Phương pháp kiểm tra hình thái dưới kính hiển vi
Làm tiêu bản, nhuộm Gram, và xem dưới kính hiển vi quang học ở vật kính 100.
Cho 1 gram mẫu đất vào môi trường Cooked Meat Thêm long đền đã hơ nóng
Ủ trong tủ ấm CO2 24-48 giờ, 370C
Ria cấy lên môi trường thạch máu
Ủ trong tủ ấm CO2 24-48 giờ, 370C
Chọn những khuẩn lạc có màu trắng đục, nhầy (đường kính 0,5- 1cm)
Ria cấy trên môi trường thạch máu để chọn khuẩn lạc thuần
Nhuộn Gram, kiểm tra một số đặc tính sinh hóa
Giữ giống trên môi trường Cooked Meat
31
Phương pháp kiểm tra một số chỉ tiêu sinh hóa của vi khuẩn Clostridium spp.
Sau quy trình cấy trên môi trường thạch máu và đạt kết quả thuần ta tiến hành thử một số chỉ tiêu sinh hóa của vi khuẩn Clostridium spp.
Kiểm tra đặc tính sinh hóa ở khả năng sử dụng đường Glucose, Maltose, Lactose và Saccharose.
Thử sự tạo thành Indole trên môi trường pepton.
So sánh kết quả với các đặc tính sinh hóa chuẩn của một số chủng vi khuẩn Clostridium
ở bảng 2.
Hình 13: Kết quả lên men đường của vi khuẩn Clostridium botulinum
Với những mẫu là chủng C. botulinum trong phản ứng sinh hóa đường, ta tiến hành khẳng định vi khuẩn với bộ sinh hóa cho vi khuẩn Gram âm API 20A (Trần Linh Thước, 2006).
Các bước tiến hành:
Chuẩn bị canh trùng
+ - + - - Hình 11: Vi khuẩn Clostridium dưới kính hiển vi quang học ở vật kính 100
Hình 12: Hình dạng khuẩn lạc Clostridium spp. trên môi trường thạch máu
32
- Mở ống môi trường API 20A.
- Chuẩn bị canh trùng của vi khuẩn thuần sao cho đạt nồng độ lớn hơn hoặc tương đương 3 lần McFarland (bằng cách so độ đục với ống chuẩn McFarland).
Chuẩn bị thanh
- Chuẩn bị một hộp ủ (bao gồm khay và nắp), thêm 5ml nước muối sinh lý 0,9% vào các giếng honeycomb để tạo độ ẩm không khí.
- Lấy thanh API 20A ra khỏi bao và đặt vào khay ủ.
- Sử dụng pipet vô trùng cho canh trùng đã chuẩn bị vào thanh API 20A, tránh tạo thành bọt khí và nghiêng thanh nhẹ nhàng về phía trước.
- Với giếng GEL, phủ đầy cả ống. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Giếng IND, phủ vừa đủ ống và làm đầy phần hình chén bằng dầu khoáng.
Đậy nắp khay và ủ trong tủ ấm CO2 đọc kết quả sau 24 giờ. So sánh kết quả với bảng 7.
Bảng 7: Các chỉ tiêu định danh vi khuẩn C. botulinum của bộ API 20A
IND URE GLU MAN LA C SAC MAL SAL XYL ARA GEL ESC GLY CEL MNE MLZ RAF SOR RHA TRE SPOR GRAM COCC - - + - - - + - - - + - - - - - - - - ± + + -
(1) Chuẩn bị canh trùng, hộp ủ, thanh API
(3) Cho canh trùng vào thanh API
(2) Cho nước muối sinh lý vào các giếng
33
(6) Đọc kết quả
Hình 14: Các bước làm phản ứng API 20A