Gan là bộ phận quan trọng của cơ thể, đóng vai trò chính trong việc điều tiết và trao đổi chất. Về cơ bản gan giống nhƣ nhà máy tinh chế giúp loại bỏ các độc chất, vi khuẩn khỏi máu và là nơi dự trữ năng lƣợng, các men quan trọng trong cơ thể. Gan cũng tạo ra mật, giúp cho sự tiêu hóa. Trong các trƣờng hợp bệnh lý hay sự quá tải các chất độc trong gan, các tế bào gan sẽ bị hủy hoại, dẫn đến các tổn thƣơng trên gan, dần dần làm các tổn thƣơng không hồi phục nhƣ xơ gan, làm gan mất chức năng giải độc. Các bệnh lý về gan bao gồm tất cả các vấn đề tiềm ẩn gây ra tình trạng gan không thực hiện tốt các chức năng của mình.
Với một lá gan khỏe, quá trình chuyển hóa chất ở gan xảy ra mạnh mẽ, nhƣng khi cơ thể dung nạp quá nhiều hóa chất nhƣ sau đợt điều trị bệnh hay dùng bia, rƣợu thƣờng xuyên… để đào thải các chất này ra khỏi cơ thể, gan phải làm việc liên tục với cƣờng độ cao dẫn đến rối loạn men chuyển, từ đó đƣa đến rối loạn chức năng gan, dần dần làm gan suy yếu, là nguyên nhân phổ biến của các bệnh về gan.
Viêm gan là tình trạng viêm và hoại tử tế bào gan. Có rất nhiều nguyên nhân gây viêm gan: do nhiễm virus, do thuốc, rƣợu, các hóa chất, chuyển hóa, tự miễn… Tiếp xúc hóa chất có thể gây hại cho gan làm các tế bào gan bị kích thích (gây viêm gan), ảnh hƣởng đến sự lƣu thông của mật qua gan (gây ứ mật) và tích tụ triglyceride (làm gan nhiễm mỡ). Những hóa chất nhƣ steroide đồng hóa, vinyl chloride và carbon tetrachloride có thể gây ung thƣ gan.
Độc tính của CCl4 gây ra trên gan theo cơ chế gốc tự do thông qua trung gian của các chất chuyển hóa: ·
CCl3 tạo ra từ CCl4 hay các dẫn chất tạo ra từ phản ứng giữa ·
CCl3 và O2 (Cl3COO., COCl2…). Các gốc tự do kể trên sinh ra kết hợp với lipid và protein trên lƣới nội sinh chất của tế bào gan và hình thành một loạt các phản ứng peroxy hóa lipid dẫn đến phá hủy cấu trúc và chức năng của mạng lƣới này. Các sản phẩm của quá trình peroxy hóa lipid là các aldehyd hoạt động. Chúng đƣợc vận chuyển tới các mô khác gây độc cho những mô ở cách xa.
Glutathione (GSH) là một tripeptide nội sinh có mặt trong tất cả các tế bào động vật, đƣợc tổng hợp từ tế bào bằng 3 amin: cysteine, glutamic và glycine. Trong tế bào, GSH tồn tại chủ yếu ở dạng khử là một chất chống oxy hóa mang nhóm sulfhydryl (-SH), có tác dụng trung hòa và thải trừ các gốc tự do sinh ra trong cơ thể. Hàm lƣợng GSH trong tế bào và cơ thể càng cao chứng tỏ khả năng bảo vệ cơ thể khỏi sự tấn công của các nhân tố gây stress oxy hóa càng lớn. Việc gây độc bằng CCl4 đã làm giảm đáng kể nồng độ GSH, do đó càng góp phần làm tổn thƣơng tế bào gan.
Để đánh giá mức độ tổn thƣơng trong viêm gan, hai chỉ số sinh hóa quan trọng nhất hay đƣợc sử dụng là hoạt độ các enzym AST và ALT. Đây là những enzym có ở mọi mô, nhƣng nhiều nhất là ở gan và tim. Khi có tổn thƣơng tế bào gan, các enzym này sẽ thoát vào máu làm tăng hoạt độ enzym trong huyết thanh. Do đó sự tăng hoạt độ các enzym này rất có ý nghĩa trong chẩn đoán bệnh viêm gan cấp và mạn tính. Nồng độ các enzym này có thể tăng lên nhiều lần so với bình thƣờng khi viêm gan virus, hoại tử gan, viêm gan nhiễm độc. Các enzym này tăng trong máu sớm khi có triệu chứng lâm sàng và giảm sau khi các triệu chứng đã hết.
Mô hình gây tổn thƣơng gan bằng CCl4 là mô hình phổ biến trong việc nghiên cứu tìm ra các thuốc có tác dụng bảo vệ gan. Chất này gây nên sự xơ hóa gan và làm thay đổi các chỉ số sinh hóa của gan, với các triệu chứng tƣơng tự với viêm gan cấp tính do virus. Giá trị ALT, AST và bilirubin của lô gây độc bằng CCl4 7% tăng cao so với lô sinh lý chứng tỏ CCl4 là chất độc hƣớng gan rất mạnh, tế bào gan đã bị tổn thƣơng làm tăng tính thấm enzym qua màng tế bào đồng thời làm tăng nồng độ bilirubin trong máu. Nhóm đƣợc điều trị bằng cao Đơn chấu chấu 8 ngày đã làm giảm hoạt độ các enzym ALT, AST và hàm lƣợng bilirubin, điều này chứng tỏ cao Đơn chấu chấu có tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gây độc gan bằng CCl4.
Nghiên cứu thành phần hóa học của Đơn châu chấu thấy có acid oleanolic, đây là một chất đã đƣợc báo cáo có tác dụng bảo vệ gan. Cơ chế bảo vệ gan của acid oleanolic có thể là do ức chế sự biểu hiện và hoạt động của cytochrome P450 2E1 dẫn đến giảm hình thành trichloromethyl, do đó, giảm tổn thƣơng tế bào gan. Nó cũng ức chế CCl4 gây suy giảm glutathion ở gan. Ngoài ra, acid oleanolic còn làm tăng đáng kể biểu hiện của metallothionein gan [46]. Điều này có nghĩa là tác dụng bảo vệ gan của Đơn châu chấu có thể là do hay có phần đóng góp của acid oleanolic. Kết quả này cũng đã góp phần tìm hiểu và chứng minh mối quan hệ giữa thành phần hóa
học và tác dụng sinh học. Ngoài ra, nhóm saponin triterpenoid trong cây cũng có thể tham gia vào việc hình thành tác dụng bảo vệ gan của dƣợc liệu này. Tuy nhiên cần phải làm các nghiên cứu dƣợc lý thực nghiệm để có kết luận chính xác và đáng tin cậy.
MDA gan là sản phẩm cuối cùng của quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào. Trong thực nghiệm này, việc tăng hàm lƣợng MDA gan trong lô gây độc bằng CCl4 chứng tỏ CCl4 làm tổn thƣơng tế bào gan, tạo ra nhiều các sản phẩm peroxy hóa lipid. Cao Đơn châu chấu liều 6g và 12g dƣợc liệu/kg thể trọng chuột trong 8 ngày đã giảm sự tăng hàm lƣợng MDA nhƣng không có ý nghĩa thống kê. Nguyên nhân có thể do thời gian dùng thuốc ngắn, dƣợc liệu thƣờng có thời gian tác dụng chậm hơn thuốc tân dƣợc nên thƣờng phải dùng kéo dài, do vậy mà chƣa phát huy đƣợc tác dụng. Mặt khác, sự hình thành MDA còn chịu ảnh hƣởng của nhiều yếu tố khác nhau. Một số aldehyd khác không phải MDA cũng có thể tạo phản ứng với acid thiobarbituric và đƣợc hấp thụ ở bƣớc sóng 532nm. Do vậy, đánh giá hàm lƣợng MDA cần phải kết hợp thêm các phƣơng pháp khác mới có thể đánh giá mức độ tồn tại của các gốc tự do trong cơ thể và mức độ peroxy hóa lipid màng tế bào.
Với kết quả đã đạt đƣợc ở trên, lần đầu tiên ở Việt Nam chúng tôi đã chứng minh đƣợc Đơn châu chấu có tác dụng bảo vệ gan. Nghiên cứu này đã đóng góp thêm vào kho tàng cây thuốc Việt Nam một dƣợc liệu có tác dụng điều trị bệnh gan đã đƣợc chứng minh bằng khoa học, góp phần mở rộng và nâng cao giá trị sử dụng của cây Đơn châu chấu trong điều trị, có nhiều triển vọng đƣa dƣợc liệu này làm thuốc bảo vệ gan.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
1. KẾT LUẬN
Sau quá trình thực hiện đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Đơn châu chấu (Aralia
armata (Wall.) Seem.)” chúng tôi đã thu đƣợc những kết quả sau:
Về đặc điểm thực vật
Mô tả hình thái kết hợp với mô tả chi tiết đặc điểm bột và đặc điểm vi phẫu rễ, thân, lá Đơn châu chấu, có ảnh chụp kèm theo, đóng góp vào việc tiêu chuẩn hóa và kiểm nghiệm dƣợc liệu sau này. Đã xác định đƣợc tên khoa học của mẫu nghiên cứu là Aralia armata (Wall.) Seem., họ Ngũ gia bì (Araliaceae).
Về thành phần hóa học
- Thực hiện các phản ứng định tính sơ bộ cho thấy: + Lá có chứa: Saponin, Sterol, Acid amin, carotenoid. + Thân có chứa: Saponin, Sterol, Acid amin, đƣờng khử. + Rễ có chứa: Saponin, Sterol, Acid amin, polysaccharid.
- Từ cắn phân đoạn ethylacetat/thân đã phân lập đƣợc một chất tinh khiết, xác định đƣợc cấu trúc là acid oleanolic.
Về tác dụng sinh học
Tác dụng chống oxy hóa in vitro
- Đối với thử nghiệm DPPH: dịch chiết Ethanol toàn phần có tác dụng chống oxy hóa in vitro với IC50 là 187,94 μg/ml.
- Đối với thử nghiệm Superoxid: dịch chiết Ethanol toàn phần có tác dụng chống oxy hóa in vitro với IC50 là 1069,0 μg/ml.
Tác dụng bảo vệ gan và chống oxy hóa in vivo
- Trên mô hình gây tổn thƣơng gan bằng CCl4 0,2ml/20g ở chuột nhắt trắng, cao cồn Đơn châu chấu liều 6g dƣợc liệu/kg thể trọng chuột có tác dụng
giảm sự tăng hoạt độ enzym ALT và AST tƣơng ứng là 31,46% và 23,13%, có ý nghĩa thống kê so với lô đối chứng bệnh lý (P < 0,05).
- Khi tăng liều cao cồn Đơn châu chấu lên 12g dƣợc liệu/kg thể trọng chuột, tác dụng giảm sự tăng hoạt độ enzym ALT và AST rõ rệt hơn (40,07% và 24,56%), có ý nghĩa thống kê so với lô đối chứng bệnh lý (P < 0,05).
- Cao cồn Đơn châu chấu liều 6g dƣợc liệu/kg và 12g dƣợc liệu/kg thể trọng chuột, có tác dụng giảm hàm lƣợng bilirubin lần lƣợt là 26,90% và 25,30%, có ý nghĩa thống kê so với lô đối chứng bệnh lý (P < 0,05).
- Hàm lƣợng MDA trong gan chuột ở lô uống cao Đơn châu chấu liều 6g dƣợc liệu/kg và 12g dƣợc liệu/kg thể trọng chuột giảm lần lƣợt là 18,67% và 18,26%. Tuy nhiên mức giảm này không có ý nghĩa thống kê so với lô đối chứng bệnh lý (P > 0,05).
2. ĐỀ XUẤT
- Tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về thành phần hóa học, phân lập các chất trong cây Đơn châu chấu, đặc biệt là saponin triterpenoid.
- Tiếp tục nghiên cứu thêm về một số tác dụng sinh học khác của cây Đơn châu chấu và thành phần saponin triterpenoid có trong dƣợc liệu này.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu và nhận biết các họ thực vật hạt kín ở Việt Nam, NXB Nông nghiệp, tr. 48, 184.
2. Bộ môn Dƣợc liệu - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội (2006), Thực tập dược liệu- Phần hóa học.
3. Bộ môn Dƣợc liệu - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội (2005), Thực tập dược liệu- Phần vi học.
4. Bộ môn Thực vật - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội (2012), Thực tập thực vật và nhận biết cây thuốc.
5. Võ Văn Chi (1999), Từ điển cây thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr. 484. 6. Võ Văn Chi (2002), Từ điển thực vật thông dụng, NXB khoa học và kĩ
thuật, tập 1, tr. 328-330.
7. Võ Văn Chi – Trần Hợp (1999), Cây cỏ có ích ở Việt Nam, NXB Khoa học và kĩ thuật, tập 1, tr. 415-417.
8. Vũ Văn Chuyên (1991), Bài giảng thực vật học, NXB Y học Hà Nội, tr. 256.
9. Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc, NXB Y học Hà Nội.
10.Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr. 568.
11.Nguyễn Viết Thân (2003), Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi, NXB khoa học & Kỹ thuật, Hà Nội.
12. Viện Dƣợc liệu (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam,
NXB Khoa học và kĩ thuật, tập 1, tr. 812-814.
13. Viện Dƣợc liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lí của thuốc từ dược thảo, NXB Khoa học và kĩ thuật.
14.Viện Dƣợc liệu (2007), Công trình nghiên cứu khoa học (1987-2000), NXB Khoa học và kỹ thuật, 249-251.
Tiếng Anh
15. Abidov M. T., del Rio M. J. , Ramazanov T. Z., Klimenov A. L., Dzhamirze Sh., Kalyuzhin O. V., (2005), “Effects of Aralia mandshurica and Engelhardtia chrysolepis extracts on some parameters of lipid metabolism in women with nondiabetic obesity”, Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 141(3), 320-323.
16. Balahoroglu R., Dulger H., Ozbek H., (2008), “Protective effects of
antioxidants on the experimental liver and kidney toxicity in mice”, Eur J Gen Med, 5(3), pp. 157-164.
17. Bi L., Tian X., Dou F., Hong L., Tang H., Wang S., (2012), “New antioxidant and antiglycation active triterpenoid saponins from the root bark of Aralia taibaiensis”, Fitoterapia, 83, 234–240.
18. Bhat Z. A., Ali M., Ansari S. H., Kamran J. N., (2012), “New phytoconstituents from the roots of Aralia cachemirica Decne”, Journal of Saudi Chemical Society, pp. 1-5.
19. Bhat Z. A., Ansari S. H., Mukhtar H. M., Naved T., Siddiqui J. I., Khan N. A., (2005), “Effect of Aralia cachemirica Decne root extracts on blood glucose level in normal and glucose loaded rats”, Pharmazie, 60, pp. 712–713.
20. Cho J. H., Lee J. Y., Sim S. S., Whang W. K., Kim C. J., (2010), “Inhibitory effects of diterpene acids from root of Aralia cordata on IgE- mediated asthma in guinea pigs”, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 23, pp. 190–199.
21. Choi R. J., Shina E. M., Jung H. A., Choi J. S., Shik Y., (2011), “Inhibitory effects of kaurenoic acid from Aralia continentalis on LPS-
induced inflammatory response in RAW264.7 macrophages”,
Phytomedicine, 18, pp. 677–682.
22. Dong S. P., Jeung E. H., Yong H. B., (2009), “Therapeutic effect of
Aralia cordata extracts on cartilage protection in collagenase-induced inflammatory arthritis rabbit model”, Journal of Ethnopharmacology, 125, pp. 207–217.
23. Flora of China Editorial Committee (2007). “Flora of China”, Science Press (Beijing) & Missouri Botanical Garden, China, 13, pp. 480-489. 24. Hee J. J., Hyun A. J., Sam S. K., Je H. L., Yoon S. C., Kyong H. M., Jae
S. C., (2012), “Inhibitory activity of Aralia continentalis roots on protein tyrosine phosphatase 1B and rat lens aldose reductase”, Archives of Pharmacal Research, 35(10), pp. 1771.
25. Hong W. Q, Jian Z., Xu M., Yan Y. X. , You Y. B. , Gang X. Y., Xue K. H., (2011), “A new triterpenoid saponin from the leaves of Aralia elata”, Chinese Journal of Natural Medicines, 9(1), pp. 17−21.
26. Hsiao J. J., Chiang H. C., (1995), “Phenylpropanoids from Aralia bipinnata”, Phytochemistry, 39(4), pp. 825-827.
27. Hsiao J. J., Chiang H. C., (1995), “Lignans from the wood of Aralia bipinnata”, Phytochemistry, 39(4), pp. 899-902.
28. Hu M., Pei-Gen X., Ogawa K., Sashida Y., (1995), “Triterpenoid glucuronide saponins from root bark of Aralia armata”, Phytochemistry,
39(1), pp. 179-184.
29. Hwang Y. P., Choi J. H., Han E. H., Kim H. K., Kang S. K., Chung Y. C., Jeong H. G., (2008), “Protective mechanisms of Aralia continentalis
extract against tert-butyl hydroperoxide-induced hepatotoxicity: In vivo and in vitro studies”, Food and Chemical Toxicology, 46, pp. 3512– 3521.
30. Hwang Y. P., Choi J. H., Jeong H. G., (2008), “Protective effect of the
Aralia continentalis root extract against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice”, Food and Chemical Toxicology, 47, pp. 75–81. 31. Jason A. Clement, Matthew J. Flood, Rachel M. Bleich, Timothy J.
Willis, Ryan M. Kelly, Jeffrey D. Schmitt (2013), “Diterpenoids and acetylenic lipids from Aralia racemosa”, Biochemical Systematics and Ecology, 51, pp. 4–7.
32. Je H. L., Choon S. J., (2009), “Suppressive effects on the biosynthesis of inflammatory mediators by Aralia elata extract fractions in macrophage cells”, Environmental Toxicology and Pharmacology, 28, pp. 333–341. 33. Jeong H. G., (1999), “Inhibition of cytochrome P450 2E1 expression by
oleanolic acid: hepatoprotective effects against carbon tetrachloride- induced hepatic injury”, Toxicology Letters, 105, pp. 215–222.
34. Jeong S., Yun Y. H., Kim S. M., Yoon K. H., Kim K. J., (2008), “Antimicrobial activity of continentalic acid from Aralia cordata against Enterococcus Strains”, International Journal of Oral Biology, 33(4), pp. 213-216.
35. Jung H. A., Lee E. J., Kim J. S., Kang S. S., Lee J. H., Min B. S., Choi J. S., (2009), “Cholinesterase and BACE1 inhibitory diterpenoids from
Aralia cordata”, Archives of Pharmacal Research, 32(10), pp. 1399- 1408.
36. Kim J. S., Kang S. S., (1998), “Saponins from the aerial parts of Aralia