3.3.3.1. Xác định các chỉ tiêu hóa lý cơ bản của sản phẩm
a, Đánh giá cảm quan tinh dầu theo TCVN 8460:2010
- Xác định độ trong và màu sắc: Dùng ống hút lấy 20 ml mẫu cho vào ống
nghiệm khô, sạch, trong suốt. Dùng mắt quan sát độ trong và màu sắc của tinh dầu.
- Xác định vị: Cân khoảng 1 g đường kính cho vào chén thử khô, sạch.
Nhỏ vài giọt nước tinh dầu vào chén, trộn đều, dùng lưỡi xác định vị của hỗn hợp đó.
- Xác định mùi: Nhỏ vài giọt tinh dầu lên giấy thấm khô, sạch. Dùng mũi
xác định mùi của tinh dầu, cứ 15 phút xác định một lần, khoảng 4 - 5 lần.
b, Xác định chỉ số khúc xạ của tinh dầu theo TCVN 8445:2010
Chỉ số khúc xạ được xác định theo phương pháp đo góc giới hạn bằng khúc xạ
kế kiểu Abbe ở 20oC bằng cách cho dòng nước chảy qua máy để duy trì máy ở 20oC.
Đầu tiên điều chỉnh máy nhằm triệt tiêu hiện tượng tán sắc ánh sáng để có thể thấy rõ ranh giới giữa miền sáng, tối của thị trường. Sau đó chuẩn lại để thấy rõ nét vạch chuẩn chữ thập giữa thị trường. Mở hộp lăng kính, dùng bông tẩm axeton lau kỹ lăng kính và thấm khô bằng vải mềm. Nhỏ 2 - 3 giọt tinh dầu lên mặt lăng kính mờ phía dưới và áp vào lăng kính bên trên. Khi nhiệt kế của khúc
xạ kế chỉ 20oC, nhìn vào thị kính, chỉnh hiện tượng tán sắc nếu có rồi từ từ xoay
bộ lăng kính đưa ranh giới giữa hai miền sáng và tối cắt đúng giao điểm của vạch chuẩn. Đọc chỉ số khúc xạ ở ngang vạch chuẩn. Xác định lại vị trí và đọc
chỉ số ba lần. Chỉ đọc chỉ số khúc xạ khi nhiệt độ đã ổn định. Kết quả là trung bình cộng của ba giá trị đọc được và làm trong tới số thập phân thứ tư.
Khi đo chỉ số khúc xạ của tinh dầu ở nhiệt độ khác và cần tính chuyển về chỉ số khúc xạ ở nhiệt độ nhất định, dùng công thức sau:
Nt D = Nt’ D + 0,0004.(t’ – t) Trong đó: Nt D : Chỉ số đọc được ở nhiệt độ t t : Nhiệt độ cần tính chuyển
c, Xác định tỷ trọng tinh dầu ở 200C theo TCVN 8444:2010
Tỷ trọng của tinh dầu là tỷ số của khối lượng tinh dầu ở 20oC với khối
lượng của cùng một thể tích nước cất cũng ở 20oC.
Bình tỷ trọng được rửa sạch bằng hỗn hợp sunfocromic, tráng kỹ bằng nước cất và súc lại bằng axeton hoặc etanol, làm khô bằng cách thổi vào bình
một luồng không khí khô, nóng hoặc sấy nhẹ ở 70 - 80oC tới khối lượng không
đổi. Cân khối lượng của bình và nút chính xác tới 0,0002 g.
Rót nhẹ nước cất vào bình cao hơn vạch mức một chút, tránh không tạo
bọt khi rót. Ngâm bình vào môi trường điều nhiệt đã duy trì ở 20 ± 0,5oC ngập
tới cổ lọ trong 30 phút tới khi nhiệt độ của nước trong bình đạt 20 ± 0,5oC. Dùng
các giải giấy thấm hút bớt nước trong bình tới đúng vạch mức và thấm khô các giọt nước bám ở thành trong cổ bình, lau khô cổ bình và đậy nút. Lấy bình ra khỏi môi trường điều nhiệt, lau khô và cân nhanh chính xác đến 0,0002 g. Sau đó đổ nước và làm khô bình như trên. Rót nhẹ tinh dầu vào bình chú ý không tạo bọt khi rót và tiến hành giống như làm với nước cất. Ta xác định được khối
lượng của bình và tinh dầu ở 20 ± 0,5oC.
Tỷ trọng của tinh dầu ở 20oC được tính theo công thức sau :
d 20
20 = 2 1
m – m m – m
Trong đó : m: Khối lượng bình tỷ trọng, g
m1: Khối lượng bình tỷ trọng và nước ở 20oC, g
Kết quả là trung bình cộng của hai lần xác định liên tiếp có sai lệch giá trị không lớn hơn 0,001 g và được làm tròn đến số thập phân thứ tư.
d, Xác định chỉ số axit của tinh dầu theo TCVN 8450:2010
Chỉ số axit là số mg KOH cần để trung hòa axit tự do có chứa trong 1 g tinh dầu.
Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên sự trung hòa axit tự do có trong tinh dầu bằng dung dịch kiềm chuẩn theo phản ứng :
RCOOH + KOH RCOOK + H2O
Cân 2 g tinh dầu (chính xác đến 0,005 g) vào bình cầu xà phòng hóa.
Thêm vào đó 10 ml etanol (etanol 95% thể tích ở 20oC, đã được trung hòa bằng
KOH 0,1N trong etanol) và vài giọt chất chỉ thị màu phenolphtalein (0,2% trong etanol). Chuẩn độ bằng bằng dung dịch KOH 0,1N trong etanol (chuẩn bị trước 24h) đến khi xuất hiện màu hồng vững bền trong khoảng 30 giây. Ghi số ml KOH tiêu tốn.
Chỉ số axit được tính theo công thức : A =
Trong đó : V: Lượng dung dịch KOH 0,1N đã dùng để chuẩn độ, ml m: Khối lượng mẫu tinh dầu, g
5,61: Lượng KOH có trong 1ml dung dịch KOH 0,1N, mg
e, Xác định chỉ số este của tinh dầu theo TCVN 8451:2010
- Nguyên tắc: Xà phòng hóa este bằng dung dịch KOH trong etanol.
R1COOR + KOH R1COOK + ROH
Từ lượng KOH đã dùng, biết khối lượng phân tử của este, tính ra được lượng este.
- Tiến hành thử: Dùng buret cho 20 ml dung dịch KOH 0,5N vào bình cầu
để xà phòng hóa có chứa lượng mẫu đã xác định chỉ số axit, lắp ống sinh hàn khí và đun sôi nhẹ trong 1h. Cùng một lúc trong bình cầu khác kiểm tra song song
một mẫu trắng gồm 10ml etanol và 20 ml dung dịch KOH 0,5N trong cồn. Đun xong, để nguội cho cả 2 bình mỗi bình 5 giọt chỉ thị mầu phenol phetalein 2%.
Chuẩn độ bằng dung dịch H2SO4 hay HCl 0,5N.
- Tính kết quả: Chỉ số este (X3) được tính bằng công thức:
m V V X ( 1).28,05 3 − = Trong đó:
X3: Chỉ số este của tinh dầu, mg KOH/g
V: lượng dung dịch H2SO4 hay HCl 0,5N đã dùng để chuẩn độ mẫu trắng, ml
V1: lượng dung dịch H2SO4 hay HCl 0,5N đã dùng để chuẩn độ mẫu thử, ml
m: khối lượng mẫu, g
28,05: lượng KOH trong 1 ml dung dịch KOH đúng 0,5N.
3.2.3.2. Xác định thành phần hóa học của sản phẩm
Thành phần hóa học có trong tinh dầu lá tía tô được xác định bằng phương pháp sắc kí khí nối ghép khối phổ GC-MS.
Việc xác định thành phần hóa học của tinh dầu lá tía tô được tiến hành tại phòng phân tích hóa học - viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên - viện Hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam.