- Dụng cụ, máy móc:
3.5.4. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của thuốc ựến ựường kắnh tản nấm Phytophthora sp trên môi trường nhân tạo
Phytophthora sp trên môi trường nhân tạo
Khảo sát ảnh hưởng của một số loại thuốc hoá học ựến kắch thước tản nấm
Phytophthora sp trên ựĩa petri với môi trường PDA.
- Tiến hành thu mẫu ở các ruộng có biểu hiện bị bệnh của 3 phường Tân Lộc, Thạnh Hòa, Trung Kiên của quận Thốt Nốt.
- đem về phòng thắ nghiệm của trường đại Học Cần Thơ phân lập nấm
Phytopthora spp và ựịnh danh (Thu Nga, đHCT). Chuyển nấm nguồn về trường
đại An Giang xác ựịnh kắch thước tản của nấm ựối với 5 loại thuốc hóa học: Dororal 50WP, Ridomil Gold 68 WG, Mataxyl 500 WP, Aliette 800 WG, Topsin M 70 WP ở liều lượng 0,1 % và 0,15% trên môi trường nhân tạo, nhằm tìm ra các loại thuốc ảnh hưởng ựến sự phát triển ựường kắnh tản nấm của nấm Phytophthora sp.
Thắ nghiệm ựược bố trắ hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 lần lặp lại, mỗi lặp lại/ ựĩa với ựiểm có tẩm thuốc/ựĩa. Các công thức ựược bố trắ như sau:
Công thức 1: Nấm Phytophthora sp và 5 loại thuốc Ridomil Gold 68 WG,
Mataxyl 500 WP, Aliette 800 WG, Dororal 50WP, Topsin M 70 ở liều lượng khuyến cáo. Công thức 1 khảo nghiệm ảnh hưởng của các loại thuốc ựược thực hiện ngay sau khi cấy nấm Phytophthora sp.
Bảng 3 1 Các loại thuốc hóa học dùng trong thắ nghiệm theo ựúng liều lượng khuyến cáo.
STT Tên thương mại Hoạt chất Liều lượng
1 Dororal50WP Iprodione 1,5g/l
2 Topsin M 70WP Thiophanate Methyl 0,93g/l 3 Ridomil Gold 68 WG Metalaxyl+Mancozeb 6,25g/l
4 Mataxyl 500 WP Metalaxly 1,87g/l
5 Aliette 800 WG. Fosety-Aluminium 2,5g/l
Thực hiện công thức 1 với cách thứ 2: pha từng loại thuốc theo ựúng liều lượng công thức 1 vào môi trường sau ựó cấy nấm vào môi trường, thực hiện 3 lần lặp lại, lấy số liệu sau khi cấy 24 giờ và liên tục ựến 4 ngày.
Công thức 2: Nấm Phytophthora và 5 loại thuốc Ridomil Gold 68 WG,
Mataxyl 500 WP, Aliette 800 WG, Dororal 50WP, Topsin M 70 ở liều lượng cao hơn liều lượng khuyến cáo. Công thức 2 khảo nghiệm ảnh hưởng của các loại thuốc ựược thực hiện ở 24 giờ sau khi cấy nấm Phytophthora sp.
Bảng 3 2 Các loại thuốc hóa học dùng trong thắ nghiệm liều lượng tăng 1,5 lần theo khuyến cáo.
STT Tên thương mại Hoạt chất Liều lượng
1 Dororal50WP Iprodione 2,3g/l
2 Topsin M 70 Thiophanate Methyl 1,4g/l 3 Ridomil Gold 68 WG Metalaxyl+Mancozeb 9,4g/l
4 Mataxyl 500 WP Metalaxly 2,8g/l
Chỉ tiêu theo dõi, Tiến hành ghi nhận chỉ tiêu sau khi cấy bằng cách: - đo ựường kắnh vành khăn vô khuẩn.
- đo ựường kắnh khuẩn lạc về phắa có vi khuẩn và ựối chứng ựể tắnh hiệu suất ựối kháng.
BKKLd Ờ BKKLvk BKKLdc
Trong ựó: - BKKLdc: ựường kắnh khuẩn lạc ở phắa ựối chứng - BKKLvk: ựường kắnh khuẩn lạc ở phắa vi khuẩn - HSđK: hiệu suất ựối kháng (%)
Phương pháp tiến hành
- Chuẩn bị nguồn nấm: Nuôi cấy các chủng nấm trên ựĩa petri chứa môi trường PDA trước khi bố trắ thắ nghiệm.
- Cách 1: Dùng khoanh giấy lọc ựường kắnh 5 mm ựã ựược thanh trùng nhúng vào nước cất thanh trùng làm ựối chứng và lần lượt nhúng các khoanh khác vào các loại thuốc thử khác nhau (hoặc các liều lượng khác nhau của cùng 1 loại thuốc) rồi ựặt lên ựĩa petri có chứa môi trường PDA (10 ml môi trường/ựĩa) ở các vị trắ cách ựều nhau nằm trên một vòng tròn ựồng tâm có bán kắnh 3,5 cm ựã ựược ựánh dấu sẵn trên các ựĩa ựã cấy nấm Phytophthora sp. (ựợt 1 ựược thử thuốc ngày sau khi
cấy nấm và ựợt 2 thử thuốc ở 1 ngày sau khi cấy nấm). Mỗi loại thuốc ựược thực hiện 3 lần lặp lại ựối với chủng nấm.
- Cách bố trắ thử 2: pha thuốc theo liều lượng ựã qui ựịnh và pha với môi trường nhân tạo, tất cả dụng cụ và thuốc ựều ựược thanh trùng, sau khi ựổ môi trường có thuốc ựể môi trường vào tủ, ựợi môi trường nguội hẳn, cấy nấm Phytophthora ựã cấy thuần, nấm ựược ựũa cấy lấy từng tản nấm và cấy vào môi trường theo ựiểm trọng tâm ựã ựược ựánh dấu.sau khi cấy nấm vào môi trường, cho ựĩa môi trường vào tủ ấm chỉnh nhiệt ựộ tủ dao ựộng từ 27-28OC, sau ựó kiểm tra ựo vòng khuẩn lạc theo giờ ựã qui ựịnh.
Sơ ựồ bố trắ thắ nghiệm
Hình 3.1. Cách thức bố trắ thắ nghiệm thử thuốc trên ựĩa petri bằng phương pháp khoanh giấy thấm tẩm thuốc
Chỉ tiêu theo dõi
- Tiến hành ghi nhận bán kắnh vành khăn vào các thời ựiểm 12, 24, 48, 72, 96 giờ sau khi cấy.
- Phân tắch thống kê các số liệu bằng phần mềm IRRISTAT.