3.2.2.1. Triệu chứng bệnh
Triệu chứng đầu tiên của bệnh là một đốm màu đen, nhỏ, bất dạng trên bề mặt. Vết đen giống nhƣ một lớp mụi than bám trên củ và có thể xuất hiện ở bất kỳ vị trí nào trên củ. Trên vết bệnh có các khối bào tử của nấm bám dày đặc. Ban đầu vết bệnh có màu xanh đậm, sau đó chuyển dần sang màu đen và một lớp giống nhƣ phấn màu trắng bám lên. Không có sự phân biệt rõ ràng giữa khu vực mô bệnh và mô khỏe. Khi đem ủ mẫu bệnh khoảng 2 ngày, bệnh có thể phát triển lan sang các khu vực khác trên củ và gây đen toàn toàn củ. Trên bề mặt có sự xuất hiện của một lớp giống nhƣ dầu và nấm chỉ gây thối bề mặt(Hình 3.3A và B).
Những đặc điểm trên tƣơng tự với mô tả của Snowden (1991), Davis (2004) và
Koide và ctv. (2007) về triệu chứng bệnh bệnh thối đen củ cà rốt do nấm Thielaviopsis
basicola.
3.2.2.2 Đặc điểm nấm
Sau khi thu mẫu bệnh nhiễm ngoài tự nhiên và quan sát bào tử nấm dƣới kính hiển vi điện tử ta có thể nhận thấy nấm có thể sản xuất 2 loại bào tử: bào tử đính và bào tử áo. Đính bào đài đƣợc sinh ra từ sợi nấm mảnh, mang các bào tử đính nối với nhau thành chuỗi. Các bào tử đính dạng hình trụ dài, hẹp, không màu hoặc màu nhạt với các góc bào tử tròn, mang các giọt lipit với kích thƣớc bào tử 5,45 – 8,75 µm x 25,5 -31,25 µm . Bào tử áo có hai dạng: dạng một là dạng bào tử hậu đính với nhau tạo thành chuỗi dài, màu nâu đến đen, có thể có từ 3-7 vách ngăn. Các vách ngăn này dày hơn so với các vách bên ngoài và có thể tách ra phóng thích các bào tử hậu. Kích thƣớc bào tử hậu của nấm là 7,25 – 10,0 µm x 8,15 – 13,45 µm (Hình 3.3C và D). Dạng hai là các bào tử dạng hình cầu với vách dày, sinh ra đơn lẻ, đƣờng kính trung bình là 7,2 -12,0 µm, có thể quan sát sự nảy mầm của bào tử áo khi quan sát từ các mẫu bệnh thu thập (Hình 3.3E).
Dựa vào đặc điểm bào tử của nấm và so sánh với các tài liệu của Snowden (1991);
Barnett và Hunter (1998); Allah (2011) cho thấy đây là nấm Thielaviopsis basicola gây
28
Hình 3.3: Triệu chứng bệnh và đặc điểm bào tử nấm Thielaviopsis sp.
(A và B) triệu chứng bệnh trên củ cà rốt sau khi ủ mẫu bệnh 2 ngày (C) đặc điểm của nấm khi quan sát dƣới kính hiển vi vật kính 10X (D và E) đính bào đài và bào tử hậu của nấm
A
B C
29
3.2.3 Bệnh do nấm Fusarium sp. 3.2.3.1 Triệu chứng bệnh 3.2.3.1 Triệu chứng bệnh
Bệnh xuất hiện sớm ở thời điểm 3 NSLB và phát triển khá nhanh trên bề mặt củ, vết bệnh đạt đƣờng kính từ 2,5 đến 3,5 cm ở thời điểm 5 NSLB. Triệu chứng bệnh ban đầu là sự phát triển của sợi nấm màu trắng nhô cao trên bề mặt củ, vết bệnh hình tròn hoặc hình oval, bề mặt củ chuyển sang màu sậm hơn. Sau đó, các vết bệnh phát triển lan dần trên bề mặt củ, liên kết với nhau. Tuy nhiên, ở trung tâm vết bệnh thì không có sự xuất hiện của sợi nấm. Phần tiếp giáp giữa mô bệnh và mô khỏe không rõ ràng. Mô bệnh nhũn nƣớc, mềm, có dịch ứa ra và có mùi hôi (ở thời điểm 5 NSKLB). Khi nấm phát triển trên toàn bộ trái, sợi nấm mọc tơi bông lên trên mô trái và dày đặc, củ thối gần nhƣ hoàn toàn (ở thời điểm 7 NSKLB) (Hình 3.4A).
Những ghi nhận trên tƣơng tự nhƣ ghi nhận của Snowdon (1991); Ramsey và
Wiant (1941) về triệu chứng thối củ cà rốt do nấm Fusarium sp.
3.2.3.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trƣờng PDA
Tản nấm sau khi đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng PDA ở nhiệt độ phòng (28-300C)
có tốc độ phát triển tƣơng đối nhanh, đạt đƣờng kính 8 cm ở thời điểm 7 NSC. Ở thời điểm 7 NSC, tản nấm là các khoanh nấm màu trắng phát triển nhô cao trên môi trƣờng và thấp dần ra phía rìa, sợi nấm mảnh và tơi, có các vòng đồng tâm rõ ràng, rìa tản nấm tròn đều. Các sợi nấm ở khu vực trung tâm tản nấm bắt đầu chuyển sang màu sậm hơn so với ban đầu. Mặt sau đĩa Petri, tản nấm có màu trắng, có vòng đồng tâm rõ ràng (Hình 3.4B và C).
3.2.3.3 Đặc điểm hình thái nấm
Qua quá trình quan sát dƣới kính hiển vi nhận thấy nấm Fusarium sp. Có một số
đặc điểm nhƣ: sợi nấm không màu, có vách ngăn, phân nhánh. Đính bào đài mọc ra từ
sợi nấm, không màu, thon nhỏ về phía đỉnh, đính mang nhiều bào tử (Hình 3.4D). Nấm hình thành 3 loại bào tử: đại bào tử, tiểu bào tử và bào tử áo. Đại bào tử nấm đa số là bào tử hình liềm, không màu, ăn màu xanh với thuốc nhuộm cotton blue, có từ 1- 5 vách ngăn, kích thƣớc 2,5-3,8 x 12,5-40. Tiểu bào tử hình bầu dục, mọc đơn lẻ hay thành chùm, không có vách ngăn, không màu, bào tử ăn màu của thuốc nhuộm cotton blue kích thƣớc (Hình 3.4E). Bào tử áo có hình cầu đến gần cầu, đƣợc hình thành từ sợi nấm phình to có kích thƣớc 7,5-12,5 µm(Hình 3.4F).
Dựa vào đặc điểm hình thái của nấm so với mô tả của Barnett và Hunter (1998);
30
Hình 3.4: Triệu chứng bệnh, đặc điểm tản nấm và đặc điểm của nấm Fusarium sp. (A) triệu chứng bệnh cuấ nấm gây ra trên củ cà rót ở thời điển 3 NSLB
(B và C) mặt trên và mặt dƣới của tản nấm ở thời điểm 7 NSC (D và E) bào tử nâm dƣới kính hiển vi 40X
( D và E) bào tử nấm (dại bào tử và tiểu bào tử) không nhuộm và nhuộm với cotton blue quan sat dƣới KHVQH
(F) bào tử áo của nấm đƣợc nhuộm với cotton blue khi quan sát dƣới kính hiển vi ở thời điểm 6 ngày khi nuôi cấy trên lame
A
B C
D E F
31
3.2.4 Bệnh do nấm Aspergillus sp. 3.2.4.1 Triệu chứng bệnh 3.2.4.1 Triệu chứng bệnh
Nấm Aspergillus sp. đƣợc phân lập từ những củ cà rốt thu thập ngoài tự nhiên, sau đó đƣợc lây nhiễm nhân tạo lại trên củ khỏe. Kết quả ghi nhận nấm gây hại trên củ.
Nấm có khả năng gây hại nặng và nhanh trên củ cà rốt. Bệnh xuất hiện triệu chứng vào giai đoạn 1 NSLB là những đốm tròn với sợi nấm màu trắng mọc nhanh trên bề mặt củ và đạt kích thƣớc là 1,5 cm ở giai đoạn 3 NSLB. Ở thời điểm này vết bệnh là đốm tròn mang các khối bào tử màu đen trên bề mặt, phần rìa có sợi nấm màu trắng xung quanh và trên bề mặt vết bệnh có tiết ra các giọt nƣớc. Vết bệnh tiếp tục phát triển lan ra xung quanh, số lƣợng bào tử phát triển dày đặc trên bề mặt và đạt kích thƣớc 4 cm ở thời điểm 5 NSLB. Đây là giai đoạn mô bệnh bắt đầu mềm và triệu chứng thối bắt đầu xuất hiện. Ở giai đoạn 7 NSLB, có sự xuất hiện đƣờng viền màu vàng giữa khối màu đen và các sợi nấm màu trắng. Phần tiếp giáp giữa mô bệnh và mô khỏe mềm, nhũn xuống (Hình 3.5A và E).
3.2.4.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trƣờng PDA
Tản nấm phát triển tƣơng đối nhanh, bào tử mọc dày đặc đạt đƣờng kính 7 cm ở thời điểm 7 NSC. Ban đầu, hệ sợi nấm màu trắng phát triển trên bề mặt môi trƣờng ở thời điểm 1 NSC. Sợi nấm tiếp tục phát triển và sinh ra các cành mang các túi bào tử là các cơ quan sinh sản của nấm có màu trắng chuyển dần sang màu nâu đến đen. Đến thời điểm 7 NSC tản nấm là một khối tròn màu đen với rìa màu trắng. Mặt dƣới đĩa Petri cũng chia thành hai phần rõ rệt: khu vực trung tâm có màu đen và phần phía ngoài có màu trắng ngà. Phần tiếp giáp giữa hai phần nhăn nheo (Hình 3.5A và B).
3.2.4.3 Đặc điểm hình thái nấm
Nấm Aspergillus có cành bào đài trong suốt, mọc thẳng đứng, không có vách ngăn, có đƣờng kính 7,0 - 21,5 µm và trên mỗi cành mang một túi bào tử. Túi bào tử dạng cầu, không màu, có đƣờng kính 50-90 µm và có nhiều cuống sinh bào tử không màu đính xung quanh túi bào tử. Bào tử đính thành dạng chuỗi trên những cuống sinh bào tử, bào tử không màu khi còn non và có màu nâu khi trƣởng thành. Bào tử có dạng hình cầu, trơn láng, màu nâu nhạt và đƣờng kính 2,15 – 3,45 µm (Hình 3.5D).
32
Hình 3.5: Triệu chứng bệnh, đặc điểm tản nấm, đặc điểm nấm Aspergillus sp.
(A) triệu chứng gây hại củ nấm ở thời điểm 5 NSLB (B và C) mặt trên và mặt dƣới tản nấm ở giai đoạn 7 NSC
(D) đính bào đài mang bao tử quan sát dƣới kính hiển vi ở vật kính 40X
(E) sự phát triển của nấm trên mô củ sau khi lây bệnh nhân tạo đƣợc quan sát dƣới kính soi nổi
A
B C
33
3.2.5 Bệnh do nấm Rhizopus sp. 3.2.5.1 Triệu chứng bệnh 3.2.5.1 Triệu chứng bệnh
Nấm Rhizopus sau khi đƣợc phân lập từ các củ cà rốt bị nhiễm ngoài tự nhiên, sau đó thực hiện bƣớc chủng bệnh lại theo qui trình Koch trên củ cà rốt ngoài tự nhiên. Kết quả chủng bệnh ghi nhận, loài nấm là một tác nhân gây bệnh trên củ cà rốt.
Rhizopus sp. là một trong những loài nấm xuất hiện triệu chứng gây hại trên củ cà rốt nhanh. Khoảng 1 NSLB, mô bệnh bắt đầu lõm xuống và có sự xuất hiện của hệ sợi nấm màu trắng trên bề mặt, hệ sợi nấm phát triển nhanh và mạnh, mọc bong cao lên trên bề mặt củ và mang theo những túi (bọc) bào tử màu trắng. Những túi này bắt đầu chuyển dần sang màu nâu đen đến đen ở những ngày kế tiếp. Ở thời điểm 3 NSLB, vết bệnh có hình tròn đến gần tròn và có kích thƣớc khoảng 2-3 mm (Hình ). Sau đó, bệnh phát triển ra toàn bộ củ, sợi nấm mọc dày đặc, đan xen nhau, có màu sậm hơn so với ban đầu và nấm gây thối hoàn toàn củ ở thời điểm 6 NSLB.
Những đặc điểm trên tƣơng tự so với mô tả của Ramsey và Wiant (1941) về triệu chứng bệnh thối củ trên cà rốt do loài Rhizopus sp. nhƣng có điểm khác biệt là triệu chứng ghi nhận sự chuyển màu của mô bệnh.
3.2.5.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trƣờng PDA
Sau khi nuôi cấy nấm trên môi trƣờng PDA và đặt ở nhiệt độ phòng, tản nấm phát triển rất nhanh, dày đặc trên môi trƣờng ở thời điểm 2 NSKC. Tản nấm nhô cao lên trên bề mặt môi trƣờng và lên cả thành đĩa Petri. Sợi nấm không màu, thƣờng phát triển đan xen với nhau. Các túi bào tử hình thành trên sợi nấm khoảng 1 NSKC, ban đầu chúng có màu trắng sau đó chuyển dần sang màu đen ở thời điểm 2 NSKC. Sợi nấm mọc thƣa thớt, chuyển dần từ màu trắng sang màu nâu do sự hình thành của nhiều túi bào tử màu nâu. Mặt dƣới đĩa petri, tản nấm có màu trắng ngà.
3.2.5.3 Đặc điểm hình thái nấm
Quan sát dƣới kính hiển vi có độ phóng đại 40X ta có thể nhận thấy, khuẩn căn màu nâu nhạt, phát triển ăn sâu vào trong môi trƣờng nuôi cấy xuất hiện ngay tại vị trí gốc của cuống bào tử. Cuống bào tử màu nâu, mọc thẳng đứng, không phân nhánh, không có vách ngăn và có kích thƣớc từ 3-20 µm x 50-400 µm. Túi bào tử hay còn gọi là bọc bào tử đƣợc hình thành từng cái đơn lẻ trên cuống mang túi bào tử, có dạng hình cầu, ban đầu túi bào tử có màu trắng và chuyển dần sang nâu ở thời điểm 2 NSKC, có
34
sp. không đồng nhất về kích cỡ, hình bầu dục hơi nhọn hai đầu, có màu nâu nhạt và kích thƣớc bào tử từ 3.5 -5,0 µm x 5 – 9 µm.
Dựa vào đặc điểm hình thái thì đây là nấm Rhizopus sp. theo mô tả của Nguyễn
Văn Bá và ctv. (2005) và Pitt và Hocking (2009) thì đây là loài nấm gây hại trên củ cà rốt sau thu hoạch.
35
Hình 3.6: Đặc điểm tản nấm, đặc điểm hình thái và triệu chứng bệnh của nấm Rhizopus sp.
(A) triệu chứng bệnh trên củ cà rốt ở giai đoạn 3 NSLB (B) đính bào đài của nấm khi quan sát dƣới kính sôi nổi
(C và D) hình dạng túi bào tử khi giải phóng hết bào tử và bào tử của nấm (E và F) mặt trên và mặt dƣới tản nấm ở thời điểm 2 NSC
A
B C D
36
3.2.6. Bệnh do nấm Penicillium sp.3.2.6.1 Triệu chứng bệnh 3.2.6.1 Triệu chứng bệnh
Nấm đƣợc phân lập từ những triệu chứng thối trên mẫu bệnh ban đầu và lây nhiễm lại trên những củ cà rốt khỏe. Bệnh xuất hiện trễ và phát triển rất chậm. Ở giai đoạn 5 NSLB, triệu chứng mới bắt đầu biểu hiện. Vết bệnh bất dạng, lõm xuống, khô ráo và có
sự xuất hiện của hệ sợi nấm li ti trên bề mặt. Mô bệnh chuyển sang màu nâu, phần thịt
củ nơi vết bệnh nứt ra. Rìa vết bệnh phân biệt rõ ràng giữa mô bệnh và mô khỏe (Hình 3.7A và E).
Triệu chứng bệnh tƣơng tự mô tả của Sherf và Macnab (1986) về triệu chứng bệnh gây ra do nấm Penicillium sp.
3.2.6.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trƣờng PDA
Sợi nấmphát triển trên môi trƣờng PDA chậm, ban đầu sợi nấm có màu trắng bám
chặt trên môi trƣờng. Mặt trên đĩa petri, nền tảng nấm có màu xám xanh với những , phía trên có những sợi nấm li ti cuộn lại có màu xám xanh nhạt tạo nên bề mặt không bằng phẳng; mép viền đều và có màu trắng đục, sợi nấm nhỏ bện chặt vào nhau. Tản nấm ăn sâu vào bề mặt môi trƣờng. Mặt dƣới đĩa petri, tản nấm có nhiều vòng đồng tâm, với những vòng có màu xanh đậm xen lẫn với các màu nhạt hơn (Hình 3.7B và C).
3.2.6.3. Đặc điểm nấm
Khi quan sát đặc điểm nấm dƣới kính hiển vi ở vật kính 40X nhận thấy nấm có những đặc điểm sau: sợi nấm không có vách ngăn, phân nhánh, không màu, ăn màu xanh của thuốc nhuộm cotton blue. Cành mang bào tử trần phân nhánh. Giá BTT với một vòng thể bình hoặc với hai đến nhiều cuống thể bình ở phần ngọn giá. Thể bình có phần đỉnh ngắn và thon nhỏ dần. Bào tử không có vách ngăn, hình cầu đến gần cầu, hình trứng, không màu hoặc màu nhạt, mặt ngoài nhẵn bóng, kích thƣớc đƣờng kính từ 1,15 – 2,15 µm.
Dựa vào đặc điểm nấm nấm theo mô tả của, Bùi Xuân Đồng và Nguyễn Huy Văn
37
Hình 3.7: Triệu chứng bệnh, đặc điểm tản nấm và đặc điểm của nấm Penicillium sp.
(A)triệu chứng bệnh gây ra trên củ ở giai đoạn 7 NSLB (B và C) mặt trên và mặt dƣới tản nấm ở thời điểm 7 NSC
(D) thể bình và bào tử nấm quan sát dƣới KHVQH ở thời điểm 3 ngày khi nuôi cấy trên lame (E) đặc điểm vết bệnh khi quan sát dƣới kính sôi nổi
A
B C
38
3.2.7. Bệnh do nấm Sclerotium sp.3.2.7.1. Triệu chứng bệnh 3.2.7.1. Triệu chứng bệnh
Nấm phát triển nhanh trên bề mặt mô củ, xuất hiện bệnh ở thời điểm 3 NSLB, đạt đƣờng kính 1,5 cm ở thời điểm 5 NSLB. Ban đầu là sự phát triển của hệ sợi nấm màu trắng sát bề mặt củ từ các hạch nấm, vết bệnh hình tròn hoặc gần tròn, lõm xuống (Hình 3.9D). Màu sắc mô nơi vết bệnh bắt đầu chuyển sang màu nâu, không có sự ứa dịch. Sau đó nấm phát triển lan dần khắp bề mặt củ, mô củ mềm, nhũn nƣớc, có sự liên kết giữa các vết bệnh (Hình 3.8A). Khi nấm phát triển và gây thối gần nhƣ hoàn toàn củ, hạch nấm bắt đầu hình thành rất nhiều. Nấm bắt đầu hình thành hạch nấm ở thời điểm 12 NSLB. Hạch nấm ban đầu có màu trắng khi trƣởng thành chuyển dần sang màu nâu (Hình 3.8C).
3.2.7.2. Đặc điểm tản nấm trên môi trƣờng PDA
Tản nấm đƣợc nuôi cấy bằng hạch nấm phát triển trên môi trƣờng PDA ở nhiệt độ phòng rất nhanh và đầy đĩa ở thời điểm 3 NSC. Ban đầu là sự phát triển của hệ sợi nấm màu trắng sát bề mặt môi trƣờng. Sợi nấm phát triển nhanh, mạnh, dày đặc trên môi