(1) Cân bằng bể nước ở 80 ° C. Cân bằng một cốc nước ở nhiệt độ môi trường xung quanh .
(2) Cân 2 ± 0,0001 g mẫu thử vào ống nghiệm , B (j) . Thêm 1 ml dung dịch chuẩn nội triglyceride , C (k) . (Lưu ý: . Khi chạy ma trận của các thành phần không rõ, nó có thể là cần thiết để phân tích mẫu thử mà không cần bổ sung các tiêu chuẩn nội bộ để đảm bảo chống nhiễu ở khu vực đỉnh C13 nên can thiệp đỉnh cao được tìm thấy , diện tích C13 đỉnh cao tiêu chuẩn nội bộ phải được sửa chữa trước khi thực hiện tính toán. )
Thêm 2 ml ethanol , C ( a) , trong khi lắc hoặc khuấy đều để đảm bảo ướt đầy đủ của tất cả các hạt , thêm 10 ml HCl 8M , và đây nắp .
(3) Mix nội dung ca 5 s cho đến khi làm ẩm hoàn toàn. Trộn trên Vortex trộn thêm 5 s . Nơi ống trong 80 ° C tắm nước và giữ 40 phút .
(4) Hủy bỏ ống từ bể nước và ngay lập tức thêm 10 ml ethanol , pha trộn trên Vortex máy trộn 5 , và mát mẻ trong bồn tắm nước khác với nhiệt độ môi trường xung quanh .
(5) Chuyển toàn bộ nội dung của ống nghiệm với 15 ml ethyl ether vào Rohrig ống , B (c) . Rửa ống nghiệm với một 15 ml ethyl ether và chuyển rửa để Rohrig ống . (Chú ý: . Hỗn hợp phải được mát để giữ cho áp lực từ việc xây dựng và thổi axit ra khi ống được lắc Mang kính bảo vệ mắt và găng tay Tránh nắm ống bằng tay trần. . )
(6) Lắc Rohrig ống nhẹ nhàng 1 phút bằng đảo ngược một phần. Trút áp lực thường xuyên bằng cách loại bỏ nút . (Lưu ý: Chất rắn có thể có xu
hướng dính vào bên trong khi lắc ống Nó là cần thiết để đình chỉ như nhiều tes phần càng tốt Sau khi trút , lắc ống mạnh mẽ và xoay từ bên này sang bên kia , trong khi giữ ống ở trên và dưới. . . )
(7) Thực hiện các bước (5 ) và (6 ) với tất cả các bài kiểm tra trước khi thực hiện bước (8).
(8) Thêm 30 ml ether dầu khí và lắc đều trong 1 phút.
(9) Nghiêng Rohrig ống như vậy mà bất kỳ chất rắn trong thân cây lơ lửng trong dung môi. Đặt ống trong rack với vòi hướng lên , cho đến khi giải quyết hoàn tất (khoảng 30 phút) .
(10) Gạn lớp ether qua bộ lọc gồm gạc bông béo hoặc len thủy tinh đóng gói chắc chắn đủ trong thân của phễu để cho phép tự do đi lại của ether vào bình đáy bằng , B (n ), có chứa chip sôi.
(11) Lặp lại khai thác chất béo từ mỗi bài kiểm tra sử dụng 15 ml ethyl ether và 15 ml ether dầu khí. Lắc đều sau mỗi lần thêm ether .
(12) Lặp lại các bước (9) và (10).
(13) Re - chiết xuất chất béo một lần nữa với 15 ml ethyl ether và 15 ml ether dầu khí. Lắc đều sau khi bổ sung các ete .
(14) Lặp lại các bước (9) và (10).
(15) Trong mui xe thông thoáng, dần dần bốc hơi ete từ 250 mL bình phẳng dưới lên gần như khô trên bảng hơi nước dưới dòng N. khô
(16 ) Di chuyển bình từ bảng hơi nước và bay hơi dung môi còn lại chỉ với N .
( Lưu ý: Không thừa sáng chiết xuất với không khí Hoàn thành phân tích chất béo càng sớm càng tốt , trong cùng một ngày như khai thác . . )
E. methyl hóa
(1) Thêm 10 ml dung dịch NaOH methanol , C ( g) , chất béo chiết xuất từ D (16) .
(2) Gắn bình để ngưng làm mát bằng nước , B (o) , chung con dấu với methanol, và nhiệt. Trào ngược 10 phút.
(3) Thêm 10 ml thuốc thử BF3 , C ( f), từ đầu ngưng tụ . Tiếp tục để hồi lưu thêm 5 phút.
(4) Thêm 10 ml n-heptan , C (i ), thông qua đầu ngưng và trào ngược thêm 1 phút .
(5) Hủy bỏ bình từ nhiệt hoặc chuyển nhiệt ra . (Lưu ý: Hãy bình để nguội đến nhiệt độ môi trường xung quanh [ ca 10 min] trước khi gỡ bỏ từ bình ngưng. )
(6) Chuyển hỗn hợp toàn bộ để ống ly tâm , B (p) . Rửa sạch bình đáy bằng với 5 giải pháp mL NaCl , C ( h) . Xoay bình nhẹ nhàng vài lần trước khi chuyển đến rửa ống ly tâm . Kết hợp nội dung của ống cũng bằng cách lắc nhẹ nhàng hoặc bằng cách sử dụng Vortex thiết lập ở tốc độ thấp , và để cho các lớp riêng biệt. Nếu cần thiết, ly tâm để các lớp riêng biệt . Lớp trên có chứa axit béo methyl este trong n-heptan .
(7) Chuyển 1,0 ml lớp trên GC lọ và sử dụng để phân tích.
Bảng 996.01D : Kết quả nghiên cứu liên phòng để xác định chất béo không bão hòa đơn trong các sản phẩm ngũ cốc bằng sắc ký khí mao quản thủy phân axit
Tiêm 1 L fames giải pháp tiêu chuẩn, C (j), tập trung vào GC được biết đến cột B (b), điều kiện sử dụng của B (a). Quan sát sắc cho bất kỳ vật sắc ký.
Hãy chắc chắn rằng tất cả các fames trong giải pháp tiêu chuẩn đã được tách rửa từ cột mao mạch.
Tiêm dung dịch thử 1 L từ E (7) vào cột GC.
G. Tính toán
(Lưu ý: Đối với bất kỳ đỉnh không rõ hoặc chưa được hiệu chỉnh, sử dụng các yếu tố gần nhất phản ứng acid béo hiệu chuẩn và các yếu tố chuyển đổi để tính toán tổng số, bão hòa, không bão hòa, chất béo không bão hòa đơn và.)
Tính toán các yếu tố phản ứng thực nghiệm cho mỗi acid béo như sau:
Ri =
nơi Ri = yếu tố đáp ứng cho acid béo i; Psi = diện tích đỉnh cao của FAME cá nhân tôi trong fames giải pháp tiêu chuẩn; WsC13:0 = mg C13:0 FAME trong fames tiêm giải pháp tiêu chuẩn; PsC13:0= diện tích đỉnh cao của C13:0 FAME trong fames giải pháp tiêu chuẩn; WSIS = mg FAME cá nhân tôi trong tiêm fames giải pháp tiêu chuẩn.
Xác định thời gian lưu tương đối cho mỗi FAME trong fames tiêu chuẩn giải pháp liên quan đến C13:0 và sử dụng chúng để xác định fames khác nhau trong các thử nghiệm.
Tính toán số tiền của mỗi acid béo (như metyl este tương ứng), FME, trong mẫu kiểm tra như sau:
FME = (Pti/PtC13:0) (WtC13:0 1.006/Ri)
nơi PTI = diện tích đỉnh cao của FAME cá nhân tôi trong mẫu thử; PtC13:0 = diện tích đỉnh cao của C13:0 tiêu chuẩn nội bộ trong mẫu thử; WtC13:0 = mg C13:0 triglyceride tiêu chuẩn nội bộ trong mẫu thử nghiệm tiêm. Tính toán
số tiền của mỗi acid béo (như chất béo trung tính tương ứng), FTG, trong mẫu kiểm tra như sau:
FTG = FME fTG
nơi FTG = yếu tố chuyển đổi lý thuyết cho việc chuyển đổi của fames để triglycerides tương ứng của họ. (. Xem bảng 996.01E) Tính số tiền của mỗi acid béo (như axit béo), FFA, trong mẫu kiểm tra như sau:
FFA = FME fFA
nơi FFA = yếu tố chuyển đổi lý thuyết cho việc chuyển đổi của fames để axit béo tương ứng của họ. (Xem bảng 996.01E.)
Tính toán lượng chất béo (tổng của tất cả các axit béo lipid; thể hiện như triglyxerit) trong mẫu kiểm tra như sau:
Total fat, % = 100
nơi W = trọng lượng của phần, g.
Tính toán lượng chất béo bão hòa (thể hiện dưới dạng axit béo; tổng C8:0-C22:0 [tất cả các axit béo không có liên kết đôi]) trong mẫu kiểm tra như
sau
chất béo bão hòa, % = 100
Tính toán lượng chất béo không bão hòa (thể hiện dưới dạng axit béo; C14:1, C16:1, C18:1, cis và trans, C18:2, C18;3, C20;1, và C22:1 trong mẫu kiểm tra như sau:
Chất béo không bão hòa% = 100
Tính toán lượng chất béo không bão hòa đơn (thể hiện dưới dạng axit béo; C14;1, C16;1, C18:1, cis và trans, C20:1, và C22:1 trong mẫu kiểm tra như sau:
chất béo không bão hòa đơn% = 100
5.XÁC ĐỊNH CHẤT BÉO,AXIT TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHUẨN ĐỘ( 939,05) PHÁP CHUẨN ĐỘ( 939,05)
A. Hoá chất
(a) Toluene - rượu - phenolphtalein solution. - 0.02 % . 1 lít toluene thêm 1 L rượu và 0,4 g phenolphthalein .
(b) Rượu - phenolphtalein solution. - 0,04%. 1 lít rượu thêm 0,4 g phenolphthalein .
(c) Kali hydroxit tiêu chuẩn solution. - 0.0178M , cacbonat miễn phí . 1 ml = 1 mg KOH .
B. Thiết bị
(a) Máy nghiền - Thích hợp cho nghiền mẫu thử nghiệm nhỏ . (b) máy xác định chất béo. - Soxhlet hoặc loại thích hợp khác.
( Thimbles giấy Durable hoặc thimbles Alundum RA- 360 rất thích hợp cho khai thác . )