* Cơ sở lý thuyết
Tế bào vi khuẩn E. coli tái tổ hợp mang gene tổng hợp IL-2 được nuôi cấy trên môi trường LBA ở nhiệt độ và độ sục khí thích hợp cho việc sinh trưởng. Nhờ cơ chế cảm ứng operon lac bằng hóa chất IPTG, protein IL-2 được tổng hợp.
* Các bước tiến hành
Chuẩn bị sẵn 3 lít môi trường lên men trong bình lên men, sục khí và khuấy để bão hoà nguồn oxy trong môi trường trước khi lên men. Nuôi cấy 100 ml chủng giống E. coli qua đêm tại nhiệt độ 37oC trong môi trường có bổ sung ampicillin 100 µg/ml. Bổ sung toàn bộ 100 ml dịch nuôi cấy qua đêm vào bình lên men. Điều kiện lên men ban đầu là: nhiệt độ 37oC, pH môi trường khoảng 6-7, độ sục khí là 0,5 lít khí sục vào/lít môi trường/phút (vvm), tốc độ khuấy 200 vòng/phút.
Sau 2 giờ nuôi cấy, tăng tốc độ khuấy lên 400 vòng/phút, sau 3 giờ tăng 600 vòng/phút và tăng sục khí lên 1 vvm. Nuôi đến khi chỉ số dOT (nồng độ oxy hòa tan trong môi trường) giảm xuống cực tiểu rồi tăng đột ngột thì bổ sung glucose và cao
33
nấm men lần thứ nhất với lượng sao cho nồng độ cuối cùng sau khi bổ sung lần lượt là 1% và 0,5%.
Tiếp tục duy trì tốc độ khuấy 600 vòng/phút và độ sục khí 1 vvm để tăng sinh khối tế bào sau lên men. Nuôi cấy đến khi dOT giảm rồi tăng đột ngột thì tiến hành bổ sung glucose và cao nấm men lần 2 với nồng độ như trên. Sau đó, tiến hành cảm ứng bởi IPTG với nồng độ cuối cùng 0,1 mM.
Tiếp tục kiểm tra mật độ tế bào theo thời gian sau khi cảm ứng, thu mẫu theo thời gian. Sau khi cảm ứng 6 giờ đồng hồ, dừng lên men. Sản phẩm protein tái tổ hợp sau lên men là sinh khối tế bào E. coli được thu hồi, loại bỏ môi trường trước khi hòa lại trong Tris-HCl 20 mM và giữ ở -80oC.