C repens (Qouam.) Vickeis geppi Schmidt
a- I^ctanbumin (l't )
3.4.1. Tuong tàc cùa càc proteinaza vói càc protein khàc
.-, Két qua nghièn cùu diéu tra cho thà'y dich chiét cùa mot só loài rong eó eà 3
hoat tinh: PA, PL\ va HA, rò nhàt là ò hai loài rong dò Hypnea esperiva Hypnea
Japonica.
Khi tién hành sae k^ loc gel trèn eòt Sephadex G-75 dich chiét eùa 2 loài trèn déu cho 3 dinh protein chù yéu vói thè tìch va trình tu rùt ra khòi còt tuong tu nhau (hình 24, 25). Vày càc hoat tihh nói trèn bièu hièn ò protein nhu thè nào? Két qua xàe dinh càc hoat tình PA, PIA va HA eùa tùng dinh protein cho thày ehi eó dinh I ò eà hai loài rong eó PA (bang 25), hoat tinh PIA nhu da tiình bay ò I*àn trèn ehi phàt hièn thày ò dinh protein thtir n.
Càc proteinaza thuòc dinh I cùa hai màu duoe thù tuong tàc vói mot só chat khàc. Két qua thù nghiém (bang 27) cho thày eàe proteinaza cùa hai loài rong trèn eó bi ùc che bòi protein lìc che dàc hiéu tripxin (CPPTI-I) (TI chù yéu cùa hat
Cucurbita pepo var. patissonina) va bi ùe che mot phàn bòi Hga2. Nhu vày, trong
hai loài rong da nghièn ethi eó ìt nhàt là hai loai proteinaza: loai proteinaza tuong
tu tripxin va loai thù hai thuòc nhóm proteinaza - xistein. Tuy nhièn, mùc dò biéu
hién khòng cao cùa càc proteinaza nói trèn khòng loai trùf khà nàng tón tai loai proteinaza khàc trong hai loài rong dà nghièn cùu.
Nhu da ehi ra ò phàn trèn (miic 3.3), PPI (dinh n) cùa hai loài rong thuòc
ehi Hypnea ùc che eà tripxin, a - kimotripxin va papain. Lièu PPI (dinh II) eó ùc
che proteinaza (dinh I) cùa rong hay khòng ? Két qua thi nghièm cho thày PPI thuòc dinh n dà ùc che proteinaza thuòc dinh I ò eà hai màu rong va hoat dò
proteolytic cùa dinh I bi giam tói 50% (ành 6, bang 26),
Nhu vày PPI cùa hai loài rong trèn khòng ehi ùc che proteinaza ngoai sinh
ma quan traig hon nò cung kim hàm hoat dò cùa proteinaza ò chfnh càc loài rong
ày. Két qua nhàn duoc chùng tò vai trò khòng nghi ngò eùa càc PPI Uong diéu
101
hoà hoat dòng cùa càc proteinaza ò nhùng loài rong trén, màt khàc nò cung dà 15^
giài tai sao PA cùa dich chiét thO thuòng thtfp hon (thàm chf khOng biéu hien) so vói PA cùa càc phàn doan protein là proteinaza duce tàch ra hoàc tinh sach. Nguoc lai khi PPI co tinh dàc hiéu v<» mot loai proteinaza nhàt dinh ma trong màu co nhiéu loai proteinaza, thi khà nàng biéu hién PA cùa dich chiét màu vàn co thè xày ra màc dù trcmg màu ày co PPI vói hoat dò cao.
Bang 25: Su phàn hÓ càc protein co hoat tfah ò dich chiét hai loài rong
Hypnea espen\à Hypnea japonica.
Protein - D i n h l - D i n h n -Dinh i n
Hoat tinh cùa protein
PA • M - - - PIA - • H - -
Chi chù : Càc dinh protein nhàn duoc nhà sàc ky loc gel trèn eòt Sephadex G-75 (x&n hình 24, 25)
Bang 26: Sa ùc che PA cùa dinh I bòi protein dinh n ò hai loài rong
Hypnea espenvà Hypnea Japonica
^ \ ^ Protein thù Loài rong ^ \ ^ Hypnea espen Hypnea japonica PA Protein dinhl -H-
Protein dinh I -h n Protein dinhn
-
102
Anh 6: lliù hoat tinh u-c che cùa dinh li tói PA cua dinh I càe màu rong (dùng dèm pH 6,5)
l.Dém
2. Dinh I cùa H. esperi 3. Dinh I + n cùa H. esperi 4. Dinh II cùa / / esperi
5. Dinh I cùa H. Japonica 6. Dinh 14- II cùa H.japonica
1. Dinh n cùa H. Japonica
103
Tuong tu nhu vày, eó thè nói ve proteinaza ò hai loài rong lue Ulva conglobata va Codium arabicum. Két qua nghièn cuu su lìe che PA cùa dich chiét hai loài rong lue trèn bòi mot só chat (bang 27) cho thày trong dich chiét eùa Ulva
conglobata it nhàt eó hai loai proteinaza: protemaza-xerin tuong tu tripxin va proteinaza thuòc nhóm proteinaza-xistein, con ò dich chiét cùa Codium arabicum
co le tón tai chù yéu là càc proteinaza tuong tu tripxin. Néu trong dich chiét cùa càe rong lue trén ehùa càe protein co hoat tinh ùc che tripxin va (hoac) proteinaza- xistein thi PA cùa dich chiét eó thè khòng biéu hién hoac biéu hién vói mùc dò thà'p. Két qua nghièn euru diéu tra cho thày hai loài rong trén eó PA thàp hoàc khòng biéu hién (PA chi biéu hién khi tang thòi gian xàe dinh) nhung lai ehùa
lectin vói hoat dò khà cao, nhàt là rong Codium arabicum. Lièu lectin eó dóng vai
trò là chat ùe che proteinaza khòng ? De làm sàng tò vàn de nay càn nghièn cihi tuong tàc cùa lectin vói eàe protein khàc ma truóc hét vói càe proteinaza.
Bang 27 : Su ùe che PA cùa mot só che phàm ttìf rong bién bòi càc chat
khàc nhau
^^^^~~'~~^-—____^ Chat t h ù
Màu ^^—~--^____^^
- Dich chiét cùa Ulva conglobata
- Dich chiét eùa Codium arabicum
- Dinh protein I cùa Hypnea esperi
• Dinh protein I cùa Hypnea japonica
HgClo (2mM) + - -h -h (2mM) + - - - Ti (tripxin inhibitor) +++ -H- -H- +
3.4,2. Tuong tàc cùa càc lectin tu tao lue Ulva conglobata va Codium
arabicum vói càc protein khàc.
Két qua thù nghièm su tuong tàc cùa càc lectin tir hai loài rong lue trén vói
tripxin, kimotripxin va papain (bang 28) cho thày lectin tu Ulva conglobata kim
hàm hoat dò cùa tiipxin va kimotripxin nhung lai khòng Idm hàm hoat dò cùa
papain, con càc lectin tu Codium arabicum thi ùc che hoat dò cùa papain va
104
mot phàn hoat dò cùa tripxin, nhung khòng Ùc che hoat dò cùa a - kimotripxin, hon nùa CA-I ehi ùc che papain.
Két qua nhàn duoe chùng tò eàe lectin nói trén con dóng vai trò là chà't khn
hàm proteinaza. Nhu két qua dà trình bay trén, rong lue Ulva conglobata chiia ii
nhà't hai loai proteinaza: proteinaza hrong tu tripxin va proteinaza thuòc nhóm proteinaza-xistein, ò day lectin eùa rong này chi ure che càe proteinaza-xerin, do vày vièc phàt hién PA trong dich chiét cùa rong co thè là hoat dò cùa proteinaza
thuòc nhóm proteinaza-xistein co trong dó. DÓi vói truòng hop rong Codium
arabicum viéc khòng phàt hièn thày PA trong dich chiét là diéu eó thè VJ giài duoe
vi nhu dà thày ò trèn trong rong này eó chù yéu là proteinaza tuong tu tripxin, con lectin ò day lai eó hoat tinh urc che tripxin, rat eó thè lectin da loai trùr khà nàng bièu hièn hoat dò cùa proteinaza ò rong này.
Bang 28 : Su ùc che Tripxin, kimotripxin va papain bòi lectin
^'^^•'~^^~'-^__^^ Enzim bi lìc che
Lectin '"^^—-^-^^^^ - ULC (Lectin tàch tu Ulva conglobata)
' CA-I (Lectin CA-I tur Codium arabicurri) - CA-m (Lectin CA-m tu Codium arabicum)
Tripxin -H-+ - •f a- khnotripxin -H- - - papain - -h-H- -H-
Nhu da trình bay ò trèn (phàn 3.1.2.1.) càc proteinaza ò rong dò thuòc chi
Eucheuma bièu hièn là càc proteinaza thuòc lùióm proteinaza-xistein. Chting tòi
da tìéi hành thù khà nàng ùc che eùa CA-I va ULC dói vói eàe enzim trén. Két qua (bang 29, ành 7) cho thày CA-I dà ùe che càe proteinaza cùa hai loài rong
Eucheuma gelatinae va Eucheuma denticulatum, manh nhàt là enzim cùa E.denticulatum (E. muhcata) va dinh IH cùa E. gelatinae (cùng là nhùng enzun
105
bièu hién ro nhàt tinh chat cùa mot prolcinnza-xistcin), con ULC thi kliòng ùc chÓ proteinaza cùa càc loài rong trén.
Két qua nhàn duoc chùng tò lectin CA-I là mOt protein ùc che proteinaza-
xistein, nò kliòng chi l'rc che proteinaza ngoai sinh ma vrc che cà c^c cnTnm co b
rong bièn.
Bang 29. Su ùc che proteina/a ò rong Eucheumn bòi càc lectin CA-l (tàch tir Codium arabicum) va UL (tàcli tu IJh'n conglobata)
Lectin C A - I ULC Proteinaza cùa ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ Eucheuma gelatinae Dinh U + - Dinh III ++ - Eucheuma denticulatum +-f+ - 1 1
Ành 7: ^ ire che càc proteinaza cùa rong Eucheumahbì CA-l (lectin
tàch tu Codium arabicum)
4 4 7 7
8 8 ...
8. Dicii thò tir Codium araiiicum 2. Dinh II cùa E gelatinae
3. Erinli UI cùa E. geladnae
4. Proteinaza cùa E. denticulatum 5. Ertnh II cùa E. gelnfinae + CA - I 6. Dinh III cùa E. geladnae + CA - 1 7. Proteinara cùa E. dcnticvìatum •\-C\A
106