Sơ đồ 1: Qui trình nuôi cấy và phân lập, định danh vi khuẩn ETEC
Mẫu phân
MC
370C/24 giờ
Cấy thuần trên MC
370C/24 giờ
NA
370C/24 giờ
Thử các chỉ tiêu sinh hóa
370C/24 giờ E. coli NA 370C/24 giờ Định chủng K99 K88 987P
ETEC tiêu chảy trên heo con
TSA
Giữ giống Kháng sinh đồ MHA
Đặc tính sinh hóa
Bảng 3.1 Phản ứng sinh hóa xác định E. coli
Vi khuẩn KIA
Indole MR VP Citrate Glucose Lactose H2S Gas
E. coli + + - + + + - -
Enterobacter + + - + - - + +
Citrobacter + + - + - + - +
Klebsiella +h +h - + - - + +
VP: Voges-Prokauer KIA: Kligler Iron Agar MR: Methyl Red (+): dương tính (-) âm tính
Vi khuẩn E. coli lên men sinh hơi glucose, galactose, mantose, arabinose, xylose, malnitol, fructose. Có thể lên men hoặc không lên men các đƣờng Sacchacrose, rafinose, xalixin, esculin, dunxit, glycerol.
Vi khuẩn E. coli không lên men các đƣờng dextrin, amindon, glycogen, inosit. Vi khuẩn E. coli đƣợc định danh bằng phản ứng sinh hóa qua các môi trƣờng: TSI: là môi trƣờng Triple Iron Sugar Agar lấy vi khuẩn từ môi trƣờng NA cấy vào ống nghiệm chứa thạch nghiêng KIA, ủ ở 370C trong 24 giờ.
Kết quả: E. coli lên men đƣờng lactose, đƣờng glucose và có sinh hơi.
Phản ứng kiểm tra tính sinh Indole: dùng que cấy, cấy một lƣợng nhỏ sinh khối vi khuẩn từ môi trƣờng TSA vào ống nghiệm chứa môi trƣờng peptone, ủ ấm ở 370
C trong 24 giờ. Nhỏ vào môi trƣờng nuôi cấy vài giọt thuốc thử Kowacs. Kết quả là
E. coli cho phản ứng dƣơng tính, trên bề mặt môi trƣờng xuất hiện 1 lớp màu đỏ. Phản ứng Methyl Red (MR) và Proskauer (VP): dùng que cấy, cấy một lƣợng nhỏ sinh khối vi khuẩn từ môi trƣờng NA vào ống nghiệm chứa môi trƣờng MR-VP ủ ấm ở 370C trong 24 giờ. Thêm vài giọt thuốc thử Methyl Red, E. coli cho phản ứng MR dƣơng tính, môi trƣờng có vòng màu đỏ. Với phản ứng VP, nhỏ vào môi trƣờng nuôi cấy vài giọt thuốc thử VP1, sau đó nhỏ vào vài giọt VP2 để yên vài phút. E. coli cho phản ứng âm tính, bề mặt môi trƣờng không màu.
Phản ứng Citrate: lấy vi khuẩn từ môi trƣờng TSA cấy vào ống nghiệm chứa thạch nghiêng Simmon‟s Citrate, giữ 370C trong 24 giờ. E. coli cho phản ứng âm tính, môi trƣờng không đổi màu.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});