Đến nay đê có nhiều kỹ thuật xĩt nghiệm phât hiện HIV ra đời, trong đó kỹ thuật ngưng kết hạt vi lượng vă kỹ thuật miễn dịch gắn men ELISA đang được dùng phổ biến nhất. Mỗi loại kỹ thuật đều có ưu nhược điểm riíng:
- Kỹ thuật ngưng kết hạt vi lượng:
+ Thao tâc đơn giản, không đòi hỏi trang thiết bị đắt tiền, thích hợp cho săng lọc hăng loạt mẫu mâu.
+ Không mất nhiều thời gian vă kết quả có thể đọc được bằng mắt thường sau 2 giờ.
+ Kĩ thật ngưng kết hạt vi lượng sử dụng những hạt nhđn tạo mới có độ nhạy vă độ đặc hiệu cao, tỷ lệ dương tính giả rất nhỏ, nhiều khi nhỏ hơn cả thử nghiệm ELISA.
+ Thử nghiệm ELISA “sandwich” khâng nguyín có thể phât hiện hết câc lớp khâng thể.
+ Thử nghiệm ELISA “sandvvich” khâng thể dùng để phât hiện khâng nguyín chủ yếu vẫn lă phât hiện khâng nguyín p24 nín ở những bệnh nhđn có hiệu giâ khâng thể p24 cao khâng nguyín sẽ kết hợp vói khâng thể lăm cho khâng nguyín khó bị phât hiện. Do vậy xĩt nghiệm phât hiện khâng nguyín p24 chỉ nín dùng cho câc trường hợp nghi nhiễm HIV đang trong giai đoạn cửa sổ hoặc cho những bệnh nhđn AIDS giai đoạn cuối khi lượng khâng thể đê sụt giảm.
+ Thử nghiệm ELISA giân tiếp: Có một số sinh phẩm dùng hỗn hợp câc khâng thể chuỗi nặng vă chuỗi nhẹ của globulin miễn dịch người nín có thể phât hiện khâng thể IgM đối với HIV.
+ Thử nghiệm ELISA tóm bắt khâng nguyín vă khâng thể
Thử nghiệm năy giảm bớt được những chất tạp dư gắn văo giâ cứng nín lăm giảm bớt phản ứng gắn không đặc hiệu vă được coi lă đặc hiệu hơn những thử nghiệm giân tiếp có gắn toăn bộ dịch thuỷ phđn của virus.
Đâng chú ý lă thử nghiệm ELISA tóm bắt khâng thể đặc hiíu theo lớp đê cải thiện được độ nhạy vă độ đặc hiệu khi dùng những dịch thể có nồng độ globulin miễn dịch toăn phần thấp như: nước bọt, nước tiểu. Vì trong thử nghiệm năy nhờ gắn một anti- IgG nín tóm bắt được toăn bộ IgG, kể cả IgG đặc hiệu chống virus trước khi thử nghiệm. Sau đó một khâng nguyín HIV có đânh dấu mới được cho văo vă gắn với IgG khâng HIV nếu có. Trong vòng những năm gần đđy những sinh phẩm phât hiín khâng thể khâng HIV trong nước bọt, dịch tiết ở miệng, nước tiểu đang được phât triển. Ưu điểm của những thử nghiệm năy lă dễ thu thập mẫu bệnh phẩm, giảm nguy cơ lđy truyền câc bệnh qua đường mâu, tuy nhiín vẫn còn nhiều vấn đề cần phải được nghiín cứu tiếp như:
o Phương phâp năo để lấy dịch ở miệng lă tin cậy vă thích hợp nhất?
o Thử nghiệm phât hiện khâng thể năo có độ nhạy vă độ đặc hiệu cao khi dùng cho câc loại dịch lấy theo những câch khâc nhau?
o Những bệnh ở miệng vă/hay việc ăn uống có ảnh hưởng gì tới độ chính xâc của kết quả xĩt nghiệm?
QraSure HIV-1 lă một dụng cụ chẩn đoân dùng ở miệng được FDA phí chuẩn vă do câc nhđn viín y tế tiến hănh xĩt nghiệm, đđy lă miếng đệm được sử lý đặc biệt để đặt văo đoạn giữa hăm dưới vă lợi khoảng hai phút tạo ra âp xuất thẩm thấu để hăm tiết ra khâng thể khâng HIV từ câc mô tiết chất nhầy trong miệng vă sau đó đem đi kiểm tra HIV-1 bằng câc xĩt nghiệm miễn dịch gắn enzym (EIA- Enzym Immuno Assay). Tất cả những kết quả xĩt nghiệm bằng phương phâp EIA dương tính sẽ được thử lại vă sau đó được xâc định bằng OraSue Western blot. Kết quả có thể so sânh với câc xĩt nghiệm huyết thanh học, độ đặc hiệu đạt 99,9%[12].
Nước bọt từ câc hạch nước bọt tiết ra có nhiều IgA nín gần đđy câc nhă khoa học rất quan tđm đến việc phât hiện khâng thể IgA khâng HIV trong nước bọt trẻ sơ sinh vă cho rằng sự có mặt của khâng thể IgA khâng HIV trong nước bọt có thể chứng tỏ đứa trẻ đó đê thực sự bị nhiễm HIV. Điều năy rất quan trọng vì việc xâc định khâng thể khâng HIV trong mâu trẻ sơ sinh vốn rất khó do có khâng thể từ mẹ truyền sang.
Thử nghiệm ELISA tóm bắt khâng nguyín đặc hiệu còn giúp phât hiện HIV trong nước tiểu đạt độ nhạy tương đối. Sentinel HIV-1 Urine EIA lă một xĩt nghiệm phât hiện HIV-1 trong nước tiểu đê được FDA phí chuẩn thâng 8 năm 1996 nhưng chỉ có ở câc dịch vụ y tế chuyín nghiệp. Độ nhạy vă đặc hiệu của phương phâp năy trong tìm khâng thể khâng HIV ở nước tiểu đạt 99,3% thấp hơn so với câc phương phâp thực hiện trín huyết thanh vă nước bọt[12]. Nếu kết quả dương tính theo phương phâp urine EIA lặp lại thì cần khẳng định bằng xĩt nghiệm Westem blot trín huyết thanh.
- Kỹ thuật miễn dịch điện di Western blot: Tuy cùng chung nguyín lý vói kỹ thuật ELISA nhưng kỹ thuật năy có ưu điểm lă xâc định được khâng thể đặc hiệu đối với câc khâng nguyín khâc nhau của HIV. Do vậy sẽ cung cấp những dải băng đặc trưng của HIV khi phản ứng với câc mẫu có khâng thể khâng HIV. Nhưng Westem blot có kỹ thuật thực hiện tương đối khó, đắt, kết quả phụ thuộc văo chủ quan của người phđn tích vă đòi hỏi khoảng 24 h để tiến hănh.
- Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang: Có độ nhạy vă độ đặc hiệu tương tự Westem blot nhưng có nhiều ưu điểm hơn như: thời gian thực hiện ngắn hơn, ít đòi hỏi hơn về thănh thạo kỹ thuật. Nhược điểm chính của phương phâp lă yíu cầu phải có một
kính hiển vi huỳnh quang đắt tiền, không giữ được kết quả lđu. Thử nghiệm miễn dịch huỳnh quang rất có giâ trị khi phải giải quyết những kết quả không xâc định được bằng Westem blot.
- K ỹ thuật kết tủa miễn dịch phóng xạ: ít nhạy vă ít đặc hiệu hơn so với Westem blot, chủ yếu được dùng trong phòng thí nghiệm vì cồng kềnh, tốn kĩm vă đòi hỏi phải duy trì câc dòng tế băo nhiễm HIV vă sử dụng câc đồng vị phóng xạ.
- Kỹ thuật chấm thấm: Một bất lợi của hăng loạt câc xĩt nghiệm tìm HIV bằng phương phâp ELISA vă sau đó bằng phương phâp Westem blot lă khoảng thời gian chờ đợi 1-2 tuần mới lấy được kết quả nín dẫn đến nhiều người nhiễm HIV không lăm câc xĩt nghiệm tiếp theo vă tiến hănh điều trị. Trong năm 1995 ở Mỹ 25% số người có kết quả xĩt nghiệm HIV dương tính vă 33% số ngưòi có kết quả xĩt nghiệm đm tính không quay lại lấy kết quả. Chỉ có phương phâp xâc định HIV nhanh đê được cho phĩp bởi FDA lă SUDS (Single- Use Diagnostic System: hệ thống chẩn đoân đơn) cho kết quả chính xâc trong vòng 10-15 phút lă có thể giúp theo dõi bệnh nhđn. Những kết quả thu được từ phương phâp năy ở người bị nhiễm HIV đê được chứng minh lă có độ nhạy tương đương với những xĩt nghiệm chuẩn nhưng độ đặc hiệu có giảm hơn (đạt 91,8 đến 99,5%) tuy nhiín cũng không cần lăm thím xĩt nghiệm khẳng định năo nữa nếu kết quả xâc định theo phương phâp SUDS lă đm tính. Nhưng để loại trừ khả năng dương tính giả, thì với kết quả dương tính xâc định bằng SUDS không nín đưa ra kết luận cuối cùng trước khi được khẳng định lại bằng Westem blot[49].
- Những thử nghiệm kết hợp HIV-1/ HIV-2: Một số huyết thanh HIV-2 dương tính sẽ cho kết quả đm tính hoặc không xâc định được nếu sử dụng những thử nghiệm phât hiện khâng thể của HIV-1. Hơn nữa tỷ lệ nhiễm HIV-2 đang gia tăng trín toăn cầu do những người di cư nín việc dùng những thử nghiệm kết hợp để phât hiện những khâng thể của HIV-1 vă HIV-2 cùng một lúc vă để phđn biệt hai chủng virus đó ngăy căng được phổ biến hon. Tuy nhiín, HIV-1 vă HIV-2 có cùng chung nhiều khâng nguyín nín cần thiết phải phât hiện khâng nguyín đặc hiệu cho mỗi type virus. Hiện nay có rất nhiều công ty thương mại đê đưa ra thị trường những thử nghiệm kết hợp HIV-1/2 vă cho thấy độ nhạy không hề bị giảm khi phât hiện khâng thể của hai chủng virus cùng một lúc [12]. Đa số câc thử nghiệm kết hợp dùng khâng
nguyín tâi tổ hợp vă/hay những peptid tổng hợp nhằm đạt độ đặc hiệu cao. Ngoăi ra do trọng lượng phđn tử của câc khâng nguyín khâc nhau nín câc thử nghiệm khẳng định như Westem blot hay RIPA cũng có thể phđn biệt được HIV-1 vă HIV-2. Thử nghiệm RIPA được nhiều tâc giả coi lă phương phâp đâng tin cậy nhất để khẳng định HIV-2. Những thử nghiệm IFA sử dụng thănh phần của măng lă những peptid tổng hợp hoâ học của HIV-1 vă HIV-2 tương ứng với những vùng gđy miễn dịch cũng cho kết quả phù hợp với kết quả của câc thử nghiệm Westem blot, RIPA phđn biệt hai chủng năy mă lại còn có giâ trị để phđn biệt những mẫu huyết thanh dương tính cả với 2 type virus (phản ứng dương tính kĩp).
- Thử nghiệm tại nhă: Có hai hình thức thử nghiệm tại nhă được FDA chấp thuận cho đưa văo sử dụng. Thứ nhất lă dụng cụ xĩt nghiệm tại nhă Home access HIV-1 Test System, người sử dụng chích đầu ngón tay bằng lưỡi chích để lấy mâu vă gửi tới phòng xĩt nghiệm trung tđm. Theo kết quả bâo câo thì độ nhạy vă đặc hiệu của thử nghiệm năy tương đương với câc thử nghiệm thông thường nếu mẫu mâu được lấy đúng qui câch. Sau khi nhận được mẫu, kết quả xĩt nghiệm theo phương phâp EIA sẽ được thông bâo qua điện thoại trong vòng 3 đến 7 ngăy. Tất cả những bệnh nhđn có kết quả dương tính hoặc kết quả chưa xâc định sẽ ngay lập tức được tư vấn[49]. Thứ hai lă xĩt nghiệm HIV tại nhă cho kết quả trong vòng 10 phút vừa được FDA chấp thuận vă đê xuất hiện trín thị trường.
Nói chung câc kỹ thuật xĩt nghiệm phât hiện HIV đều có độ nhạy vă độ đặc hiệu rất cao nhưng để đảm bảo không mắc phải kết quả dương tính hay đm tính giả cần phải chú ý đến nhiều yếu tố như:
- Thời gian xuất hiện đâp ứng khâng thể: Câc thử nghiệm phât hiện khâng thể sẽ không phât hiện được HIV nếu chưa có đâp ứng khâng thể. Đâp ứng năy thường xảy ra sau 2 đến 3 thâng, hay 5 thâng vă lđu hơn nữa nếu hệ miễn dịch bị tổn thương. Một nghiín cứu mới đđy cho thấy nhiễm HIV im lặng có thể kĩo dăi đến 34 thâng mă không có đâp ứng khâng thể để có thể phât hiện bằng thử nghiệm ELISA. [44,49] - Loại khâng thể mă thử nghiệm có thể phât hiện được: Câc thử nghiệm ELISA vă Westem blot mă chỉ phât hiện khâng thể IgG với HIV sẽ không phât hiện được những người nhiễm HIV trước khi khâng thể IgM chuyển sang IgG. Thời gian chuyển năy có thể lín tới 41 tuần lễ, do đó việc xĩt nghiệm theo dõi những người có
nguy cơ nhiễm HIV rất quan trọng. Vă cũng cần lưu ý thím lă câc thử nghiệm ELISA hiện nay chỉ phât hiện khâng thể của những chủng HIV lưu hănh phổ biến[12].
- Nồng độ câc loại khâng nguyín, khâng thể trong câc giai đoạn của quâ trình nhiễm HIV/AIDS: Khâng thể chống p24 xuất hiện sớm sau khi nhiễm virus vă có xu hướng giảm đi hay không phât hiện được văo giai đoạn cuối của bệnh (khi bắt đầu có câc biểu hiện lđm săng) nín có ý nghĩa trong chẩn đoân sớm vă tiín lượng bệnh. Trong khi đó câc khâng thể chống glycoprotein vỏ như gp 160, gpl20, gp 41 có thể phât hiện được ở hầu hết những người nhiễm HIV, không liín quan đến giai đoạn lđm săng[12j.
- Câc bệnh vă câc yếu tố khâc có thể ảnh hưởng đến kết quả xĩt nghiệm: Kết quả dương tính giả với ELISA còn có thể xảy ra do sự thay đổi nội tại trong việc thực hiện xĩt nghiệm, bất hoạt huyết thanh bằng nhiệt độ hay bắt gặp ở khoảng 19% bệnh nhđn ưa chảy mâu, 13% ở bệnh nhđn viím gan nghiện rượu vă 24% bệnh nhđn có phản ứng giang mai dương tính [49]. Do vậy, xĩt nghiệm khẳng định tất cả câc mẫu huyết thanh dương tính lần hai lă cần thiết.
TỈẾp xốc với Ị |« J co cao (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Anỉi-env <gp120, gp41)
Sơ đồ ước lượng khâng nguyín, khâng thể trong câc giai đoạn nhiẻm HIV/AIDS
Hình 2.1- Sơ đồ ước lượng khâng nguyín, khâng thể trong câc giai đoạn nhiễm HIV/AIDS