Bảng 16: Kết quả các bệnh tích đại thể trên chuột thí nghiệm
Bệnh tích Kiểm tra Nhiễm Tỉ lệ (%)
Phổi xuất huyết 3 3 100
Phổi xung huyết 3 2 66,67
Tim xung huyết 3 2 66,67
Gan xuất huyết 3 1 33,33
Thận xuất huyết 3 1 33,33
Lách xung huyết 3 1 33,33
Ruột trống thức ăn 3 1 33,33
Mí mắt sưng 3 1 33,33
Từ kết quả bảng 16 cho thấy trong 3 chuột chết xuất hiện các bệnh tích phổ biến là phổi có hiện tượng xuất huyết (100%), tim bị xung huyết và phổi bị xung huyết (66.67%), các bệnh tích như gan xuất huyết, thận xuất huyết, lách xung huyết, ruột không còn thức ăn, mí mắt sưng xuất hiện ít (33.33%). Điều này có thể được giải thích theo Johnson Al et al. (2010) chứng minh độc tố botulin gây khó thở, đặc biệt ở type C, điều này phù hợp với bệnh tích trên phổi, bên cạnh đó theo kết quả từ Deprez (2006) cho thấy biểu hiện sự thay đổi nhịp tim cũng xuất hiện. Điều này phù hợp với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Đức Hiền (2012) cho thấy ảnh hưởng của độc tố botulin chủ yếu thấy phổ biến ở tim và phổi. Ngoài ra, với bệnh tích ở mí mắt chuột khi chết bị sưng là do độc tố botulin làm ngăn ngừa việc dẫn truyền thần kinh kết nối tới các cơ, dẫn đến tê liệt (Burgen et al.,
46
Chương 5
KẾT LUẬN- ĐỀ NGHỊ
5.1 Kết luận
Qua thời gian thực hiện đề tài chúngtôi rút ra kết luận sau:
Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Clostridium spp. trên đất tại huyện Phú Tân và Châu Phú, tỉnh An Giang rất cao (86,96%). Trong đó, tỷ lệ nhiễm Clostridium botulinum là 17,39%, đây là nguy cơ cao gây chứng ngộ độc trên vịt chạy đồng và 69,57% nhiễm vi khuẩn
Clostridium colinum.
Kết quả kháng sinh đồ cho thấy các vi khuẩn Clostridium spp. phân lập được nhạy cảm hoàn toàn với norfloxacin (100%), ngược lại vi khuẩn kháng hoàn toàn với penicillin và trimethoprime (100%). Trong đó có 1 mẫu kháng với 4 loại kháng sinh (tetracyline, erythromycin, penicillin và trimethoprime), 4 mẫu kháng với 3 loại kháng sinh (erythromycin, penicillin và trimethoprime), 22 mẫu kháng với 2 loại kháng sinh (penicillin và trimethoprime).
Kết quả thử độc lực của vi khuẩn Clostridium botulinum cho thấy vi khuẩn sản sinh độc tố làm 13 trong tổng số 16 chuột có biểu hiện khác thường (81,25%) và 3 chuột chết (18,75%). Trong đó, các triệu chứng thường gặp trên chuột như ủ rủ, vận động chậm (92,31%), sợ hãi (38,46%), ăn ít và thở bụng (23,08%), chân sau yếu (7,69%). Các bệnh tích phổ biến trên tim và phổi, cụ thể phổi xuất huyết 100%, phổi xung huyết và tim xuất huyết chiếm 66,67%.
5.2 Đề nghị
Nên nghiên cứu thêm về các yếu tố môi trường như nước, cây cỏ, xác chết động vật, độ pH của đất, sông ngòi,… để có thể khẳng định thêm các nguyên nhân gây bệnh “cúm cần” trên vịt nhằm đưa ra biện pháp phòng ngừa thích hợp đối với vi khuẩn
Clostridium spp.
Xác định độc lực của vi khuẩn Clostridium spp. bằng các kỹ thuật cao hơn để kiểm tra thêm về khả năng gây bệnh của loài vi khuẩn này.
Tuyên truyền cho các nhà chăn nuôi không nên chăn thả gia súc, gia cầm trong những ngày đầu tiên trên những cánh đồng vừa khô hạn lâu, nắng nóng kéo dài vừa có mực nước lên xuống đột ngột, đây là vùng đất có nguy cơ gây bệnh rất lớn.
47
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tham khảo trong nước
1. Bộ môn vi sinh, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh (2001). Kháng sinh đồ bằng phương pháp khuếch tán kháng sinh với đĩa ĐSK –dics. Trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh.
2. Nguyễn Bá Hiên (2001). Một số vi khuẩn đường ruột thường gặp và biến động của chúng ở gia súc khỏe mạnh và bị tiêu chảy tại vùng ngoại thành Hà Nội. Điều trị thử nghiệm. Luận án Tiến sỹ Nông Nghiệp, Trường Đại Học Nông Nghiệp I.
3. Nguyễn Đức Hiền (2012). Phân lập và xác định tính nhạy cảm kháng sinh của vi khuẩn (Clostridium botulinum) từ vịt và môi trường chăn thả tại thành phố Cần Thơ. Tạp chí khoa học 2012:22c, trang 64-71.
4. Nguyễn Hữu Hưng, 2006. Nuôi động vật thí nghiệm.
5. Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2001). Vi sinh vật học thú y. Nhà xuất bản Nông nghiệp Hà Nội.
6. Nguyễn Văn Sửu, Nguyễn Quang Tuyên (2008). Tình hình dịch tễ bệnh viêm ruột hoại tử ở lợn con tại một số huyện của Thái Nguyên. Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 15(3), trang 32-39.
7. Phan Thanh Phượng, Trần Thị Hạnh, Phạm Thị Ngọc, Ngô Quang Hưng (1996). Nghiên cứu xác định vai trò của vi khuẩn yếm khí Clostridium erfringens trong hội chứng tiêu chảy ở lợn. Tạp chí Nông nghiệp công nghiệp thực phẩm. tr. 495-496. 8. Trần Linh Thước (2010). Xây dựng quy trình và chế tạo các bộ kit PCR để xét
nghiệm các vi khuẩn gây bệnh, gây ngộ độc thực phẩm. NXB ĐH Quốc gia Tp.HCM.
9. Trần Thị Hạnh, Kiều Thị Dung, Lưu Quỳnh Hương, Đặng Xuân Bình (2000). Xác định vai trò của E. colivà Clostridium perfringens đối với bệnh ỉa chảy ở lợn con và bước đầu nghiên cứu chế tạo một số sinh phẩm phòng bệnh. Kết quả nghiên cứu Khoa học và kỹ thuật Thú y (1996 – 2000). Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội, tr. 190-199.
10. Trương Minh Trung (2013). Bước đầu phân lập vi khuẩn Clostridium spp. trên vịt vó biểu hiện liệt cổ, liệt cánh, liệt chân và kiểm tra tính nhạy cảm của một số loại kháng sinh với vi khuẩn, trang 35- 40.
Tài liệu tham khảo nước ngoài
1. Alvarez-Perez S, Blanco JL, Bouza E, P Alba, Gibert X, Maldonado J, Garcia ME (2009). Prevalence of Clostridium difficile in diarrhoeic and non-diarrhoeic
piglets. Vet Microbiol, 137 (3-4): 302-305.
2. Anonymous (2006). Investigation into Outbreaks of Clostridium.
3. Arnon SS, Schechter R, Inglesby TV, Henderson DA, Bartlett JG, Ascher MS, Eitzen E, Fine AD, Hauer J, Layton M, Lillibridge S, Osterholm MT, O'Toole T, Parker G, Perl TM, Russell PK, Swerdlow DL, Tonat K (2001). Botulinum toxin as
48
a biological weapon: medical and public health management. JAMA: The Journal of the American Medical Association 285 (8): 1059–70. PMID
11209178.Retrieved on 2012-02-16.
4. Balauca N (1978). Experimentelle Untersuchungen über die Clostridien Infektion und Intoxikation bei Geflügel, unter besonderer Berücksichtigung der Kokzidiose. Arch Vet, 13:127-141.
5. Bauer A.W., Kirby W.M., Sherris J.C., (1966). Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol., 45, pp. 493-496.
6. Beier, R., G. Amtsberg, and M. Peters. (1994). Bacteriological investigation of the occurrence and significance of Clostridium difficile in horses. Pferde- heilkunde 10:3–7.
7. Berkhoff & H. A (1991). Ulcerative enteritis (quail disease). p. 258–264. 8. Burgen. S. V., Dickến & Zatman. J. (1949). The action of botulinum toxin on the
neuromuscular junction. Journal of Physiology 109, 10-24.
9. Carle, Rattone. G (1884). Studio Sperimentale sull’ eziologia del tetano. Gior. R. A cad. Med. Torino 32.174-180.
10. Cato, E. P., W. L. George, and S. M. Finegold (1986). Genus Clostridium, p.1141–1200. In P. H. A. Sneath, N. S. Mair, M. E. Sharpe, and J. G. Holt (ed.), Bergey’s manual of systematic bacteriology, vol. 2. Williams and Wilkins, Baltimore, Md.
11. Cherington M (1998) Clinical spectrum of botulism. Muscle Nerve, 21: 701-710. 12. Creti R., Fenicia J., Aureli P. (1990). Occurrence of Clostridium botulinum in the
soil of the vicinity of Rome. Curr. Microbiol 20: p.317.
13. Debast SB, van Leengoed LA, Goorhuis A, Harmanus C, Kuijper EJ, Bergwerff AA. (2009). Clostridium difficile PCR ribotype 078 toxinotype V found in diarrhoeal pigs identical to isolates from affected humans.Environ Microbiol. 11(2):505–511.
14. Deprez, P.R., (2006). Tetanus and botulism in animals. In: Mainil, J. (Ed.),
Clostridial in Medical, Veterinary and Food Microbiology- Diagnosis and Typing. European Commission, Luxembourgy, pp.27-36.
15. Dressler D, Benecke R. (2007). Pharmacology of therapeutic botulinum toxin preparations. J Disability & Rehabilitation 29:1761-86.
16. Droual R, Farver TB, Bickford AA (1995). Relationship of sex, age, and
concurrent intestinal disease to necrotic enteritis in turkeys. Avian Dis 39:599–605. 17. Droual R, Shivaprasad HL, Chin RP (1994). Coccidiosis and necrotic enteritis in
turkeys. Avian Dis 38:177–183.
18. Franciosa (2002). Clostridium spp. In: Rogin- ski, H. et al. (eds). Encyclopedia of Dairy Sciences. London, UK: Academic Press, p. 456-463.
19. Franciosa, G., F. Floridi, A. Maugliani, and P. Aureli (2004). Differentiation of the gene clusters encoding botulinum neurotoxin type A complexes in Clostridium botulinum type A, Ab, and A(B) strains. Appl. Environ. Microbiol. 70:7192-7199.
49
20. Franciosa, G., L. Fenicia, M. Pourshaban, and P. Aureli. (1997). Recovery of a strain of Clostridium botulinum producing both neurotoxin A and neurotoxin B from canned macrobiotic food. Appl. Environ. Microbiol. 63:1148-1150. 21. Frazier, K. S., A. J. Herron, M. E. Hines, II, J. M. Gaskin, and N. H.
Altman (1993). Diagnosis and enterotoxemia due to Clostridium difficile in captive ostriches (Struthio camelus). J Vet Diagn Invest 5:623— 625.
22. Gallagher BA (1924). Ulcerative enteritis in quail. Am Game Prot Assoc Bull:14–15.
23. Glover, J. S. ( 1951). Ulcerative enteritis in pigeons. Can J Comp Med Vet Sci 15:295—297.
24. H. W. Hauschild (1989). Clostridium botulinum. In M. P. Doyle (ed.). Food-borne Bacterial Pathogens. Marcel Dekker, New York. Pp. 111–189.
25. Halpern JL, Neale EA (1995). Neurospecific binding, internalization, and retrograde axonal transport. Curr Top Microbiol Immunol, 195: 221-241. 26. Harris, A. H. (1961). An outbreak of ulcerative enteritis amongst
bobwhite quail (Colinus virginianus). Vet Rec 73:11—13.
27. Harvey, S. M., J. Sturgeon, and D. E. Dassey (2002). Botulism due to Clostridium baratii type F toxin. J. Clin. Microbiol. 40:2260-2262.
28. Hatheway CL (1995). Botulism: The present status of the disease. Curr Top Microbiol Immunol, 195:55-75.
29. Hatheway P. (1990). Toxigenic Clostridium, Clin Microbiol Rev; 3:66- 98.
30. Hatheway, C. L., McCroskey, L. M. (1987). Examination of faeces for diagnosis of infant botulism in 336 patients. J. Clin. Microbiol 25 (12): 2334–
2338. PMC 269483.PMID 3323228.
31. Holdeman, L.V. (1970). The ecology and natural history of Clostridium botulinum. Journal of Wildlife diseases Vol. 6, No. pp. 205-210.
32. Holzer, V. E. (1962). Botulism from inhalation. Med. Klin. 57:1735-1738. 33. Hopman NE, Keessen EC, Harmanus C, Sanders IM, van Leengoed LA, Kuijper
EJ, Lipman LJ (2011). Acquisition of Clostridium difficile by piglets. Vet Microbiol;149(1-2):186–192.
34. Huss, H. H. (1980). Distribution of Clostridium botulinum. Appl. Environ. Microbiol39 (4): 764–769.
35. Inglett, P. W. (2005). Stable nitrogen isotopic ratios as an indicator of wetland eutrophication. A case study in the Florida Everglades. Ph.D.
dissertation, Univ. of Florida.
36. Johannsen (1963). Clostridium botulinum in Sweden and the adjacent waters. J. Appl. Bacteriol. 26:43–47.
37. Johnson AL, McAdams SC, Whitlock RH (2010). Type A botulism in horses in the United States: a review of the past ten years (1998-2008). J Vet Diagn Invest
50
38. Johnson, E. A., Summanen, P., & Finegold, S. M. (2007). Clostridium. In P. R. Murray (Ed.), Manual of Clinical Microbiology (9th ed., pp. 889-910).
Washington, D.C.: ASM Press.
39. Johnson, R. O., S. A. Clay, and S. S. Arnon (1979). Diagnosis and management of infant botulism. Am. J. Dis. Child. 133:586.
40. Jones, R. L., R. K. Shideler, and G. L. Cockerell (1988). Association of
Clostridium difficile with foal diarrhea. In Proc. 5th Int. Conf. Equine Infect. Dis. The University Press of Kentucky, Lexington.
41. Jones, R. L., W. S. Adney, and R. K. Shideler (1987). Isolation of Clostridium difficile and detection of cytotoxin in the feces of diarrheic foals in the absence of antimicrobial treatment. J. Clin. Microbiol. 25:1225–1227.
42. Katiyar, A. K., A. G. R. Pillai, R. P. Awadhiya, and J. L. Vegad (1986). An outbreak of ulcerative enteritis in chickens. IndianJ Anim Sci 56:859— 862.
43. Kaufmann, O.W. and L.D. Fay (1964). Clostridium botulinum type E toxin in tissues of dead loons and gulls. Michigan State University Agricultural Experiment Station Quarterly Bulletin. 47(2):236-242.
44. Kirma, N., J. L. Ferreira, and B. R. Baumstark (2004). Characterization of six type A strains of Clostridium botulinum that contain type B toxin gene
sequences. FEMS Microbiol. Lett. 231:159-164.
45. Kitasato. S. (1889). Die Widerstandfihigkeit der Cholerabacterien gegenn das Eintrocknen und gegen Hitze. Z. H. Infektionskrankh., 6, 134-140.
46. Kondo, F., J. Tottori, and K. Soki (1988). Ulcerative enteritis in broiler chickens caused by Clostridium colinum and in vitro activity of 19 antimicrobial agents in tests on isolates. Poult Sci 67(10):1424—1430. 47. Le Dune E (1935). Ulcerative enteritis in ruffe grouse. Vet Med 30:394–395. 48. Lindström, M; Korkeala, H (Apr 2006). Laboratory diagnostics of
botulism. Clinical Microbiology Reviews 19 (2): 298–314.
49. M. W. Eklund, F. T. Poysky M. E. Peterson, L. W. Peck, Brunson (1984). Type E botulism in salmonids and conditions contributing to outbreaks. Aquaculture 41:293–309.
50. M. W. Eklund, M. E. Peterson, F. T. Poysky, L. W. Peck, J. F. Conrad (1982). Botulism in juvenile Coho salmon (Onocorhynchus kisutch) in the United States. Aquaculture 27:1–11.
51. MacKenzie, Debora (14 October 2013). New botox super-toxin has its details censored. NewScientist. Retrieved 15 October 2013.
52. Mechem CC & Walter FG (1994). Wound botulism. Vet Human Toxicol, 36(3): 233-237.
53. Mitchell, W. R. and S. Rosendal (1987). Type C botulism: The agent, host susceptibility, and predisposing factors. In M. W. Eklund and V. R. Dowell, Jr. (eds.). Avian Botulism: An International Perspective. Charles C. Thomas: Springfield, IL, 55—71.
51
54. Mohammed Sebaihial, et al. (2007). Clostridium novyi, edited by student of Rachel Larsen and Kit Pogliano.
55. Morse, G. B. (1907). Quail disease in the United States.
56. Naumann, M, Lowe, NJ (2001). Botulinum toxin type A in treatment of bilateral primary axillary hyperhidrosis: randomised, parallel group, double blind, placebo controlled trial. BMJ 323: pp. 596-599.
57. Naumann, MK, Hamm, H, Lowe, NJ (2002). Effect of botulinum toxin type A on quality of life measures in patients with excessive axillary sweating: a randomized controlled trial. Br J Dermatol 147: pp. 1218-1226.
58. Parish, W. E. (1961). Necrotic enteritis in the fowl (Gallus gallus
domesticus). I. Histopathology of the disease and isolation of a strain of Clostridium welchii. J Comp Pathol 71:377—393.
59. Peck MW, Stringer SC, Carter AT (2011). Clostridium botulinum in the post- genomic era. Food Microbiol;28(2):183-91.
60. Peck, MW (2009). Biology and genomic analysis of Clostridium botulinum..Advances in microbial physiology 55: 183–265, 320.
61. Peckham (1978). DAVIS, R.B ( 1973). Ulcerative enteritis in chickens:
Coccidiosis and stress as predisposing factors. Poultry Science,52,1283-1287. 62. Peckham, M. C. (1959). An anaerobe, the cause ofulcerative enteritis (Quail
disease). Avian Dis. 3:471-477.
63. Peckham, M. C. (1960). Further studies on the causative organisms of ulcerative enteritis. Avian Dis. 4: 449-456.
64. Poxton, I. R. (2006). Other Clostridium spp. In S. H. Gillespie, & P. M. Hawkey (Eds.), Principles and Practice of Clinical Bacteriology (2nd ed., pp. 567-574). West Sussex: John Wiley & Sons, Ltd.
65. Quinn P. J, Carter M. E, Markey B, Carter G. R. (1999). Clostridium species, Clinical veterinary microbiology. Chapter 17. page 191-208.
66. Robert T.A., and Aitken I.D (1974). Botulism in birds and mammals in Great Britan and an assessement of toxicity of Clostridium botulism type C tõin in domestic fowl. In Barker A.N., Gould G.W., and Wolf J. (eds). Spore research 1973. Acedemic pres, London, pp. 1-9.
67. Rosen, M.N (1971). Botulism. In J.W. Davis, R. C. Anderson, L. Karstad, and D. O. Trainer (eds.). Infectious and Parasitic Diseases ò Wild Birds, Iowa State University Press: Ames. IA, 100-117.
68. Sato S ( 1987). Control of botulism in poultry flocks. In M.W. Eklund and V.R.Dowells (eds). Avian botulism: an international perspective. Springdfield, IL, pp. 349-356.
69. Segner, W. P., and C. F. Schmidt (1971). Heat resistance of spores of marine and terrestrial strains of Clostridium botulinum type C. Appl. Microbiol. 22:1030- 1033.
70. Shapiro RL, Hatheway C, Swerdlow DL (1998). Botulism in the United States: a clinical and epidemiologic review. Ann Intern Med, 129(3): 221-228.
52
71. Sharpe AE, Brady CP, Moriarty J, O’Neill P, McLaughlin JG (2008). Major outbreak of suspected botulism in a dairy herd in the Republic of Ireland. Vet Rec;162:409-412.
72. Shukla HD, Sharma SK (2005). Clostridium botulinum: a bug with beauty and weapon. Crit Rev Microbiol. 2005; 31(1):11-8.
73. Slovis CM, Jones ID (1998). Botulism and food poisoning In Clinical management of poisoning and drug overdose. Eds Haddon, Shannon and Winchester. 3rd ed. p399-406.
74. Smith, L. D (1975). Inhibition of Clostridium botulinum by strains of Clostridium perfringens isolated from soil.Appl. Microbiol. 30, 319–323.
75. Sobel, J., N. Tucker, A. Sulka, J. McLauchlin, and S. Maslanka (2004). Foodborne botulism in the United States, 1990-2000. Emerg. Infect. Dis.10:1606-1611.
76. Songer JG, Glock RD (1998). Enteric infection of swine with Clostridium perfringens types A and C. Swine Health Prod. 6(5):223-225.
77. Suen, J. C., C. L. Hatheway, A. G. Steigerwalt, and D. J. Brenner
(1988). Clostridium argentinense, sp. nov: a genetically homogenous group composed of all strains of Clostridium botulinum type G and some nontoxigenic strains previously identified as Clostridium subterminale or Clostridium
hastiforme. Int. J. Syst. Bacteriol. 38:375.
78. Timoney, J. F, J. H. Gillespic, F. W. Scott. Barlough (1988). Hagan and Bruner’s Microbiology and Infectious Diseases of Domestic Animal, 8th ed. Ithaca.
Comstock.
79. Todar K (2009). Botulism, University of Wisconsin- Madison Department of Bacteriology. The Microbial World, page 1-4.
80. Tonie E. Rocke, Milton (1999). Biotoxins (Field Manual of Wildlife Diseases). Other Publications in Zoonotics andWildlife Disease. Paper 16.
81. Tsai, S. S., P. C. Wang, and C. D. Chang (1986). Ulcerative enteritis in replacement chickens. Taiwan J. Vet. Med. Anim. Husb. 47:45–49.
82. United States Department of Health and Human Services (2009). Docket No. FDA-2008-P-0061. Food and Drug Administration. Retrieved July 26, 2010. 83. Van Ergmengem (1897). Über einen neuen anaeroben Bacillus und seine
Beziehungen Zum Botulismus. Zentralbl. Hyg. Infektionskr. 26:1–8. 84. Wang YC, Burr DH, Korthals GJ, Sugiyama H, (1984). Acute toxicity of