Nguyên tắc: Các tiểu phần protein đƣợc xác định dựa vào tốc độ di chuyển khác nhau của các tiểu phần protein trong điện trƣờng. Gel polyacryamide gồm 2 lớp: lớp gel tách 15% và lớp gel cô 4%. Ở một số điều kiện nhất định, protein ở dạng ion và có mức độ ion hóa khác nhau, nên có thể tách riêng biệt chúng theo khả năng di động trong trƣờng điện từ về hai cực âm (-) và dƣơng (+). Kết quả nhận đƣợc phổ các vạch protein khác nhau. Phƣơng pháp điện di protein trên gel polyacrylamide có chứa SDS đƣợc tiến hành theo phƣơng pháp của Laemmli (1970) [30]. Thành phần gel đƣợc trình bày ở bảng sau:
Bảng 5. Thành phần gel tách và gel cô trong SDS-PAGE [30]
Thành phần Gel tách 15% Gel cô 4%
Dung dich acryamide 30% 1,95 ml 0,16 ml
4x Tris HCL/SDS pH 8,8 0,94ml
4x Tris HCL/SDS pH 6,8 0,31 ml
Nƣớc cất 0,94ml 0,76 ml
APS 10% 30µl 20µl
TEMED 7µl 5 µl
Quy trình điện di nhƣ sau:
- Pha mẫu với Protein Sample Buffer 4X theo tỷ lệ 3:1 và biến tính mẫu ở
950C trong 5 phút và làm lạnh ngay trên đá. Dùng 12 µl mẫu tra vào từng giếng và
tiến hành điện di trên gel polyacrylamide
- Chuẩn bị dung dịch đệm chạy (Running buffer) SDS- PAGE 1X và chạy điện di với hiệu điện thế ổn định. Theo dõi đến khi thấy vạch màu chỉ thị của dung dịch đệm mẫu cách đáy bản gel 0,5-1cm thì kết thúc.
- Bản gel đƣợc nhuộm trong dung dịch nhuộm CBB 0,5% (Coomassie Brilliant Blue) trong khoảng từ 30 phút đến 1 giờ.
- Tẩy gel bằng cách ngâm bản gel đã nhuộm vào dung dịch tẩy (acid acetic 7%, metanol 20%) đến khi bản gel màu trắng thì kết thúc quá trình tẩy. Thời gian tẩy khoảng 30 phút. Sau đó gel đƣợc bảo quản và chụp ảnh.