Sau 3 tuần trồng ngoài tự nhiên, những mảnh lá non của 24 dòng thuốc lá chuyển gen được tách chiết DNA tổng số (hình 3.13) phục vụ cho phản ứng PCR.
Hình 3.13. Kết quả điện di DNA tổng số của 24 dòng thuốc lá chuyển gen
1- 24: dòng thuốc lá chuyển gen từ 1 – 24 M: marker Fermentas 1kb
Kết quả điện di cho thấy các băng đều và rõ nét, chúng tôi kết luận đã tách chiết thành công ADNcủa các dòng thuốc lá chuyển gen. Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu để nhân gen arsC và sử dụng DNA tổng số của 24 dòng thuốc lá chuyển gen làm khuôn mẫu cho phản ứng PCR nhằm xác định sự có mặt của gen arsC trong các dòng thuốc lá này.Kết quả điện di sản phẩm PCR thể hiện trên hình 3.14.
65
Hình 3.14. Kết quả điện di sản phẩm PCR của các dòng thuốc lá chuyển gen
1 – 24: Sản phẩm PCR của dòng thuốc lá chuyển gen 1-24 M: Marker 100 bp DNA Ladder
Kết quả trên hình 3.14 cho thấy, trong số 24 dòng thuốc lá chuyển gen
arsCsau 3 tuần trồng ngoài tự nhiên được kiểm tra bằng phản ứng PCR, 12 dòng đã cho kết quả dương tính. Từ 12 dòng thuốc lá chuyển gen này đều nhân được một băng khoảng 500 bp, phù hợp với kích thước lý thuyết của gen arsC. Chứng tỏ gen
arsC đã được chuyển thành công vào 12 dòng thuốc lá trên.
Tác giả Nguyễn Thu Trang đã kiểm tra được sự có mặt của gen GSHI ở 18 cây chuyển gen bằng phản ứng PCR cho thấy có 8/18 dòng cây cho kết quả dương tính (chiến tỷ lệ 44.4%) [21]. Tác giả Bùi Phương Thảo và cộng sự đã thiết kế thành công vector chuyển gen Lsi2 vào cây thuốc lá góp phần nâng cao khả năng vận chuyển và tích lũy asen. Kết quả kiếm tra bằng PCR có 9/10 dòng cây cho kết quả dương tính [18].