phản ứng hóa học
Định tính saponin
Phản ứng tạo bọt
Cho vào ống nghiệm dung tích 20ml khoảng 1g bột dƣợc liệu, thêm vào 5ml nƣớc, đun sôi nhẹ, lọc dịch lọc vào một ống nghiệm to và lắc mạnh theo chiều dọc ống trong 5 phút, để yên quan sát.
Kết quả: cột bọt xuất hiện và bền trong 15 phút ở cả ba mẫu rễ, thân, lá Đơn châu chấu (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng Salkowski
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết cồn. Để nghiêng ống nghiệm 450
, cho từ từ theo thành ống nghiệm 1ml acid sulfuric đặc.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá Đơn châu chấu đều xuất hiện vòng tím đỏ ở mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng phân biệt saponin
Lấy 2 ống nghiệm 10ml, cho vào ống thứ nhất 5ml HCl 0,1 N (pH=1) vào ống thứ hai 5ml NaOH 0,1 N (pH=13). Cho thêm vào mỗi ống 2-3 giọt dịch chiết cồn rồi bịt ống nghiệm, lắc mạnh cả 2 ống trong 3 phút. Ðể yên sau 15 phút.
6. Đám tế bào thành dày hóa gỗ 7. Mảnh mạch xoắn
8. Mảnh mạch vạch 9. Đám hạt tinh bột
Kết quả: sau 15 phút thấy cột bọt ở hai ống nghiệm đều cao ngang nhau ở cả ba mẫu rễ, thân, lá.
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu đều có saponin triterpenoid.
Định tính flavonoid
Cho 5g bột dƣợc liệu vào bình nón, thêm 50ml cồn 900, đun cách thủy đến sôi trong 10 phút, lọc nóng. Dịch lọc thu đƣợc đem làm phản ứng định tính flavonoid.
Phản ứng Cyanidin (phản ứng Shinoda hay Willstater)
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, thêm một ít bột magie và nhỏ từ từ 4-5 giọt dung dịch HCl đặc. Đun cách thủy trong 5 phút.
Kết quả: Dịch chiết không chuyển sang màu đỏ ở cả ba mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính).
Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, sau đó thêm 2-3 giọt dung dịch FeCl3 5%
Kết quả: dung dịch chuyển sang màu xanh đen rõ ở cả ba mẫu rễ, thân, lá (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng với dung dịch kiềm
Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết cồn, sau đó thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%. Ở cả ba mẫu rễ, thân, lá đều xuất hiện kết tủa vàng. Tiếp tục thêm 1ml nƣớc cất, lắc đều lên.
Kết quả: tủa tan hết và màu vàng của dung dịch đậm lên (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng với hơi NH3
Nhỏ 1-2 giọt dịch chiết cồn lên hai miếng giấy lọc, sấy nhẹ đến khô. Quan sát dƣới ánh sáng thƣờng thấy màu vàng. Đem hơ một miếng giấy lọc lên miệng lọ amoniac đặc đã mở nút.
Kết quả: ở cả ba mẫu rễ, thân, lá, màu vàng của dịch chiết trên giấy lọc đem hơ đều đậm hơn so với vết dịch chiết trên tờ giấy lọc còn lại (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng diazo hóa
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm khoảng 2ml dung dịch natri hydroxyd 10%, thêm vài giọt thuốc thử diazoni mới pha, lắc đều, đun nóng cách thủy trong 5 phút.
Kết quả: dịch chiết rễ, thân, lá đều xuất hiện màu đỏ gạch (phản ứng dƣơng tính)
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá của Đơn châu chấu có thể có flavonoid.
Định tính coumarin
Lấy 10g bột dƣợc liệu cho vào bình nón dung tích 250ml, thêm 100ml cồn 900
,đun cách thủy đến sôi trong 5 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Các dịch chiết thu đƣợc đem làm các phản ứng sau:
Phản ứng mở và đóng vòng lacton
Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml dịch lọc + Ống nghiệm 1: thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% + Ống nghiệm 2: để nguyên
Đun cả hai ống nghiệm trên nồi cách thủy đến sôi. Quan sát thấy:
+ Ống nghiệm 1: xuất hiện tủa đục vàng + Ống nghiệm 2: trong suốt
Thêm vào cả 2 ống, mỗi ống 1ml nƣớc cất, lắc đều
+ Ống 1: tủa tan, dung dịch trong suốt, màu vàng của dung dịch đậm lên.
+ Ống 2: không xuất hiện tủa đục
Kết quả: không thấy xuất hiện tủa đục ở cả ba mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính).
Phản ứng với thuốc thử diazo
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết ethanol, thêm 2ml NaOH 10%. Đun cách thủy sôi trong 5 phút, để nguội, nhỏ vài giọt thuốc thử diazo mới pha.
Kết quả: dịch chiết rễ, thân, lá đều xuất hiện màu đỏ gạch (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng huỳnh quang
Nhỏ dịch chiết ethanol lên giấy lọc, sau đó nhỏ chồng lên 1 giọt NaOH 10%. Để khô, che nửa vết chất thử bằng 1 mảnh kim loại rồi đem soi dƣới ánh sáng tử ngoại ở λ = 366 nm trong một phút, sau đó bỏ vật che ra, quan sát.
Kết quả: không có sự khác biệt về cƣờng độ màu giữa hai nửa vết chất thử ở cả ba mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính)
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, láĐơn châu chấu không có coumarin.
Định tính glycosid tim
Cho khoảng 10g bột dƣợc liệu vào bình nón 250ml, thêm 100ml cồn 25o, ngâm trong 24h. Lọc dịch chiết vào cốc có mỏ, đem loại tạp bằng dung dịch chì acetat 30% đến dƣ, khuấy đều, lọc. Loại chì acetat dƣ bằng dung dịch Na2SO4 bão hòa. Lọc lấy dịch lọc vào bình gạn, chiết lấy glycosid tim bằng cách lắc với chloroform (hai lần, 8ml/lần), lắc kỹ, để tách lớp. Gạn lớp chloroform vào một cốc có mỏ đã sấy khô, loại nƣớc bằng Na2SO4 khan, lọc. Chia đều dịch chiết vào 4 ống nghiệm nhỏ đã đƣợc sấy khô, bốc hơi dung môi trên nồi cách thủy đến khô. Cắn thu đƣợc làm các phản ứng sau:
Phản ứng Liebermann
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 1ml anhydrid acetic, lắc đều cho tan hết cắn. Đặt nghiêng ống nghiệm 450, cho từ từ theo thành ống 1ml dung dịch acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống.
Kết quả: ba mẫu rễ, thân, lá đều xuất hiện vòng tím đỏ ở bề mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng (phản ứng dƣơng tính).
Phản ứng Baljet
Pha thuốc thử Baljet: cho vào ống nghiệm dung dịch acid picric 1%: NaOH 10% (1: 9) lắc đều.
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0.5ml dung dịch EtOH 900, lắc đều cho tan hết cắn.Thêm khoảng 0.5ml dung dịch thuốc thử Baljet mới pha. So với ống chứng (không có cắn).
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá dung dịch đều có màu vàng chanh, hơi đục, không có màu đỏ cam (phản ứng âm tính).
Phản ứng Legal
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml dung dịch EtOH 900, lắc đều cho tan hết cắn. Thêm một giọt dung dịch natrinitroprussiat 0.5% và hai giọt dung dịch NaOH 10%
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá các dung dịch đều có màu vàng, không có màu đỏ cam đậm hơn so với ống chứng (phản ứng âm tính).
Phản ứng Keller- Kiliani ( phản ứng của phần đường 2,6- desoxy)
Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml dung dịch EtOH 900, lắc đều cho tan hết cắn. Thêm vài giọt dung dịch FeCl3 5% trong acid acetic. Lắc đều, để nghiêng ống nghiệm 450. Thêm từ từ 0,5ml dung dịch H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống nghiệm.
Kết quả: Cả ba mẫu rễ, thân, lá đều thấy xuất hiện vòng tím đỏ ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng, lắc nhẹ lớp chất lỏng phía trên có màu xanh lá (Phản ứng dƣơng tính).
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu không có glycosid tim.
Định tính alcaloid
Chiết xuất: ở mỗi mẫu cân 5g bột dƣợc liệu, cho vào bình nón dung tích 250 ml. Thêm 50ml dung dịch acid sulfuric 1N. Đun đến sôi, để nguội, lọc.
Kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch amoniac đặc đến pH= 9-10. Sau đó cho dịch lọc đã kiềm hóa vào bình gạn, lắc với chloroform 3 lần, mỗi lần 10ml, gạn lấy lớp dung môi hữu cơ. Gộp dịch chiết chloroform lại, loại nƣớc bằng natrisufat khan, sau đó lắc với dung dịch acid sulfuric 1N ba lần, mỗi lần 5ml. Lấy dịch chiết acid cho vào 4 ống nghiệm, mỗi ống 2ml. Nhỏ vào từng ống nghiệm 2-3 giọt lần lƣợt các thuốc thử sau:
- Ống 1: Thuốc thử Mayer
Kết quả: không có tủa trắng ở cả 3 mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính)
- Ống 2: Thuốc thử Bouchardat
Kết quả: không có tủa nâu ở cả 3 mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính) - Ống 3: Thuốc thử Dragendoff
Kết quả: không có tủa vàng ở cả 3 mẫu rễ, thân, lá (phản ứng âm tính)
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu không có alcaloid.
Định tính Anthranoid
Phản ứng Borntraeger
Cho 5g bột dƣợc liệu vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml dung dich acid sulfuric 1N, đun sôi cách thủy trong 15 phút. Để nguội, lọc qua giấy lọc gấp nếp, lấy dịch lọc cho vào bình gạn dung tích 125ml. Chiết bằng 5ml chloroform, gạn lấy lớp chloroform cho vào ống nghiệm, bốc hơi dung môi còn khoảng 1ml, thêm 1ml amoniac 10%, lắc đều, không thấy xuất hiện màu hồng ở lớp trên, tiếp tục thêm vài giọt natri hydroxyd 10%.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá lớp nƣớc không xuất hiện màu hồng (phản ứng âm tính).
Vi thăng hoa
Cho 1g dƣợc liệu vào một nắp chai bằng nhôm, đậy bằng một phiến kính, trên có để một miếng bông tẩm nƣớc lạnh. Hơ nắp nhôm trên bếp điện trong 10 phút. Để nguội, lấy phiến kính ra soi dƣới kính hiển vi.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều không xuất hiện tinh thể hình kim (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu không có anthranoid.
* Định tính các thành phần trong dịch chiết nƣớc
Lấy khoảng 10g bột dƣợc liệu cho vào bình nón dung tích 250ml, thêm 100ml nƣớc cất, đun sôi trong 5 phút. Để nguội, lọc qua giấy lọc gấp nếp. Dịch lọc để làm các phản ứng sau.
Định tính tanin
Ống 1: 2ml dịch lọc, thêm 2 giọt FeCl3 5% (TT)
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều xuất hiện tủa xanh đen (phản ứng dƣơng tính).
Ống 2: 2ml dịch lọc, thêm 2 giọt Pb(CH3COO)2 10% (TT).
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều xuất hiện tủa bông trắng (phản ứng dƣơng tính).
Ống 3: 2ml dịch lọc, thêm vài giọt dung dịch gelatin 1%.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều không xuất hiện tủa trắng (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, láĐơn châu chấu không có tanin.
Định tính acid hữu cơ
Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch lọc, thêm 1 ít tinh thể Na2CO3.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều không thấy xuất hiện bọt khí bay lên (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu không có acid hữu cơ.
Định tính acid amin
Thêm vài gọt thuốc thử ninhydrin 3% vào ống nghiệm chứa 2ml dịch lọc, đun cách thủy vài phút.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều thấy xuất hiện màu xanh tím (phản ứng dƣơng tính).
Kết luận sơ bộ: rễ, thân, lá Đơn châu chấu có acid amin.
Định tính đƣờng khử
Thêm 1ml dung dịch thuốc thử Fehling A + 1ml dung dịch thuốc thử Fehling B vào ống nghiệm chứa 2ml dịch chiết nƣớc dƣợc liệu. Đun cách thủy sôi vài phút.
Kết quả: + Ống nghiệm chứa dịch chiết lá và thân đều xuất hiện kết tủa màu đỏ gạch (phản ứng dƣơng tính)
+ Ống nghiệm chứa dịch chiết rễ: không xuất hiện kết tủa đỏ gạch (phản ứng âm tính)
Kết luận sơ bộ: + Lá và thân Đơn châu chấu có đƣờng khử. + Rễ Đơn châu chấu không có đƣờng khử.
Định tính polysaccharid
Ống 1: 4ml dịch lọc + 5 giọt thuốc thử Lugol Ống 2: 4ml nƣớc cất + 5 giọt thuốc thử Lugol
Kết quả: + Mẫu rễ: màu ống 1 đậm hơn ống 2 (phản ứng dƣơng tính). + Mẫu thân, lá: màu ống 1 không đậm hơn ống 2 (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: + Rễ Đơn châu chấu có polysaccharid.
+ Lá, thân Đơn châu chấu không có polysacharid.
*Định tính các thành phần tan trong ether dầu hỏa
Lấy 10g dƣợc liệu cho vào bình nút mài, đổ ngập ether dầu hỏa, ngâm qua đêm, lọc, lấy dịch lọc để làm phản ứng.
Định tính caroten
Cho vào ống nghiệm 5ml dịch lọc, cô cách thủy tới cắn, thêm 1-2 giọt H2SO4 đặc.
Kết quả: + Ống nghiệm chứa dịch chiết lá thấy xuất hiện màu xanh.
(phản ứng dƣơng tính).
+ Ống nghiệm chứa dịch chiết thân, rễ không thấy xuất hiện màu xanh (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: + Lá Đơn châu chấu có caroten.
+ Thân, rễ Đơn châu chấu không có caroten.
Định tính chất béo
Nhỏ 1 giọt dịch lên giấy lọc, hơ khô.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều không thấy để lại vết mỡ trên giấy lọc (phản ứng âm tính).
Kết luận sơ bộ: Đơn châu chấu không có chất béo.
Định tính sterol
Cho vào ống nghiệm 5ml dịch lọc, đem cô cách thủy tới cắn, thêm vào ống nghiệm 1ml anhydrid acetic. Lắc kỹ rồi để nghiêng ống nghiệm 450, nhỏ từ từ 0,5ml dung dịch acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm.
Kết quả: cả ba mẫu rễ, thân, lá đều xuất hiện vòng tím đỏ ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng (phản ứng dƣơng tính)
Bảng 3.3. Kết quả định tính các nhóm chất trong rễ, thân, lá Đơn châu chấu bằng phƣơng pháp hóa học
Số TT Nhóm chất Phản ứng định tính Rễ Kết quả Kết luận sơ bộ
Thân Lá 1 Saponin Tạo bọt Salkowski + + + + + + Có 2 Flavonoid Cyanidin NaOH NH3 FeCl3 Diazo - + + + + - + + + + - + + + + Có thể có 3 Coumarin Mở, đóng vòng lacton Huỳnh quang Diazo - - + - - + - - + Không có 4 Glycosid tim Liebermann Legal Baljet Keller- Kiliani + - - + + - - + + - - + Không có 5 Alcaloid Mayer Dragendorff Bouchardat - - - - - - - - - Không có 6 Anthranoid Borntraeger Vi thăng hoa
- - - - - - Không có 7 Tanin FeCl3 5% Chì acetate 10% Gelatin 1% + + - + + - + + - Không có
8 Chất béo Thử trên giấy lọc - - - Không có
9 Carotenoid H2SO4 đặc - - + Thân, rễ: không có Lá: có
10 Sterol Liebermann + + + Có
11 Đƣờng khử Fehling - + + Rễ: không có Lá, thân: có
12 Acid hữu cơ Na2CO3 - - - Không có
13 Acid amin TT Ninhydrin 3% + + + Có
14 Polysaccharid TT Lugol + - - Rễ: có
Lá, thân: không có Chú thích: (-) phản ứng âm tính; (+) phản ứng dƣơng tính
Nhận xét:
Từ kết quả định tính có thể sơ bộ kết luận trong cả ba mẫu rễ, thân, lá Đơn châu chấu đều chứa saponin, sterol, acid amin.
Ngoài ra, trong lácòn chứa carotenoid, lá và thân đều chứa đƣờng khử, rễ chứa polysaccharid.