2.4.1 Cỏ Voi
Nguồn gốc ở Nam Phi, phân bố rộng ở các nƣớc nhiệt đới trên thế giới. Quê hƣơng lâu đời của cỏ voi là vùng Uganda nhập vào Mỹ từ năm 1913, Australia 1914, Cuba 1917, Brazil 1920,…ở Việt Nam đƣợc gọi là cỏ Huế vì lần đầu tiên lấy giống ở đây đƣa ra Bắc (1908). Hiện nay đƣợc trồng ở nhiều nơi. Đây là một trong những giống cỏ cho năng suất chất xanh cao nhất trong điều kiện thâm canh ở Việt Nam.
(www.pgrvietnam.org.vn)
Hình 2.7 Cỏ voi
Là cỏ lâu năm, thân đứng có thể cao từ 4 – 6 m, nhiều đốt, những đốt gần gốc thƣờng ra rễ, hình thành cả thân ngầm phát triển thành bụi to, lá hình dải có mũi nhọn ở đầu , nhẵn, bẹ lá dẹt ngắn và mềm có khi dài tới 30 cm, rộng 2 cm. Chùm hoa hình trùy giống đuôi chó màu vàng nhạt.
Cỏ voi chịu đƣợc khô hạn, giai đoạn sinh trƣởng chính trong mùa hè khi nhiệt độ và ẩm độ cao. Sinh trƣởng chậm trong mùa đông và mẫn cảm với sƣơng muối. Nhiệt độ thích hợp nhất cho sinh trƣởng từ 25 - 40oC. Thích hợp nhất với đất giàu dinh dƣỡng, pH = 6 - 7, đất không bùn, úng.
2.4.2 Cây Chuối (Musa paradisiacal)
Chuối có tên khoa học là Musa paradisiaca. Thân cây chuối có họ Musa. Những cây này có gốc từ vùng nhiêt đới, ở Úc và ở Đông Nam Á. Nó đƣợc trồng khắp vùng nhiệt đới. Có ít nhất 107 quốc gia có trồng các loại chuối (Tổ chức Lƣơng thực và Nông nghiệp Thế giới, 2005).
Trang 29 (www.vatgia.com)
Hình 2.8 Cây chuối
2.4.2.1 Thân cây chuối đã lấy buồng
Thân cây chuối có tỷ lệ nƣớc rất cao (93,4 – 94,3%). Việc vận chuyển và bảo quản thân cây chuối phải bảo đảm tránh dập nát để không làm ảnh hƣởng đến chất lƣợng thức ăn của thân cây chuối.
Hình 2.9 Thân cây chuối đƣợc sử dụng trong thí nghiệm
Theo Bùi Quang Tuấn và Nguyễn Văn Hải (2004), “Nghiên cứu sử dụng thân cây chuối lá làm thức ăn cho bê sữa lai sinh trƣởng trong vụ thu đông” cho rằng: cây chuối lá sau thu buồng có thành phần dinh dƣỡng rất thấp (VCK: 6,6%; tỷ lệ protein thô: 0,65%; mật độ năng lƣợng: 131 Kcal/kg).
Trang 30
2.4.2.2 Lá cây chuối
Lá chuối phát triển liên tục từ trung tâm của thân, lƣỡi rộng
Thân và lá cây chuối có thể làm thức ăn cho động vật dƣới dạng tƣơi, hình thức ủ chua hoặc phơi khô (Ecoport, 2010).
Bảng 2.2: Thành phần hóa học của cây chuối
Thực liệu DM CF CP Ash ME (Kcal)
Thân chuối 5,70 2,00 0,6 0,60 117
Lá chuối 22,50 5,40 2,9 2,10 463
Nguồn: Viện Chăn nuôi , 2001
DM: vật chất khô; CP: protein thô; CF: Xơ thô, Ash: khoáng ; ME: Năng lượng trao đổi
Chất kháng dƣỡng tanin trong lá chuối
Theo Ally và Kunjikutty (2000), trong lá chuối có chứa hàm lƣợng tanin là 14,3%.
Tanin làm giảm độ hòa tan và phân giải protein ở dạ cỏ và tăng số lƣợng acid amin không thay thế do đó làm tăng khả năng hấp thu trong ruột non. Phản ứng giữa tanin với protein trong thức ăn phụ thuộc vào nồng độ, cấu trúc và khối lƣợng phân tử của tanin, tỷ lệ tanin/protein trong thức ăn và cấu trúc phân tử protein. Tuy nhiên mức tanin thấp (20 - 40 g/kg vật chất khô thức ăn) làm tăng hiệu quả sử dụng protein của gia súc thì ở mức cao hơn (40 g/kg vật chất khô thức ăn) lại làm giảm lƣợng thức ăn ăn vào, giảm tỷ lệ tiêu hóa xơ trong dạ cỏ, thậm chí giảm tiêu hóa cả protein (Nguyễn Xuân Trạch, 2004).
Khả năng tiêu hóa và phân hủy
Có sự khác biệt đáng kể trong phân hủy và tiêu hóa giữa lá và thân chuối. Không giống nhƣ các loại cây trồng khác, tỷ lệ tiêu hóa của thân cây cao hơn (75%) so với lá (65%) (Floulkes et al., 1978). Các hàm lƣợng tanin cao trong lá cũng có thể giải thích khả năng tiêu hóa của nó cũng thấp hơn (Geoffroy et al., 1978).
Trang 31
Chƣơng 3: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu
3.1.1 Địa điểm
Đề tài tiến hành tại Phòng Chăn nuôi chuyên khoa - E103, Bộ môn chăn nuôi, Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, Trƣờng Đại học Cần Thơ.
Dịch dạ cỏ dùng để thí nghiệm in vitro đƣợc lấy từ dịch dạ cỏ bò tại là mổ Hoàng Minh, xã Đông Thành, thị xã Bình Minh, tỉnh Vĩnh Long.
3.1.2 Thời gian
Đề tài đƣợc thực hiện từ 8/2014 đến 11/2014
3.2 Phƣơng tiện
3.2.1 Thức ăn thí nghiệm
Cỏ voi, thức ăn hỗn hợp (TĂHH), chuối cây và lá chuối cây đƣợc trồng ở Vĩnh Long. Bảng 3.1: Thành phần dƣỡng chất các thức ăn thí nghiệm Thực liệu (%) Thành phần dƣỡng chất DM CP CF Ash ME (Kcal) Cỏ voi 18,1 1,82 5,13 1,04 341 Thân chuối 5,70 0,6 2,00 0,60 117 Lá chuối 22,50 2,9 5,4 2,10 463 TĂHH 87 17,24 12 2.600
Nguồn: Viện Chăn nuôi , 2001
DM: vật chất khô; CP: protein thô; CF: Xơ thô, Ash: khoáng ; ME: Năng lượng trao đổi
Trang 32
3.1.2 Dụng cụ dùng để lấy dịch dạ cỏ của bò
Bình thủy dùng để giữ ấm, khi lấy dịch dạ cỏ sẽ đƣợc lọc sơ bằng túi vải sau đó đƣợc giữ ấm trong bình thủy để đảm bảo nhiệt độ không bị thay đổi đáng kể khi di chuyển về phòng thí nghiệm. Vi sinh vật trong dịch dạ cỏ có thể bị chết nếu dịch dạ cỏ không đảm bảo nhiệt độ cho vi sinh vật hoạt động.
Hình 3.6 Bình thủy dùng để lấy dịch da cỏ Hình 3.3 Thân chuối Hình 3.4 Lá chuối
Trang 33
3.1.4 Thiết bị dùng để thí nghiệm
- Keo ủ: dùng để ủ thực liệu trong 48h.
- Bình đo thể tích khí: dùng để đo thể tích khí sinh ra khi ủ thực liệu. - Máy Triple Plus + IR: đo nồng độ CH4 có trong thể tích khí sinh ra - Bồn ủ: đƣợc điều chỉnh nhiệt độ ổn định 38 - 39oC.
- Khung inox: dùng để cố định keo ủ. - Máy đo pH
- Một số dụng cụ khác trong phòng thí nghiệm: ống đong, bình tia, quặng thủy tinh, cân…
3.3 Phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm
Thí nghiệm nghiên cứu ảnh hƣởng của các mức bổ sung thân và lá chuối với khẩu phần cơ bản cỏ voi lên khả năng sinh khí và các tỷ lệ tiêu hóa bằng phƣơng pháp invitro với dịch dạ cỏ bò.
3.3.1 Mục tiêu thí nghiệm
Bằng phƣơng pháp in vitro tiến hành khảo sát mức độ các khẩu phần cho khả năng tiêu hóa cao nhất, khảo sát lƣợng khí và hàm lƣợng khí sinh ra.
3.3.2 Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm đƣợc bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên 5 nghiệm thức và lặp lại 5 lần. Tổng số đơn vị thí nghiệm là 5 x 5 = 25 đơn vị thí nghiệm.
Thời điểm theo dõi 3 giờ, 6 giờ, 12 giờ và 24 giờ sau khi tiến hành thí nghiệm với dịch dạ cỏ.
Các thực liệu đƣợc nghiền nhuyễn và bổ sung theo các mức độ: Đối chứng : 30% TĂHH + 70% cỏ voi
Thân chuối 10%: 30% TĂHH + 60% cỏ voi + 10% thân chuối Lá chuối 10%: 30% TĂHH + 60% cỏ voi + 10% lá chuối Thân chuối 20%: 30% TĂHH + 50% cỏ voi + 10% thân chuối Lá chuối 20%: 30% TĂHH + 50% cỏ voi + 20% lá chuối
Trang 34
Bảng 3.2: Thành phần phần trăm thực liệu thí nghiệm
Thực liệu
Nghiệm thức (%)
Đối chứng Thân chuối
10% Lá chuối 10% Thân chuối
20% Lá chuối 20% Cỏ Voi 70,0 60,0 60,0 50,0 50,0 TĂHH 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 Thân chuối 0,0 10,0 0,0 20,0 0,0 Lá chuối 0,0 0,0 10,0 0,0 20,0 Tổng 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 Bảng 3.3: Sơ đồ bố trí thí nghiệm NT Lặp lại Đối chứng Thân chuối 10% Lá chuối 10% Thân chuối 20% Lá chuối 20% 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - 4 - - - - - 5 - - - - - NT: Nghiệm thức
3.3.3 Các chỉ tiêu theo dõi
- Thành phần dƣỡng chất thức ăn trong các thí nghiệm đƣợc phân tích theo tiêu chuẩn AOAC (1990).
- Định lƣợng tanin trong thân và lá chuối bằng phƣơng pháp Leventhal. - pH dung dịch trƣớc và sau khi ủ thực liệu.
- Tổng lƣợng khí sinh ra (ml) ở các mốc thời gian: 0 giờ, 3 giờ, 6 giờ, 9 giờ, 12 giờ, 24 giờ.
- Nồng độ % CH4 thời điểm 24 giờ và tỉ lệ tiêu hóa vật chất khô DMD.
3.3.4 Tiến hành thí nghiệm
Phƣơng pháp định lƣợng tanin
Định lƣợng tanin trong thân và lá chuối bằng phƣơng pháp Leventhal. Nguyên lý: Tanin là hợp chất khử khi bị oxi hóa bởi Kalipermanganat trong môi trƣờng axit với chất chỉ thị Indigocarminsex tạo thành khí cacbonic và nƣớc đồng thời làm mất màu xanh của Indigocarmin theo phản ứng sau:
Trang 35
Thí nghiệm in Vitro
Bƣớc 1: Cân mẫu thức ăn đã có công thức khẩu phần theo các bảng lƣợng cân các nghiệm thức ứng với từng mức độ khi đem đi thí nghiệm, sau khi cân xong cho mẫu vào keo ủ tối màu.
Bƣớc 2: Pha dung dịch đệm. Dung dịch đệm đƣợc sử dụng trong thí nghiệm là theo mô tả của Tilley và Terry (1963).
Bảng 3.4: Thành phần dung dịch đệm STT Hóa chất Lƣợng cân (g/lít) 1 NaHCO3 9,80 2 KCl 0,57 3 CaCl2 0,04 4 Na2HPO4.12H2O 9,30 5 NaCl 0,47 6 MgSO4.7H2O 0,12 7 Cystein 0,25
Nguồn: Tilley và Terry, 1964
Công thức pha đƣợc trình bày trong bảng 3.2. Dung dịch sau khi pha xong đƣợc sục khí CO2 cho đến khi chuyển từ đục sang trong suốt. Chúng ta có thể làm ấm dung dịch đệm bằng cách cho thùng chứa dung dịch vào bồn ủ khoảng 15 phút, nhiệt độ nƣớc trong bồn ủ đƣợc kiểm soát ở 38 - 39ºC trƣớc khi sử dụng để tạo điều kiện nhiệt độ tốt, tránh sốc nhiệt cho vi sinh vật dạ cỏ. Dùng một bình thủy tinh để pha dung dịch dạ cỏ và dung dung dịch đệm theo tỷ lệ dung dịch đệm: dịch dạ cỏ là 4:1.
Bƣớc 3: Thu thập dịch dạ cỏ. Dịch dạ cỏ đƣợc lấy thông qua lỗ dò của trâu, dịch dạ cỏ đã lấy đƣợc đựng trong bình giữ nhiệt để giữ ấm và chuyển ngay về phòng thí nghiệm. Tại đây dịch dạ cỏ đƣợc lọc qua 4 lớp vải muslin vào bình thủy tinh tối màu, sau đó đem đi sục khí CO2 rồi đậy kín tạo môi trƣờng yếm khí và ủ ấm ở nhiệt độ 38 - 39oC trƣớc khi dùng để thực hiện thí nghiệm. Dựa vào số lƣợng đơn vị thí nghiệm và lƣợng thực liệu khi đem ủ là bao nhiêu từ đó ta tính đƣợc lƣợng dạ cỏ cần dùng trong thí nghiệm. Đối với 1gDM thì cần 20 ml dịch dạ cỏ.
Bƣớc 4: Trộn dịch dạ cỏ đã lấy vào dung dịch đệm, trƣớc khi cho hỗn hợp dịch dạ cỏ và dung dịch đệm vào keo ủ chúng ta cần khuấy đều để cho lƣợng VSV phân bố đều. Dùng ống đong, đong 400 ml hỗn hợp dịch dạ cỏ và dung dịch đệm cho vào keo ủ đã có sẵn 4 gDM mẫu đã cân, tránh để mẫu dính trên thành keo ủ, đậy kín nắp keo ủ, dùng đất sét làm kín xung quanh kẽ hở
Trang 36
giữa nắp keo và miệng keo ngăn không cho không khí đi vào cũng nhƣ khí thoát ra ngoài ảnh hƣởng đến kết quả thí nghiệm.
Dùng ống nhựa loại 2,5 x 4 mm, chiều dài 1m nối keo ủ thực liệu với bình đo thể tích khí sinh ra thông qua 2 ru ngoài của ống đƣợc vặn kính hoàn toàn vào 2 nắp của keo ủ và keo đo khí.
Dùng bơm tiêm 50 ml/cc lấy không khí ra khỏi hệ thống thông qua van 3 ngã đƣợc nối vào ống nhựa sao cho mực nƣớc trong bình tia dâng lên ở mức 100 ml, ngƣng lấy không khí, khóa van ngăn không cho không khí đi vào và đảm bảo khí lƣu thông đƣợc giữa keo ủ và bình đo thể tích khí.
Sắp xếp tất cả các keo ủ thực liệu vào khung inox cho vào bồn ủ nhiệt độ 38 - 39ºC tiến hành ủ và theo dõi lƣợng khí sinh ra tƣơng ứng với mực nƣớc hạ xuống trong đo thể tích khí sau mỗi 3 giờ trong 24 giờ.
Bƣớc 5: Tính tỷ lệ tiêu hóa. Sau khi mẫu ủ trong 48 giờ đem ra lọc bằng túi vải đã xác định trọng lƣợng, lọc xong đem sấy ở 105oC cho đến trọng lƣợng không đổi.
Tỷ lệ tiêu
hóa DC (%) =
Lƣợng DC ăn vào - Lƣợng DC trong phân
x 100 Lƣợng dƣỡng chất ăn vào
3.3.5 Phƣơng pháp xử lý thống kê
Số liệu thô đƣợc tính sơ bộ bằng bảng tính Microsoft Excel 2007. Sau đó đƣợc xử lý thống kê bằng phƣơng pháp phân tích phƣơng sai (ANOVA) theo mô hình tuyến tính tổng quát (General Linear Model) trên phần mềm Minitab 16. Khi có sự khác biệt giữa các nghiệm thức sẽ dùng phép thử Tukey để tìm sự khác biệt từng cặp nghiệm thức.
Trang 38
Chƣơng 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN
4.1 Thành phần hóa học các thực liệu trong thí nghiệm
Bảng 4.1: Thành phần thí nghiệm hóa học (%DM) các thực liệu dùng trong thí nghiệm
Thực liệu DM OM NDF Ash CP Tanin
Cỏ voi 18,1 90,3 54 9,7 9,75 -
TĂHH 78,1 - - - 15 -
Thân chuối 5,3 85,9 65 14,1 10,7 -
Lá chuối 19,1 93,6 48,8 6,4 13,8 12,9
DM: Vật chất khô, OM: Vật chất hữu cơ, CP: Đạm thô, NDF: Xơ trung tính, Ash: khoáng tổng số
Kết quả ở bảng 4.1 cỏ voi đƣợc sử dụng trong thí nghiệm có DM và CP là 18,1% và 9,75% thấp hơn kết quả của Mtengeti et al., (2006) có DM và CP là 19,0% và 9,6% và Trƣơng Văn Hiểu có DM và CP là 18,4% và 10,2%.
Thức ăn hỗn hợp dùng trong thí nghiệm là thức ăn Hi-pro dạng viên dùng cho bò thịt của công ty Tidaphaco.
Thân cây chuối sau khi lấy buồng có DM là 5,3% thấp hơn kết quả nghiên cứu của Nguyễn Hữu Văn (2012) có DM là 6,06% và Viện Chăn nuôi quốc gia (1995) có DM là 5,7%. Kết quả OM (85,9%) của thân chuối cao hơn nghiên cứu của Nguyễn Hữu Văn (2012) có OM là 85,7% và Trần Thị Đẹp (2012) có OM là 84,7%, theo kết quả của Nguyễn Hữu Văn (2012) có Ash là 14,3% và Trần Thị Đẹp (2012) có Ash là 15,5% cao hơn Ash của thân chuối sử dụng trong thí nghiệm có Ash là 14,1%. Phần trăm CP của thân chuối trong thí nghiệm là 10,7% cao hơn kết quả của Viện Chăn nuôi (2001) có CP là 10,5%.
Lá chuối sử dụng trong thí nghiệm có DM và CP là 19,1% và 13.8 % thấp so với kết quả của Viện Chăn nuôi (2001) có DM và CP là 22,5% và 15,2%. Kết quả Ash của lá chuối thấp hơn nghiên cứu của Ally and Kunjikutty (2000) có Ash là 7,7%.
Thành phần tanin của lá chuối trong thí nghiệm là 12,9% thấp hơn kết quả nghiên cứu của Ally and Kunjikutty (2000) có thành phần tanin là 14,3%.
Qua bảng kết quả phân tích trên chúng tôi nhận thấy có sự chênh lệch so với các nghiên cứu trƣớc, có thể do giống, độ tuổi, điều kiện trồng khác nhau, đƣợc thu hoạch ở khoảng thời gian khác nhau và cách thu hoạch khác nhau.
Trang 39
4.2 Kết quả thí nghiệm
Bảng 4.2: Ảnh hƣởng của các mức bổ sung thân chuối và lá cây chuối đến thể tích khí (ml) ở 3, 6 , 12 , 24 giờ giờ sau khi ủ.
Nghiệm thức Đối chứng Thân chuối 10% Lá chuối 10% Thân chuối 20% Lá chuối 20% SEM P 24 giờ 145,25a 144,0a 99,0b 147,0a 94,0c 1,140 0,001
Các giá trị trung bình mang các chữ cáia, b, c khác nhau trên cùng một cột là khác biệt có ý nghĩa
thống kê (P<0,05).
Hình 4.1 Biểu đồ ảnh hƣởng của các mức độ bổ sung thân chuối và lá cây chuối đến thể tích khí (ml)
Qua bảng 4.2 và hình 4.1 cho ta thấy lƣợng khí sinh ra (ml) ở in vitro của các nghiệm thức đều tăng dần từ thời điểm 3 giờ đến 24 giờ.
Ở các thời điểm 3, 6, 12, 24, 48 giờ thì lƣợng khí sinh ra giữa các nghiệm thức đều khác biệt có ý nghĩa thống kê (P<0,05).
Tại thời điểm 24 giờ nghiệm thức thân chuối 10% (144,0 ml) thấp hơn so với nghiệm thức đối chứng (145,25 ml) và thể tích khí ở nghiệm thức thân chuối 20% (147 ml) cao hơn so với nghiệm thức đối chứng (145,25 ml) có ý nghĩa thống kê (P<0,05), kết quả này phù hợp với kết quả của Trần Thị Đẹp (2012).
Lá chuối 10% (99,0 ml), lá chuối 20% (94,0 ml) thấp hơn so với nghiệm