* Phương phỏp bố trớ thớ nghiệm: Tất cả cỏc lợn mắc bệnh tiờu chảy trong quỏ trỡnh chăn nuụi… đều được chia ngẫu nhiờn thành 2 lụ và sử dụng hai phỏc đồ để điều trị và so sỏnh:
- Đảm bảo sự đồng đều mức độ mắc bệnh và điều kiện về vệ sinh thỳ y, chăm súc nuụi dưỡng …
- Phương phỏp sử dụng thuốc:
Phỏc đồ 1: Sử dụng 2ml Flumequin/10kg thể trọng/ngày, ngày tiờm 1 mũi, tiờm trong 3-5 ngày. Kết hợp với tiờm Gluco-K-C-Namin với liều 1ml/6 kg TT.
Phỏc đồ 2: Sử dụng 1,5 ml Enrofloxacine/10 kg thể trọng/ngày. Ngày tiờm 1 mũi, tiờm 3-5 ngày. Kết hợp với tiờm Gluco-K-C-Namin với liều 1ml/6kg TT.
* Phương phỏp chăm súc lợn con bị bệnh: Lợn con bị tiờu chảy được giảm lượng thức ăn, cho uống nước hạn chế. Hàng ngày, vệ sinh chuồng trại sạch sẽ, thực hiện định kỳ phun sỏt trựng (2 lần/tuần).
Phương phỏp theo dừi: Hàng ngày theo dừi tỡnh hỡnh mắc bệnh đường tiờu húa của lợn con thớ nghiệm. Ghi chộp sổ sỏch đầy đủ. Từ đú tớnh toỏn cỏc chỉ tiờu theo dừi.
Sau khi cú kết quả điều trị chỳng tụi đỏnh giỏ được hiệu quả điều trị của 2 loại thuốc trờn trờn bằng phương phỏp so sỏnh theo từng chỉ tiờu. Từ đú đưa ra được kết quả so sỏnh về hiệu quả điều trị của hai loại khỏng sinh trờn và đưa ra khuyến cỏo nờn sử dụng loại thuốc nào trong điều trị bệnh tại trại.
2.3.4.3 Nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella
Phương phỏp nuụi cấy Salmonella:
+ Lấy 30 mẫu phõn khụ và 30 mẫu phõn ướt tiến hành nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella.
+ Giai đoạn phõn lập được thực hiện trờn mụi trường thạch XLD. sau khi ủ trong vũng 24 giờ, dựng que cấy vũng lấy sinh khối từ ống RV, cấy ria sang mụi trường thạch XLD, lật ngược cỏc đĩa và ủ ở 370C trong tủ nuụi trong vũng 24 giờ và xem xột sự hiện diện của khuẩn lạc.
+ Trờn mụi trường thạch XLD: Khuẩn lạc Salmonella spp. điển hỡnh cú vựng hơi trong và cú tõm đen.
2.3.4.4 Phương phỏp khỏng sinh đồ
+ Sử dụng mẫu đó được phõn lập và xỏc định cú sự hiện diện của Salmonella + Lấy một lượng thớch hợp vi khuẩn thuần trải đều trờn đĩa thạch, sau đú gắn cỏc đĩa khỏng sinh vào đĩa thạch. Và ủ trong tủ ở nhiệt độ 370
C, sau 24 - 48 giờ, trờn bề mặt đĩa thạch xuất hiện cỏc vũng trũn khụng cú vi khuẩn phỏt triển (vũng vụ khuẩn) ở mỗi đĩa khỏng sinh. Đo đường kớnh của vũng vụ trựng để xỏc định tớnh nhậy cảm của vi khuẩn với khỏng sinh đú.
2.3.4.5 Cỏc chỉ tiờu theo dừi
- Thớ nghiệm sử dụng vắc xin phú thương hàn cho lợn con:
Theo dừi cỏc chỉ tiờu về tỷ lệ nhiễm bệnh đường tiờu húa ở lợn con thớ nghiệm:
+ Theo dừi tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy của lợn con thớ nghiệm.
+ Theo dừi tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy theo lứa tuổi lợn con thớ nghiệm. + Kết quả nuụi cấy phõn lập Salmonella trong phõn của lợn con thớ nghiệm. - Thớ nghiệm khảo sỏt hiệu quả điều trị bệnh đường tiờu húa của lợn con thớ nghiệm bằng hai phỏc đồ 1 và 2.
+ Kết quả thử khỏng sinh đồ của hai loại thuốc sử dụng điều trị bệnh + Tỷ lệ khỏi bệnh (%).
+ Thời gian điều trị khỏi bệnh (ngày). + Số con tỏi nhiễm (con).
+ Tỷ lệ tỏi nhiễm (%) và kết quả điều trị lần 2. + Chi phớ thuốc điều trị (đồng)
2.3.4.6 Phương phỏp theo dừi từng chỉ tiờu * Tỷ lệ mắc bệnh của lợn con
Theo dừi tổng số con mắc bệnh của từng lụ thớ nghiệm, từ đú tớnh tỷ lệ mắc bệnh (%) theo cụng thức:
Số con mắc bệnh
Tỷ lệ mắc bệnh = x 100
* Tỷ lệ mắc bệnh theo tuổi của lợn con
Nghiờn cứu, theo dừi số con mắc bệnh theo cỏc giai đoạn tuổi của lợn con: Từ 35 - 60 ngày, từ 60 - 90 ngày và từ 90 – 120 ngày.
Tớnh tỷ lệ lợn mắc bệnh theo tuổi được theo dừi như sau: Số con mắc bệnh ở từng độ tuổi
Tỷ lệ lợn mắc bệnh theo tuổi = x 100 Số con theo dừi ở độ tuổi đú
*Tỡnh trạng nhiễm bệnh đường tiờu húa:
Lợn con sau khi bị nhiễm bệnh được mụ tả và phõn ra ba nhúm: Nhiễm nhẹ: Lợn bị sốt nhẹ, tiờu chảy nhẹ, phõn lỏng, số lần tiờu chảy ớt... Nhiễm trung bỡnh: Lợn bị sốt cao, tiờu chảy nặng hơn, phõn lỏng, bết dớnh quanh hậu mụn...
Nhiễm nặng: Lợn bị tiờu chảy nặng, phõn lỏng, lợn bỏ ăn đi lại khụng vững...
Xỏc định tỷ lệ % về mức độ nhiễm bệnh đường tiờu húa của lợn con theo cụng thức:
Số con mắc bệnh ở từng mức độ
Tỷ lệ lợn mắc bệnh theo tuổi = x 100 Số con theo dừi
* Kết quả nuụi cấy phõn lập
* Chỉ tiờu theo dừi việc so sỏnh hiệu quảđiều trị bằng hai phỏc đồđiều trị:
Theo dừi từng chỉ tiờu về: Số con điều trị, số con khỏi bệnh, thời gian điều trị, số con tỏi nhiễm, chi phớ thuốc điều trị:
Tỷ lệ nhiễm bệnh (%) = Số con mắc bệnh x 100 Số con theo dừi
Tỷ lệ chết (%) = Tổng số con chết x 100 Tổng số con theo dừi
Tỷ lệ tỏi nhiễm (%) = Tổng số con tỏi nhiễm x 100 Tổng số con khỏi bệnh
Tỷ lệ khỏi (%) = Tổng số con mắc bệnh x 100 Tổng số con điều trị
Cỏc chỉ tiờu theo dừi bằng điều trị, quan sỏt, ghi chộp, thống kờ hàng ngày
* Phương phỏp sử lý số liệu: Sử dụng phương phỏp thống kờ sinh vật học
của Nguyễn Văn Thiện (2000).
2.4. KẾT QUẢ VÀ PHÂN TÍCH KẾT QUẢ
2.4.1. Thử nghiệm vắc xin phũng bệnh Phú thương hàn cho lợn rừng con 2.4.1.1 Kết quả nghiờn cứu tỡnh hỡnh mắc bệnh tiờu chảy của lợn con thớ nghiệm
Kết quả điều tra tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy của đàn lợn con thớ nghiệm nuụi tại trại lợn thuộc Chi nhỏnh cụng ty nghiờn cứu & phỏt triển động thực vật bản địa được trỡnh bày tại Bảng 2.2.
Kết quả điều tra cho thấy, tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy của lợn rừng giai đoạn cai sữa đến 4 thỏng tuổi kể cả được tiờm phũng hay khụng đều khỏ cao (từ 38 – 45,09 %). Như chỳng ta được biết ở ngoài tự nhiờn lợn rừng cú khả năng thớch nghi tốt, khả năng chống chiuk bệnh tật cao. Tuy nhiờn trong điều kiện chăn nuụi theo phương thức bỏn chăn thả thỡ cú khỏ nhiều lợn bị nhiễm bệnh tiờu chảy. Vỡ vậy trong quỏ trỡnh chăm súc nuụi dưỡng cần chỳ ý cụng tỏc phũng và trị bệnh tiờu chảy để đảm bảo hiệu quả chăn nuụi cao.
Theo dừi theo cỏc lụ lợn con được tiờm và khụng tiờm phũng vắc xin phú thương hàn chỳng ta thấy, tỷ lệ tiờu chảy của lụ thớ nghiệm tiờm phũng vắc xin Phú thương hàn là 38%, thấp hơn so với lụ thớ nghiệm khụng tiờm vắc xin Phú thương hàn là 41,17%. Điều cú cho thấy sự sai khỏc về tỷ lệ mắc bệnh tiờu chảy của hai lụ thớ nghiệm khụng lớn, sự chờnh lệch giữa hai lụ chỉ cú 10,05%.
Bảng 2.2. Kết quả nghiờn cứu về tỷ lệ mắc bệnh tiờu chảy
của lợn con thớ nghiệm
STT Diễn giải Đơn
vị tớnh Lụ TN Lụ ĐC
1 Số lợn con theo dừi con 50 51
2 Số con nhiễm con 19 21
3 Tỷ lệ nhiễm % 38,00 41,17
4 So sỏnh % 100 110,05
Như vậy, trong khuụn khổ thớ nghiệm, mặc dầu lợn con ở lụ TN được tiờm phũng vắc xin phú thương hàn để phũng bệnh tiờu chảy do Salmonella, nhưng tỷ lệ mắc bệnh tiờu chảy chỉ giảm thấp hơn lụ khụng tiờm khụng nhiều. Điều này cần phải được quan tõm, phõn tớch để tỡm hiểu nguyờn nhõn gõy bệnh tiờu chảy ở lợn con. Để tiếp tục tỡm hiểu nguyờn nhõn gõy bệnh tiờu chảy trờn lợn con, chỳng em tiến hành theo dừi tỡnh hỡnh mắc bệnh tiờu chảy trờn lợn con theo độ tuổi, kết quả được trỡnh bày tại bảng 2.4.1.2
2.4.1.2. Kết quả theo dừi tỡnh hỡnh mắc bệnh tiờu chảy của lợn con thớ nghiệm theo tuổi theo tuổi
Kết quả điều tra tỡnh hỡnh nhiễm bệnh tiờu chảy của lợn theo lứa tuổi của lợn thớ nghiệm được trỡnh bày tại Bảng 2.3
Bảng 2.3. Kết quả nghiờn cứu về tỷ lệ mắc bệnh tiờu chảy của lợn
con thớ nghiệm theo độ tuổi
STT Diễn giải Đơn vị
tớnh Lụ TN Lụ ĐC
1 Số con theo dừi con 50 51
3 Cai sữa (35 ngày) - 60 ngày tuổi con 9 11
Tỷ lệ mắc % 18,0 21,57
4 Từ 61 - 90 ngày tuổi con 6 5
Tỷ lệ mắc % 12,0 9,81
5 Từ 91 - 120 ngày tuổi con 4 5
Tỷ lệ mắc % 8,0 9,81
Tổng cộng con 19 21
Kết quả thớ nghiệm cho thấy, cả hai lụ thớ nghiệm tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy cú xu hướng giảm dần theo lứa tuổi. Tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy ở giai
đoạn từ 35 – 60 ngày tuổi của lụ TN là 18,0%, của lụ ĐC là 21,57%. Đến giai đoạn từ 61-90 ngày tuổi, tỷ lệ này là 12,0% và 9,81%; giai đoạn từ 91 – 120 ngày tuổi, tỷ lệ nhiễm là 8,0% và 9,81% tương ứng lụ TN và lụ ĐC.
So sỏnh về tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy của lợn con giữa hai lụ TN và ĐC chỳng ta thấy khụng cú sự khỏc biệt lớn về tỷ lệ nhiễm giữa hai lụ. Ở một số giai đoạn tuổi, tỷ lệ nhiễm cú khỏc nhau như giai đoạn 35-60 ngày tuổi và giai đoạn 91-120 ngày tuổi, nhưng sự sai khỏc khụng lớn. Thậm chớ ở giai đoạn 61-90 ngày tuổi ở lụ ĐC tỷ lệ nhiễm cũn thấp hơn lụ TN (9,81% so với 12,0% ở lụ ĐC). Nhưng kết quả tổng thể cũng cho thấy cú mối liờn hệ giữa tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy với việc tiờm phũng vắc xin và lứa tuổi của lợn. Lợn được tiờm phũng vắc xin Phú thương hàn cú tỷ lệ nhiễm bệnh tiờu chảy ớt hơn, tuy nhiờn sự chờnh lệch là khụng nhiều.
Tỷ lệ nhiễm bệnh cao nhất ở giai đoạn 35 – 60 ngày tuổi, cỏc giai đoạn sau thỡ tỷ lệ nhiễm bệnh giảm dần. Điều này theo chỳng tụi một phần là do giai đoạn 35 – 60 ngày tuổi, lợn vừa cai sữa mẹ, đõy là giai đoạn lợn gặp nhiều stress cựng với đú bộ mỏy tiờu húa của lợn con chưa phỏt triển hoàn toàn, vỡ vậy tỷ lệ nhiễm bệnh ở giai đoạn này sẽ cao hơn. Ở cỏc giai đoạn sau đú bộ mỏy tiờu húa của lợn dần hoàn thiện vỡ thế tỷ lệ tiờu chảy sẽ giảm dần.
2.4.1.3. Kết quả nghiờn cứu tỡnh trạng bệnh tiờu chảy của lợn con thớ nghiệm
Trong quỏ trỡnh thớ nghiệm, chỳng tụi theo dừi về tỡnh trạng bệnh tiờu chảy ở lợn con thớ nghiệm theo cỏc cấp độ nhẹ, trung bỡnh và nặng (Phõn theo mức độ tiờu chảy của lợn con mắc bệnh) để cú thờm số liệu đỏnh giỏ về hiệu quả tiờm phũng vắc xin cho lợn con thớ nghiệm. Kết quả theo dừi được trỡnh bày tại bảng 2.4.
Kết quả theo dừi về tỡnh trạng bệnh tiờu chảy cho thấy, tỷ lệ mắc bệnh ở cả 2 lụ thớ nghiệm và đối chứng đều tập trung ở mắc độ mắc nhẹ và trung bỡnh. Trong đú, lụ tiờm vắc xin cú tỷ lệ mắc ở mức độ nhẹ cao hơn so với lụ khụng tiờm vắc xin một chỳt (73,69% so với 71,42%) và tỷ lệ lợn con mắc ở
mức độ nặng thấp hơn 10,52% so với 14,29%. Tuy nhiờn, cú thể núi tổng thể là khụng cú sự khỏc biệt về tỡnh trạng bệnh tiờu chảy của lợn con được tiờm và khụng được tiờm vắc xin phú thương hàn.
Bảng 2.4. Kết quả theo dừi về tỡnh trạng tiờu chảy của lợn con
thớ nghiệm
STT Diễn giải Đơn
vị tớnh Lụ TN Lụ ĐC
1 Số con theo dừi Con 50 51
2 Số con mắc bệnh Con 19 21 3 Mức độ nhẹ Lượt 14 15 Tỷ lệ % 73,69 71,42 4 Mức độ trung bỡnh Lượt 3 3 Tỷ lệ % 15,79 14,29 5 Mức độ nặng Lượt 2 3 Tỷ lệ % 10,52 14,29
Để xỏc định thờm về nguyờn nhõn gõy bệnh tiờu chảy trờn lợn con thớ nghiệm, chỳng em tiến hành nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella trong phõn của lợn con. Kết quả được trỡnh bày tại mục 2.4.1.4
2.4.1.4. Kết quả nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella trong phõn của lợn con
Kết quả theo dừi nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella trong phõn của lợn con được thể hiện ở Bảng 2.5.
Kết quả nghiờn cứu cho thấy tỷ lệ mẫu phỏt hiện cú Salmonella trong phõn của đàn lợn thớ nghiệm khụng cao, dao động từ 13,33 – 23,33 %. Trong tổng số 30 mẫu phõn khụ thỡ chỉ phỏt hiện cú 4 mẫu cú Salmonella, chiếm 13,33 %. Tỷ lệ phỏt hiện Salmonella cú trong phõn ướt cao hơn, cú 7 mẫu trong 30 mẫu, chiếm 23,33 %. Điều này cho thấy, Salmonella cũng là một tỏc nhõn gõy
bệnh tiờu chảy cho lợn con. Một số cụng trỡnh nghiờn cứu tại Việt Nam và trờn thế giới những năm qua đó cho thấy kết quả tương đồng. Phựng Quốc Chướng (1995)[1] khi nghiờn cứu ở Tõy Nguyờn cho thấy, mựa khụ lợn mắc bệnh do
Salmonella gõy ra là 20,03%, vụ đụng là 28,66%. Tạ Thị Vịnh và cs. (1996)[15] đó kiểm tra 75 mẫu phõn lợn khỏe và 65 mẫu phõn lợn bệnh tại một vựng thuộc Ba Vỡ (Hà Tõy) và Gia Lõm (Hà Nội) cho thấy: Tỷ lệ nhiễm
Salmonella cao 30-56% ở lợn khỏe trong giai đoạn 20-60 ngày tuổi. Tỷ lệ nhiễm Salmonella ở lợn mắc hội chứng tiờu chảy cao hơn lợn bỡnh thường và tăng dần theo lứa tuổi, dao động 70-90%.
Bảng 2.5. Kết quả nuụi cấy phõn lập vi khuẩn Salmonella theo tỡnh trạng
phõn của lợn con
STT Diễn giải Đơn
vị tớnh
Phõn bỡnh thường
Phõn tiờu chảy
1 Số mẫu nuụi cấy Mẫu 30 30
2 Số mẫu phỏt hiện cú
Salmonella Mẫu 4 7
3 Tỷ lệ % 13,33 23,33
Wilcok và Schwartz (1992)[25] thỡ tại nước Anh, năm 1972 tỡm thấy vi khuẩn Salmonella cú trong phõn lợn là 9,9%, năm 1973 tỡm thấy Salmonella trong hạch ruột là 7,3%.
Tại Nhật Bản, Asai và cs (2002)[16] cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella ở lợn sau cai sữa bị tiờu chảy là 12,4% lợn vỗ bộo là 17,3% lợn con theo mẹ 4,5%. Tỏc giả cũng cho biết S. typhimurium được phõn lập nhiều nhất ở lợn sau cai sữa là 72,6%; lợn gần xuất chuồng là 73,8%.
Kishima và cs (2008)[22] đó điều tra tỷ lệ nhiễm và phõn bố của vi khuẩn Salmonella trong phõn lợn khỏe mạnh bỡnh thường trờn toàn bộ lónh thổ Nhật Bản giữa năm 2003 và 2005 là 3,1%.
Tuy nhiờn, mức độ nhiễm Salmonella trong trường hợp nghiờn cứu của chỳng em là thấp, do mức độ cảm nhiễm Salmonella của lợn rừng khụng cao, cú thể do sức đề khỏng kết hợp với việc vệ sinh phũng bệnh tốt trong giai đoạn này đó gúp phần làm giảm tỷ lệ nhiễm Salmonella. Kết quả này cũng phự hợp với kết quả tại Bảng 2.2, trong đú tỷ lệ mắc bệnh tiờu chảy của lụ tiờm phũng vắc xin chỉ thấp hơn lụ khụng tiờm phũng 10,05 %. Điều đú chứng tỏ Salmonella chỉ là một trong nhiều nguyờn nhõn chớnh gõy ra bệnh tiờu chảy trờn đàn lợn thớ nghiệm. Trong đú, cú thể do khả năng tiờu húa thức ăn do con người cung cấp của lợn rừng chưa cao.
2.4.1.5. Kết quả thử khỏng sinh đồ
Hiện nay cú rất nhiều loại thuốc khỏng sinh để điều trị bệnh, nhất là đối với lợn con trước và sau khi cai sữa. Tuy nhiờn việc dựng khỏng sinh rộng rói để phũng và điều trị bệnh nờn đó xuất hiện những chủng Salmonella khỏng thuốc (Kishima và cs (2008)[22]). Để cú cơ sở sử dụng khỏng sinh trong điều trị bệnh tiờu chảy trờn lợn, chỳng em tiến hành thử khỏng sinh đồ của hai loại thuốc là Flumequine và Enrofloxacin. Kết quả được trỡnh bày tại bảng 2.6.
Bảng 2.6. Kết quả thử khỏng sinh đồ của hai loại thuốc sử dụng tại cơ sở
chăn nuụi STT Khỏng sinh Tờn mẫu Kớch thước vũng vụ khuẩn Flumequine Enrofloxacin 1 T11-25 6 14 2 T11-27 10 21
Kết quả thử khỏng sinh đồ được thể hiện tại Bảng 2.6. Dựa vào kết quả khỏng sinh đồ chỳng ta cú thể thấy được kớch thước vũng vụ khuẩn của