Kỹ thuật xung điện (electroporation) là một phƣơng pháp cơ học đƣợc sử dụng để đƣa các phân tử phân cực vào trong tế bào chủ qua màng tế bào. Kỹ thuật này cũng dựa trên cơ sở biến nạp, nhƣng yếu tố tác động đến tế bào nhận là xung điện. Trong phƣơng pháp này, một xung điện cao thế trong khoảnh khắc (vài phần nghìn giây) có khả năng làm rối loạn cấu trúc màng kép phospholipid, tạo ra các lỗ thủng tạm thời cho phép các phân tử DNA ngoại lai từ môi trƣờng xâm nhập vào bên trong tế bào. Khi các ion đã nạp điện và các phân tử đi qua các lỗ, màng tế bào phóng điện và các lỗ này đóng lại một cách nhanh chóng, màng phospolipid kép phục hồi lại cấu trúc cũ. Lúc này các phân tử mong muốn đã ở trong tế bào và chúng đƣợc sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo [35].
Trong nội dung nghiên cứu này, phƣơng pháp biến nạp bằng kỹ thuật xung điện đƣợc dùng nhằm chuyển vector tái tổ hợp vào nấm men P. pastoris.
Các bước thực hiện như sau:
+ Chuẩn bị môi trƣờng nấm men BMGY, nuôi lắc cho đến khi OD600 đạt đến
khoảng giá trị 1,2 – 1,6. Dịch môi trƣờng đƣợc ly tâm ở 1500 vòng/phút ở 40C trong
5 phút, loại bỏ dịch nổi và rửa tủa 2 lần bằng nƣớc cất đang bảo quản trên đá lạnh. Sau khi ly tâm, tủa đƣợc giữ lại và hòa tan bằng sorbitol 1M lạnh, sau khi tủa tan hoàn toàn, tiếp tục ly tâm để loại dịch nổi. Dùng một lƣợng 100-200 µl sorbitol 1 M lạnh bổ sung vào để hòa tan tủa thu đƣợc, bảo quản tế bào nấm men này trên đá chuẩn bị cho biến nạp.
+ Lấy 50 µl dịch chứa tế bào nấm men đã chuẩn bị ở trên chuyển vào ống eppendorf chứa plasmid tái tổ hợp. Chuyển hỗn hợp trên vào cuvet
+ Lần lƣợt đƣa cuvet chứa cấu trúc vào máy xung điện. Mỗi cuvet đƣợc xung điện trong khoảng 4 giây, theo các điều kiện do nhà sản xuất.
+ Bổ sung 500 µl sorbitol 1 M vào cuvet ngay sau khi phản ứng xung điện kết thúc. Chuẩn bị các đĩa petri để cấy trải sản phẩm biến nạp, sau đó nuôi trong tủ ấm 370C, khoảng 3 - 5 ngày.