Phương pháp kháng sinh đồ dựa trên sự khuếch tán của kháng sinh trên thạch đĩa của Kirby-Bauer (Bauer et al., 1966), dựa trên đường kính vòng vô khuẩn theo tiêu chuẩn của Clinical and Laboratory Standards Institute (2007) để đánh giá mức độ nhạy cảm kháng sinh. Tính nhạy cảm của Clostridium spp. đối với 5 loại kháng sinh được xác định dựa vào đường kính vòng vô khuẩn được trình bày qua bảng 8.
Môi trường làm kháng sinh đồ: môi trường MHA (Mueller Hinton Agar), pH của môi trường phải là 7,2- 7,6. Môi trường được khử trùng ở nhiệt độ 1210C trong 15 phút. Đổ môi trường lên đĩa petri vô trùng, bề dày thạch phải đạt 4mm.
Phương pháp thực hiện kháng sinh đồ: Chuẩn bị canh trùng của vi khuẩn Clostridium spp. thuần sao cho đạt nồng độ 108 CFU/ml (bằng cách so độ đục với ống chuẩn Mc Farland 0,5). Dùng que tăm bông vô trùng nhúng vào canh trùng, ép vào thành ống nghiệm cho bớt nước rồi ria đều khắp mặt thạch MHA. Dùng kẹp vô trùng đặt các đĩa kháng sinh đã chọn lên mặt thạch, các đĩa kháng sinh cách nhau 2,5cm đến 3,5cm và cách rìa đĩa thạch 2cm. Đĩa được ủ trong tủ ấm CO2 ở nhiệt độ 370C. Sau 24 giờ đọc kết quả.
Đọc kết quả bằng cách đo đường kính vòng vô khuẩn, rồi đối chiếu với bảng tiêu chuẩn để đánh giá.
(5) Đậy nắp và đem ủ trong tủ ấm CO2 24 giờ
34
Bảng 8: Đánh giá mức độ mẫn cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh
STT Loại kháng
sinh Hàm lượng
Đường kính vòng vô khuẩn (mm)
Mẫn cảm cao Mẫn cảm trung bình Kháng thuốc 1 Tetracyline 30µg ≥19 15- 18 ≤ 14 2 Erythromycin 15µg ≥ 23 14- 22 ≤ 13 3 Norfloxacin 10µg ≥ 17 13- 16 ≤ 12 4 Penicillin 10 UI ≥ 29 ≤ 28 5 Trimethoprime 1.25/23.75 µg ≥ 16 11- 15 ≤ 10
(Nguồn: Trường Đại Học Y Dược TpHCM, 2002)