* Nguyên lý:
Dịch tế bào E. coli thu lại sau bước biểu hiện được xử lý bằng các loại dung dịch đệm đặc trưng, sau đó thành và màng tế bào được phá vỡ bằng sóng siêu âm. Protein dạng thể vùi không tan trong dung môi nước nên có thể dễ dàng tách ra khỏi các protein tan khác nhờ phương pháp ly tâm. Protein thể vùi chỉ chuyển thành dạng tan khi xử lý bằng các chất có khả năng biến tính cao như urea hay guanidine hydrochloride. Các protein khác nhau trong thể vùi có khả năng trở thành dạng tan ở những nồng độ chất biến tính khác nhau nên có thể được phân tách ra bằng phương pháp ly tâm..
* Phương pháp phá tế bào E. coli và xử lý IL-2 thô tiền tinh chế
Các ống sinh khối tế bào được giã đông ở nhiệt độ 37ºC trong 30 phút sau đó bổ sung dung dịch đệm I (công thức bên trên) và được mang đi xử lý siêu âm phá tế bào trong 30 phút. Ly tâm 5000 vòng/phút trong 10 phút thu tủa và hòa tủa trong dung dịch đệm II. Tiếp tục siêu âm lần hai. Dịch siêu âm được bổ sung sucrose đến nồng độ cuối cùng là 20% và ly tâm ở 10000 vòng/phút trong 20 phút để thu tủa. Tủa được hòa trong 5 ml dung dịch đệm IV đến khi tan hoàn toàn trước khi ly tâm
34
10000 vòng/phút trong 30 phút để thu dịch nổi. Dịch nổi được pha loãng về nồng độ guanidine hydrochloride cuối cùng là 3M, ủ ở nhiệt độ phòng trong 60 phút. Hỗn hợp sau khi ủ được ly tâm 10000 vòng/phút trong 30 phút để thu tủa. Tủa được hòa tan trong 2,5 ml đệm IV có bổ sung 2-Mecaptoethanol đến nồng độ 15 mM và khuấy trong điều kiện 4ºC từ 8-10 giờ. Dịch hòa tan được ly tâm 10000 vòng/phút trong 30 phút, loại tủa, thu dịch nổi.