Xác định độc tính cấp của cao đặc Testin và LD50 (nếu có) theo phương pháp Litchfield- Wilcoxon [10], [25], [75]:
Chuột nhắt trắng khối lượng 18- 20 gam được chia thành 10 lô, mỗi lô 8 con. Trước khi uống thuốc 14 giờ, chuột không được cho ăn, nhưng vẫn uống nước bình thường. Sau đó chuột được dùng cao thuốc với các mức liều tương ứng dưới đây:
- Lô 1: Uống dung dịch NaCMC 0,5%
- Lô 2: Uống cao cồn 40% Testin với liều 28 g/kg
- Lô 3: Uống cao cồn 40% Testin với liều 32 g/kg
- Lô 4: Uống cao cồn 40% Testin với liều 34 g/kg
- Lô 5: Uống cao cồn 40% Testin với liều 35 g/kg
- Lô 6: Uống cao cồn 40% Testin với liều 36 g/kg
- Lô 7: Uống cao cồn 40% Testin với liều 48g/kg
Mẫu thử được pha trong NaCMC 0,5% để đảm bảo thể tích mẫu thử cho chuột uống là 2 ml/100 g thể trọng chuột. 2h sau khi uống liều 1, chuột được cho uống
1 2 3 4 5 6 7 8
Test huấn luyện và sàng lọc Bắt đầu dùng thuốc Đợt NC Test sau dùng thuốc 7 ngày. Lấy máu định lượng Testosteron
33
liều 2. Sau khi chuột nhận liều thử thứ hai 2h, chuột được cho ăn trở lại bình thường.
Theo dõi chuột liên tục trong vòng 4 giờ sau uống liều cuối, ghi lại số chuột chết trong 72 giờ và tình trạng chung của chuột trong 7 ngày sau khi uống thuốc (ăn uống, hoạt động, bài tiết....). Nếu chuột chết, mổ chuột để đánh giá đại thể tổn thương của các cơ quan. Xác định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết trong vòng 72 giờ đầu.
+ Chỉ tiêu đánh giá:
- Tình trạng chung của chuột: các hoạt động tự nhiên, tư thế, hành vi, màu sắc (da, lông, mắt, mũi, tai, đuôi, màng nhầy)...
- Số chuột chết trong vòng 72 giờ. - Xác định LD50 (nếu có).
- Nhận xét những biểu hiện bất thường của chuột (nếu có).