Để đánh giá hoạt tính androgen của mẫu thử chúng tôi đã tiến hành thí nghiệm trên 2 loại động vật là chuột cống đực non thiến và chuột cống đực trưởng thành.
Mô hình đánh giá hoạt tính androgen của thuốc dựa trên việc so sánh khối lượng tương đối các cơ quan sinh dục phụ đã được thực hiện từ những năm 1930. Đến năm 1953, Hershberger đã mô tả mô hình này với một số thay đổi và bổ sung [46]. Hiện nay, mô hình này được xem là mô hình thực nghiệm có giá trị nhất và được dùng phổ biến để chứng minh hoạt tính androgen của thuốc.
Các cơ quan nghiên cứu bao gồm túi tinh, tuyến tiền liệt, tuyến Cowper, cơ nâng hậu môn, quy đầu, tinh hoàn, đây là các cơ quan có sự phát triển phụ thuộc nhiều vào hoạt động của androgen. Khi khối lượng của hai hay trên hai cơ quan tăng lên có ý nghĩa thống kê so với lô chứng thì thuốc được coi là có hoạt tính androgen [74]. Theo OECD, nếu tiến hành đánh giá hoạt tính androgen trên nhóm đối tượng chuột nhắt đực thì có hai chỉ số không lấy được là tuyến tiền liệt và quy đầu do tuyến tiền liệt của chuột nhắt đực rất khó bóc tách một cách trọn vẹn vì tổ chức này quá mủn và nhỏ, nếu cố bóc tách sẽ cho sai số rất lớn về kết quả nghiên cứu. Quy đầu ở chuột nhắt không có mốc giải phẫu rõ ràng nên cũng cho sai số khá lớn khi tiến phân lập, bóc tách [74]. Từ những hạn chế đó, chúng tôi quyết định nghiên cứu trên nhóm đối tượng chuột cống trắng.
Trên chuột cống đực non, tiến hành thiến chuột nhằm loại bỏ tinh hoàn- cơ quan chính trong cơ thể sản xuất testosteron. Nói cách khác mô hình này loại bỏ được vai trò của testosteron nội sinh ngay từ khi các cơ quan sinh dục phụ chưa phát triển đầy đủ. Trong cơ thể, một trong những vai trò đặc biệt quan trọng của các androgen là tác dụng tăng sinh và phát triển cơ quan sinh dục nam trong đó bao gồm cơ nâng hậu môn, tuyến tiền liệt, túi tinh, tuyến Cowper… Vì vậy khi chuột chưa trưởng thành, nếu cắt bỏ tinh hoàn (thiến chuột) các cơ quan sinh dục phụ này sẽ rất nhỏ (do không phát triển được). Cụ thể, kết quả thí nghiệm thể hiện ở hình 3.1, 3.2 cho thấy khối lượng tương đối của các cơ quan sinh dục phụ ở chuột đực non thiến sau 17 ngày rất nhỏ so với chuột cống trưởng thành. Testin với mức liều 6 g/kg cân nặng không thể hiện hoạt tính androgen (không làm tăng khối lượng của
62
các cơ quan sinh dục phụ: tuyến tiền liệt, tuyến Cowper, túi tinh, cơ nâng hậu môn, quy đầu). Testin liều 12 g/kg làm tăng khối lượng cơ nâng hậu môn, tuyến tiền liệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng (p < 0,05).
Tiến hành thí nghiệm trên chuột cống đực trưởng thành không thiến (giữ nguyên tinh hoàn), kết quả trình bày tại bảng 3.2 và hình 3.3, 3.4 cho thấy ở cả 2 mức liều 6 g/kg cân nặng và 12 g/kg cân nặng cao đặc Testin đều thể hiện hoạt tính androgen. Với mức liều 6 g/kg cân nặng, cao Testin làm tăng khối lượng tinh hoàn và cơ nâng hậu môn chuột thực nghiệm so với lô chứng (p < 0,05). Khi tăng liều lên gấp đôi (ở mức liều 12g/kg cân nặng) Testin làm tăng khối lượng túi tinh và cơ nâng hậu môn so với lô chứng (p < 0,05) nhưng không làm tăng khối lượng tinh hoàn.
So sánh kết quả nghiên cứu của chúng tôi với một số công bố trước đây về tác dụng tăng cường chức năng sinh dục nam của một số vị thuốc có trong thành phần của cao đặc Testin cho thấy:
Theo Luận án của TS. Dương Thị Ly Hương, dịch chiết nước Bá bệnh với liều 10g/kg chuột nhắt trắng (tương ứng với 6 g/kg cân nặng chuột cống trắng) có tác dụng androgen rõ thông qua việc làm tăng khối lượng túi tinh, tuyến Cowper và cơ nâng hậu môn lên một cách có ý nghĩa thống kê so với lô chứng trắng (với p < 0,05). Trên chuột cống non thiến, dịch chiết nước Bá bệnh với liều 6 g/kg cân nặng làm tăng đáng kể khối lượng túi tinh, tuyến Cowper, cơ nâng hậu môn và tăng nồng độ testosteron máu lên một cách có ý nghĩa so với lô chứng [13].
Ba kích cũng được chứng minh thể hiện tác dụng androgen trên chuột đực bình thường và chuột đực giảm năng sinh dục ở 2 liều thử nghiệm là 50 mg/kg và 100 mg/kg [18]. Cụ thể là, trên chuột nhắt đực bình thường khi uống liều 100 mg/kg, nồng độ testosteron huyết tương, khối lượng túi tinh, tuyến tiền liệt, cơ nâng hậu môn đều tăng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng; chuột uống liều 50 mg/kg chỉ không làm tăng testosteron và cơ nâng hậu môn còn các chỉ số khác đều tăng. Trên chuột nhắt suy giảm chức năng sinh dục, ở cả 2 mức liều 50 và 100 mg/kg cân nặng đều làm tăng nồng độ testosteron huyết tương, khối lượng túi tinh, tuyến tiền liệt, cơ nâng hậu môn so với nhóm chứng [18].
63
Đối với Xà sàng tử, đã có một số nghiên cứu dược lý về tác dụng trên chức năng sinh sản nam của osthole- chất chiết được từ Xà sàng tử. Yuan (2004) nghiên cứu ảnh hưởng của osthole lên nồng độ androgen và nitric oxyd syntherase cho thấy osthole làm tăng nồng độ testosteron cũng như LH và FSH trên chuột cống thiến sau khi cho uống liên tục 20 ngày [103]. Nghiên cứu in vitro của Chen J năm 2000 đánh giá tác dụng của osthole trên cơ trơn thể hang của thỏ cô lập, kết quả cho thấy osthole có tác dụng làm giãn cơ trơn thể hang có thể do cơ chế tăng giải phóng nitric oxyd từ nội mạc hoặc do ức chế phosphodiesterase [40].
Những nghiên cứu về Protodioscin (chất chiết được từ Bạch tật lê) cho thấy tác dụng cải thiện ham muốn tình dục và sự sinh tinh ở người cũng như động vật [89]; đồng thời làm tăng nồng độ testosteron, LH và dehydroepiandosteron [27], [58].
Như vậy, hoạt tính androgen của cao Testin trong đó có chứa Bá bệnh, Ba kích, Xà sàng tử, Bạch tật lê là phù hợp với các nghiên cứu đã được công bố trước đây về tác dụng này của các dược liệu thành phần đã liệt kê ở trên.