2.3.3. Phương pháp mô học
Cố định bệnh phẩm (BP): Mục đích giúp lưu giữ mẫu bền vững, lâu ngày.
Mẫu không bị tiêu hủy bởi các men có sẵn bên trong tế bào hay bởi các vi khuẩn và bảo vệ cấu trúc nguyên vẹn ở mức độ phân tử.
+ Mẫu được cho vào dung dịch có chất cố định (thường là Formaldehyt 10%). + Yêu cầu: BP cố định ngay sau khi lấy, không được làm dập nát BP, BP không được cắt quá dày, không để một mặt BP dính vào lọ đựng, đủ dung dịch cố định cần thiết, thời gian cố định thích hợp.
Xử lý bệnh phẩm: Khử nước bằng dung dịch cồn; khử cồn bằn xylem và vùi trong paraffin để loại xylem bằng máy xử lý mô trong 3 giờ.
Cắt và dán:Mẫu bệnh phẩm sau khi xử lý, được đúc vào khối parafin, làm
lạnh và cắt bằng máy cắt Microtome (2-3 µm), cố định mẫu trên lam kính, dùng xyleme để tẩy parafin, qua các bể cồn (70%, 90% và 100%)để tẩy paraffin và rửa sạch bằng nước cất trong 5 phút.
Bước nhuộm Hematoxylin-Eosin: Cố định mẫu trên lam kính, nhuộm nhân bằng dung dịch hematoxylin trong 3-5 phút và rửa sạch dưới vòi nước chảy trong 5-10 phút. Kiểm tra màu sắc của nhân qua kính hiển vi (nếu đậm rửa bằng cồn axit). Làm xanh trong dung dịch Lithium cacbonat bão hòa trong 1 phút. Rửa lại duới vòi nước chảy (1 phút). Tiếp tục nhuộm bào tương bằng eosin 10% trong 1-2 phút, sau đórửa lại duới vòi nước chảy (1 phút), cho qua hai bể cồn (900,1000, mỗi bể nhúng 15 lần) để tẩy eosin. Cuối cùng làm trong tiêu bản bằng xylem 5-10 phút. Trước khi kiểm tra dưới kính hiển vi, mẫu được cố định bằng lamen và dán keo Boume Canada (Sheehan và Hrapchak, 1980) [64].