Trong thí nghiệm này, ảnh hưởng của LPA đến hàm lượng Ca2+ nội bào được khảo sát. Các nồng độ LPA khác nhau (từ 1- 10µM) được sử dụng để khảo sát phản ứng của tế bào với LPA. Kết quả cho thấy khi nồng độ LPA > 5 µM xảy ra hiện tượng vỡ tế bào hoàn toàn sau 15 phút ở nhiệt độ phòng. Ở nồng độ LPA 2,5 µM xảy ra hiện tượng vỡ tế bào, số lượng tế bào bị vỡ tăng dần theo thời gian.
Ảnh hưởng của LPA đến nồng độ Ca2+ nội bào được tiến hành với các tế bào hồng cầu đã chứa Fluo-4. Tế bào được đưa vào dung dịch đệm sinh lý có nồng độ Ca2+ ngoại bào 2 mM. Khi tế bào lắng xuống đáy đĩa, LPA được bổ sung với nồng độ cuối là 2,5 µM và trộn nhẹ nhàng bằng pipet. Mẫu được đo ngay khi LPA được bổ sung vào mẫu.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 29 Kết quả cho thấy ngay khi bổ sung LPA, cường độ huỳnh quang của tế bào hồng cầu sau khi được bổ sung LPA tăng nhanh chóng, sau 45-60 giây. Chứng tỏ sự gia tăng Ca2+ nội bào khi có mặt LPA diễn ra tức thời (Hình 3.6)
Hình 3.6. Ảnh hưởng của LPA tới nồng độ Ca2+ nội bào
Bên trái: Trước khi bổ sung LPA Bên phải: Sau khi bổ sung LPA 2,5 µM 1 phút. Mũi tên đỏ chỉ cùng một tế bào hồng cầu ở hai thời điểm quan sát
Sự biến động về nồng độ Ca2+ nội bào được thể hiện trong Hình 3.7. Cường độ huỳnh quang trong các tế bào rất cao ngay trong 5 phút đầu tiên sau đó giảm dần. Ở nồng độ LPA 2,5 µM giá trị huỳnh quang trung bình đo được ở các tế bào sau 10 phút là 250 ± 23 đơn vị (Hình 3.8). So sánh với đường chuẩn, nồng độ Ca2+ nội bào khi xử lý tế bào bằng LPA sau 10 phút trong khoảng từ 50-100 µM. So với tế bào ở trạng thái nghỉ (điều kiện sinh lý), nồng độ Ca2+ nội bào tăng hơn 1000 lần.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 30
Hình 3.7. Biến động của Ca2+ nội bào bởi LPA
Mỗi đường thể hiện sự dao động của nồng độ Ca2+ nội bào của mỗi tế bào đơn. Thí nghiệm được đo liên tục trong 20 phút
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 31