(a) thủ tục -amylase/amyloglucosidase tiêu chuẩn ( AA / AMG) . -Run D- glucose làm việc các giải pháp tiêu chuẩn ( gấp bốn ) , thuốc thử trắng ( bản) , và tinh bột ngô với mỗi bộ kiểm tra . Sử dụng thuốc thử để trống không quang phổ . (1) Cân chính xác 90-100 mg đất phần kiểm tra trực tiếp vào ống nghiệm thủy tinh . Khai thác ống nhẹ nhàng trên băng ghế dự bị trong phòng thí nghiệm để đảm bảo rằng tất cả các hạt giảm xuống dưới cùng của ống . (Lưu ý: Khi phân tích sản phẩm ngũ cốc chứa hàm lượng cao đường [ sản phẩm chế biến từ ngũ cốc { ví dụ như ngũ cốc ăn sáng } và các sản phẩm không rõ hoặc không chắc chắn thành phần { tức là , sản phẩm có chứa
glucose miễn phí hoặc maltodextrins } ] , trước khi chiết xuất 90-100 mg cân nặng , kiểm tra mặt đất mẫu 2 với 10 ml dung dịch ethanol 80% , C (e), ở ca 80 ° C trong 10 phút / khai thác . ly tâm bùn ở 1000 g và loại bỏ nổi . Sử dụng trầm tích để phân tích. ) (2) 0,2 ml dung dịch ethanol 80% vào ống và khuấy đều trên Vortex máy trộn để đảm bảo rằng phần thử nghiệm là ẩm ướt. Thêm 3,0 ml -amylase chịu nhiệt , C ( b) , và trộn nội dung của ống trên Vortex máy
trộn để đảm bảo phân tán hoàn toàn. (3) Ngay lập tức đặt ống trong nước sôi tắm trong 2 phút, loại bỏ từ nước tắm , và trộn mạnh mẽ trên Vortex máy trộn . Trở lại ống để đun sôi nước tắm cho thêm 3 phút và sau đó kết hợp nội dung mạnh mẽ trên Vortex máy trộn . (Lưu ý: Một số chất rắn sẽ tuân thủ bên trong ống nghiệm , tuy nhiên , điều này sẽ không ảnh hưởng đến phân tích từ nội dung ống được điều trị bằng enzyme trong bước này. ) (4) Ống Nơi ở bể nước đặt ở 50 ° C và để cân bằng 5 phút . Thêm 4,0 ml 200 mM sodium acetate đệm , C ( f) (1 ) , và 0,1 ml dung dịch amyloglucosidase , C ( c) , và mạnh mẽ kết hợp nội dung trên Vortex máy trộn . Ống nắp bằng đá cẩm thạch và ủ 30 phút ở 50 ° C. (5) định lượng chuyển toàn bộ nội dung của ống
nghiệm đến 100 mL bình định mức . Sử dụng chai nước rửa để rửa ống nội dung kỹ lưỡng . Pha loãng đến 100 ml với H 2O . ( Lưu ý: Nếu sản phẩm có chứa <10% tinh bột, điều chỉnh âm lượng 10,0 ml [ thay vì 100 ml ] Thực hiện điều chỉnh thích hợp để tính toán. . ) Trộn kỹ hỗn nội dung của bình . Máy ly tâm phần nổi của hệ thống treo 10 phút ở 1000 g . Ngoài ra, dịch chất lọc qua giấy lọc . (6) Cẩn thận và chính xác chuyển 0,1 mL mỗi nổi (hoặc lọc ) để đáy ống nghiệm riêng biệt ; sử dụng 2 ống / nổi (hoặc lọc ) . (7) 3,0 hỗn hợp đệm oxidase - peroxidase - aminoantipyrine đường mL , C (d) , vào mỗi ống ( các giải pháp phản ứng từ phần thử nghiệm và tinh bột ngô, thuốc thử trống, và các giải pháp làm việc tiêu chuẩn D- glucose) , và ủ 20 phút ở 50 ° C. (8) Đo và ghi lại hấp thụ , A, mỗi giải pháp kiểm tra tại 510 nm với thuốc thử trống. Một giá trị trung bình cho mỗi bài kiểm tra và sử dụng trong tính toán , G.
(b ) Thủ tục thay đổi (DMSO / AA / AMG) . - Đối với các sản phẩm có chứa tinh bột enzyme chịu . (1) Cân chính xác 90-100 phần kiểm tra mặt đất mg trực tiếp vào ống nghiệm thủy tinh . Khai thác ống nhẹ nhàng trên băng ghế dự bị trong phòng thí nghiệm để đảm bảo rằng tất cả các hạt giảm xuống dưới cùng của ống . (Lưu ý: . Khi phân tích sản phẩm ngũ cốc chứa hàm lượng cao đường , trước chiết xuất 90-100 mg nặng , kiểm tra mặt đất mẫu 2 với 10 ml dung dịch ethanol , C (e), ở ca 80 ° C trong 10 phút / khai thác bùn ly tâm ở
1000 g và loại bỏ nổi . Sử dụng trầm tích để phân tích. ) (2) Thêm 0,2 ml dung dịch ethanol 80% vào ống và khuấy động trên Vortex máy trộn để đảm bảo rằng phần thử nghiệm là ẩm ướt. (3) Ngay lập tức thêm 2 giải pháp ml
DMSO , C ( g) , và khuấy ống trên Vortex máy trộn . Đặt ống trong mạnh mẽ sôi tắm nước và loại bỏ sau 5 phút . Thêm 3,0 ml dung dịch chịu nhiệt
-amylase , C ( b) , và trộn nội dung trên Vortex máy trộn để đảm bảo phân tán hoàn toàn. (4) Ngay lập tức tiến hành theo quy trình chuẩn (AA / AMG) bắt đầu từ bước E (a) ( 3).
F. Xác định enzyme kháng tinh bột ( bắt buộc)
(Lưu ý: Đây là một phần của phương pháp đã không được xác nhận trong nghiên cứu hợp tác . )
Mức độ tinh bột enzyme chịu trong các sản phẩm phụ thuộc vào bản chất của tinh bột ban đầu (ví dụ , hàm lượng amylose cao ) và điều kiện xử lý . Điều này có thể thay đổi 0,1-30 % tổng số tinh bột trong sản phẩm. Xác định mức độ tinh bột kháng enzyme như sau:
( 1) Phân tích sản phẩm theo quy trình chuẩn , E ( a) (1 ) - (4) .
(2) dung dịch phản ứng ly tâm 10 phút ở 1000 g và cẩn thận đổ vào 100 ml nổi bình định mức .
(3) Resuspend viên trong 5 ml 50 mM sodium acetate đệm , C ( f) ( 2 ), bằng cách khuấy mạnh trên Vortex máy trộn . Bổ sung thêm 5 ml 50 mM sodium acetate đệm , trộn , và ly tâm 10 phút ở 1000 g .
(4) Kết hợp nổi với từ bước (2) và pha loãng tới vạch . Phân tích cho tinh bột bắt đầu với bước E (a) ( 6).
(5) thức ăn viên từ (3) thêm 2 ml DMSO và phân tích cho tinh bột bởi biến đổi thủ tục E (b) bắt đầu từ bước E (b) ( 3) [ tiến hành thủ tục E (a) như đã nêu ] .
(6) Tại bước E (a) ( 5), điều chỉnh âm lượng đến 10 ml ( thay vì 100 ml ) .
(7) Tiến hành thủ tục tiêu chuẩn, E (a) , bắt đầu từ bước E (a) ( 6). Thực hiện điều chỉnh thích hợp để tính toán.
G. Tính toán
Tính toán tổng hàm lượng tinh bột (phần trăm , như trên là cơ sở ) trong mẫu kiểm tra như sau :
tổng số tinh bột% = A F 1000
= A 90
trong đó A = hấp thụ của các giải pháp phản ứng chống lại thuốc thử đọc trống; F = yếu tố để chuyển đổi các giá trị độ hấp thụ glucose g = giá trị đường 100 g / hấp thụ 100 g glucose; 1000 = khối lượng điều chỉnh, tức là 0,1 ml lấy từ 100 ml; 1/1000 = chuyển đổi từ g để mg; 100 / W = chuyển đổi đến 100 mg mẫu thử; 162/180 = yếu tố để chuyển đổi từ đường miễn phí, được xác định, để anhydroglucose, như xảy ra trong tinh bột.
8.XÁC ĐỊNH GLUCOSE, FRUCTOSE, SUCROSE, VÀ MALTOSE TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG (982,14) TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG (982,14)
A. Thiết bị
(a) Sắc ký equipment. - Xem 980.13A ( a) - ( d ) (xem 31.5.04 ) , nhưng yếu tố khả năng thay đổi trong 980.13A (b) (xem 31.5.04 ) 1,5 ; bao gồm phun tự động và đo khúc xạ khác biệt (Waters Associates, Inc , WISP 710B và RI 410 , tương ứng, hoặc tương đương ) ; 250 mm 4,6 mm id Microsorb 5 cột m amin ( Rainin Instrument Co, Inc , Mack Rd, Woburn, MA 01801 USA) , hoặc tương đương ; và sử dụng khối lượng tiêm cụ thể trong phạm vi 10-50 L trong 980.13A (c) (xem 31.5.04 ) .
(b) Bộ lọc cartridge. -100 2 (id) mm (Waters PGS. , Inc), hoặc 15 3.2 (id) mm 7 m bảo vệ amin hộp mực ( Brownlee Labs hoặc tương đương) .
(c) Bảo vệ column. -Tùy chọn . Microsorb 5 m amin, 150 mm 4,6 mm id ( Rainin Instrument Co, Inc), hoặc tương đương, miễn là hệ thống LC tổng thể đáp ứng tiêu chuẩn cột 980.13A (b) (xem 31.5.04 ) .
B. Hoá chất
(a) tiêu chuẩn đường tiêu chuẩn đường cá nhân solution. - khô
( fructose , glucose, sucrose, và maltose ; có sẵn từ Sigma Chemical Co ) 12 giờ ở 60 ° C trong chân không. Hòa tan trong rượu H2O ( 1 + 1 ) để có được nồng độ 3 mg / ml cho mỗi fructose , glucose và maltose và 15 mg / ml đối với sucrose . Sau khi tiêm LC , so sánh đáp ứng cao điểm của phần kiểm tra và tiêu chuẩn, và điều chỉnh nồng độ dung dịch chuẩn tương ứng để có được phản ứng tiêu chuẩn trong vòng 10% của thử nghiệm phản ứng phần .
(b) Điện thoại di động phase. - CH3CN (LC lớp ) và H2O ( tinh khiết thông qua hệ thống Milli-Q , hoặc tương đương ; 80 + 20). Lọc qua Whatman GF / F 0,7 m lọc sợi thủy tinh hoặc thông qua 0,45 m Pall nylon 66 bộ lọc . Tùy chọn, lọc CH3CN và H2O riêng thông qua 0,45 m PTFE và màng cellulose ester , tương ứng . De- khí trong phòng tắm siêu âm trước khi sử dụng . Khác nhau CH3CN - H2O tỷ lệ và tỷ lệ lưu lượng nếu cần thiết để đáp ứng các tiêu chuẩn cột.