đường trong Hình 3.3.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 26
Hình 3.3. Nồng độ Ca2+ nội bào ở điều kiện sinh lý
Mỗi đường thể hiện sự dao động của nồng độ Ca2+ nội bào của mỗi tế bào đơn. Thí nghiệm được đo liên tục trong thời gian 20 phút
Kết quả phân tích cường độ huỳnh quang Fluo-4 cho thấy, giá trị cường độ huỳnh quang trung bình của các tế bào là 35,4 đơn vị. So sánh với thang chuẩn, nồng độ Ca2+ trong tế bào ở điều kiện sinh lý rất thấp (<50 nM). Kết quả này cũng phù hợp với các nghiên cứu xác định nồng độ Ca2+ nội bào ở tế bào hồng cầu