II. Bố cục của luận văn
3.4. Tổng kết các điều kiện áp dụng phân tích dexamethason acetat
mẫu phân tích
Từ các kết quả nghiên cứu trên, chúng tôi tổng hợp các điều kiện phù hợp để đo dexamethason acetat bằng phương pháp HPLC thể hiện trong bảng 3.7.
Bảng 3.7. Các điều kiện đo dexamethason acetat phương pháp HPLC
Chất phân tích các yếu tố Dexamethason acetat
Điều kiện sắc
ký
Tỉ lệ pha động Acetonitril : Nước (34 : 66)
Cột sắc ký Cột C18 (250 × 4,6 nm, 5 µm I.D)
Dedecter 240 nm
Thể tích tiêm mẫu 20 µl Tốc độ dòng 1,2 ml/phút Giới hạn phát hiện LOD (ppm) 0,29 Giới hạn định lượng LOQ (ppm) 0,97 Khoảng nồng độ tuyến tính (ppm) 0,5 - 6,5
3.5. Áp dụng kết quả nghiên cứu để phân tích một số mẫu mỹ phẩm 3.5.1. Xác định hàm lượng dexamethason acetat một số mẫu mỹ phẩm
Chúng tôi tiến hành phân tích các mẫu mỹ phẩm để xác định mẫu chứa chất cấm dexamethason acetat theo quy trình đã xây dựng và dựa vào đường chuẩn để xác định hàm lượng dexamethason acetat có trong mỹ phẩm.
Cân chính xác 1,000 g mẫu vào cốc thủy tinh 100 ml, thêm 5 ml ethanol tuyệt đối, lắc siêu âm 30 phút ở nhiệt độ 700C làm lạnh ở trong môi trường nước đá (t< 50C), ly tâm 5 phút. Lọc, chiết. Tiến hành đun cách thủy đến khi thu được cắn. Hoàn tan cắn với 10 ml methanol, chuyển vào bình định mức 25 ml, tráng cốc thêm 2 lần, mỗi lần 5 ml methanol, thêm methanol vừa đủ. Lọc qua màng lọc G4 [22].
Lượng cân các mẫu mỹ phẩm được nêu trong bảng 3.8.
Bảng 3.8. Lượng cân các mẫu mỹ phẩm
TT Ký hiệu mẫu Lượng mẫu (g) Thể tích pha loãng (ml)
1 KR05 1,0012 25
2 SR01 1,0017 25
3 ST04 1,0019 25
4 KD02 1,0011 25
5 KD03 1,0016 25
Tiến hành phân tích mẫu mỹ phẩm theo phương pháp đã nghiên cứu trên ở điều kiện tối ưu của thiết bị đo. Dựa vào phương trình đường chuẩn đã thiết lập xác định được nồng độ dexamethason acetat có trong lượng mẫu phân tích.
Xác định hàm lượng dexamethason acetat có trong mẫu mỹ phẩm theo công thức: mp tpm t t C .v C = m
Trong đó:
- Cmp (ppm): Hàm lượng dexamethason acetat có trong mẫu mỹ phẩm
- Ctmp (ppm): Hàm lượng dexamethason acetat có trong lượng mẫu mỹ phẩm
đem phân tích.
- vt (ml): Thể tích pha loãng của mẫu - mt(g): Lượng mẫu mỹ phẩm phân tích
Kết quả phân tích được trình bày trong bảng 3.9.
Bảng 3.9. Kết quả đo của mẫu phân tích
TT Ký hiệu mẫu Tổng diện tích píc Hàm lượng dexamethason acetat
có trong mẫu phân tích (Cxdmp -ppm) Hàm lượng dexamethason acetat có trong mẫu mỹ phẩm (Cmp-ppm) 1 KR05 KPH KPH 2 SR01 KPH KPH 3 ST04 KPH KPH 4 KD02 21263 0,604 15,083 5 KD03 KPH KPH Nhận xét:
Kết quả thu ở bảng 3.9 được cho thấy, trong 05 mẫu mỹ phẩm được nghiên cứu thì chỉ có 01 mẫu mỹ phẩm (KD02) phát hiện chất cấm dexamethason acetate với hàm lượng 15.083 ppm.
3.5.2. Xác định độ lặp lại hàm lượng dexamethason acetat có trong mẫu mỹ phẩm
Dựa vào kết quả khảo sát sơ bộ, chúng tôi xác định hàm lượng dexamethason acetate có trong mẫu mỹ phẩm bằng cách tiến hành phân
tích 5 lần lặp lại trên mẫu KD2. Theo quy trình khảo sát và dựa vào phương trình đường chuẩn đã xây dựng chúng tôi thu được kết quả trình bày trong bảng 3.10.
Bảng 3.10. Kết quả phân tích dexamethason acetate có trong mẫu KD2
TT Lượng cân Tổng diện tích píc Hàm lượng examethason acetat trong mẫu
phân tích (Cxdmp -ppm) Hàm lượng Dexamethason acetat có trong mẫu mỹ phẩm (Cmp-ppm) 1 1,0013 21233 0.6033 15.06 2 1,0016 21247 0.6038 15.07 3 1,0011 21296 0.6054 15.12 4 1,0003 21265 0.6044 15.10 5 1,0009 21213 0.6027 15.05 Xtb 15.08 SD 0.028 RSD% 0.185 Nhận xét:
Kết quả thu ở bảng 3.10 chúng tôi thấy giá trị độ lệch chuẩn tương đối RSD < 5% là chấp nhận được. Chúng tôi xác định được trong mỹ phẩm (mẫu kí hiệu KD02) chứa chất cấm dexamethason acetate với hàm lượng 15,08 ppm.
3.6. Các sắc đồ của phép đo HPLC 3.6.1. Sắc đồ mẫu trắng 3.6.1. Sắc đồ mẫu trắng
Hình 3.3. Sắc đồ mẫu trắng
3.6.2. Các sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ khác nhau
Hình 3.5. Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 1,0 ppm
Hình 3.7. Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 3,0 ppm
Hình 3.9. Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 6,0 ppm
3.6.3. Sắc đồ các mẫu mỹ phẩm
Hình 3.11. Sắc đồ mẫu MP-KR05 - Kem rửa mặt ngăn ngừa mụn Acnes
Hình 3.13. Sắc đồ mẫu MP-ST04 - Sữa tắm LUX
Hình 3.15. Sắc đồ mẫu MP DK 03 - Kem dưỡng da vital care viitamin E creme
KẾT LUẬN
Chúng tôi đã giải quyết các nhiệm vụ đặt ra của đề tài, căn cứ vào các kết quả nghiên cứu thu được và rút ra kết luận sau:
1. Đã khảo sát tìm điều kiện tối ưu của phương pháp phân tích
Tìm các điều kiện tối ưu cho phép xác định dexamethason acetat bằng phương pháp HPLC.
+ Vạch phổ của detector 240 nm. + Tỉ lệ pha động ACN: H2O = 34: 66.
+ Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5μm I.D.). + Thể tích tiêu chuẩn 20 μl và tốc độ dòng 1,2 ml/phút.
2. Đã khảo sát xác định khoảng nồng độ tuyến tính giữa Spic và nồng độ dexamethason acetat là 0,5 - 6,5 ppm.
3. Đã xây dựng được phương trình đường chuẩn đầy đủ thể hiện quan hệ Spic và nồng độ chất dexamethason acetat.
4. Đánh giá LOD, LOQ cho thấy đủ tiêu chuẩn để xác định lượng vết chất dexamethason acetat với độ lặp lại tốt và sai số cho phép.
5. Đã áp dụng các kết quả nghiên cứu để xác định chất dexamethoxason acetat trong 5 mẫu mỹ phẩm. Nghiên cứu phát hiện được chất dexamethason acetat trong 01 mẫu mỹ phẩm (kí hiệu KD02) không tuân theo Hiệp định về hệ thống hòa hợp ASEAN trong quản lý mỹ phẩm. Còn 4 mẫu không phát hiện dexamethason acetat.
Chúng tôi hy vọng những nghiên cứu trên sẽ góp phần vào việc ứng dụng kỹ thuật HPLC để xác định dexamethason acetat trong các đối tượng mỹ phẩm, nhằm phục phụ đắc lực cho các ngành khoa học và đặc biệt trong lĩnh vực mỹ phẩm bảo vệ sức khỏe con người.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
[1]. ASEN (2003), Hiệp định về hệ thống hòa hợp ASEAN trong quản lý mỹ phẩm, Bản dịch của Cục quản lý Dược, 2008.
[2]. ASEAN (2005), Determination of heavy metals (arsenic, cadmium, lead and mercury) in cosmetic products, 1- 6 (phương pháp hòa hợp của ASEAN có mã số ACM THA 05).
[3]. Trần Tử An (2006), Môi trường và độc chất môi trường, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 72-79, 138-141, 264-292, 295-297.
[4]. Trần Tử An (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. [5]. Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam (xuất bản lần thứ ba), Nhà xuất
bản Y học, Hà Nội.
[6]. Bộ Y tế (2006), Quyết định số 4/2006/QĐ-BYT, của Bộ trưởng Bộ Y tế về việc triên khai, áp dụng và hướng dẫn thực hành các nguyên tắc, tiêu chuẩn “thực hành tốt sản xuất mỹ phẩm” của Hiệp hội các nước Đông nam Á.
[7]. Bộ Y tế, Cục quản lý Dược (2011), Thông tư 06/2011/TT-BYT, phụ lục số 06-MP, 01-MP, Hà Nội.
[8]. Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 5, Các kỹ thuật sắc ký. [9]. Vương Ngọc Chính (2005), Hương liệu mỹ phẩm, NXB Đại Học Quốc
Gia TP.HCM.
[10]. Nguyễn Xuân Dũng, Tử Vọng Nghị, Phạm Luân (1986), Các phương pháp tách - Sắc ký lỏng cao áp, Đại học tổng hợp Amsterdam Hà Nội. [11]. Nguyễn Thanh Hà, Phạm Khánh Phong Lan (2007), “Phân tích Arsen
trong một số chế phẩm kem dưỡng da bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử”, Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, tr. 18-21.
[12]. Trần Đức Hậu, Nguyễn Đình Hiển, Thái Duy Thìn, Hình Kim Thoa, Nguyễn Văn Thục (2006), Hóa dược tập 2, Bộ môn hóa dược, Đại học Dược Hà Nội.
[13]. Làm thế nào để có làn da khỏe và đẹp, NXB Văn Hóa Thông Tin.
[14]. Nguyễn Thành Long (2006), Mỹ phẩm, Chuyên đề tự chọn, Đại học Dược Hà nội, tr.15-27.
[15]. Phạm Luân (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao. Đại học quốc gia Hà Nội, tr. 106-105.
[16]. Makoto Takagi, Trần Thị Ngọc Lan (dịch) (2010), Các phương pháp phân tích trong hóa học, Khoa Hóa, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, tr. 184-194.
[17]. Thái Đại Quân (2013), Nghiên cứu xác định vitamin C trong thuốc, thực phẩm chức năng, hoa quả và nước giải khát bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC, Luận văn Thạc sỹ Khoa hóa học, Trường Đại học Vinh, tr 23-24.
[18]. Hồ Viết Quý (2009), Các phương pháp phân tích công cụ trong hóa học hiện đại, NXB đại học Sư phạm, Hà Nội, tr. 203-217.
[19]. Louis Hồ Tấn Tài (1999), Các sản phẩm tẩy rửa và chăm sóc cá nhân, NXB, in tại công ty Liksin, TP.HCM.
[20]. Tổng cục Tiêu chuẩn và Đo lường, Trung tâm Thông tin (2003), Tuyển tập các tiêu chuẩn về Hóa mỹ phẩm.
[21]. Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng và cộng sự (1985), Các phương pháp sắc ký. Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật.
[22]. Nguyễn Thị Xuyên, Hoàng Việt Dũng, Hoàng Mỹ Hạnh, Đào Văn Đôn, Nguyễn Thị Thanh Phương (2013), “Định lượng đồng thời dexamethason acetat, betamethason, prednisolon và triamcinolon trong mỹ phẩm bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao”, Tạp chí Y - Dược học Quân sự số 6 - 2013.
Tiếng Anh
[23]. ASEAN. Identificantion of dexamethason, betamethason, hydrocortison acetat, betamethason 17-valerate, and triamcinolon acetonid in cosmetic products by TLC and HPLC, ACM MAL 07.
[24]. C.G.Smyrniotakis, Helen A. Archontaki, (2007). “C18 columns for the simultaneous determination of oxytetracycline and its related subsatances by reversed-phase high performance liquid chromatography and UV detection” the Journal of Pharmaceutical and biomedial analysis, 43, 506 - 514.
[25]. Gulliver, T. & Eid, N. (2005), "Effects of glucocorticoids on the hypothalamic - pituitary-adrenal axis in children and adults". Immunol Allergy Clin North Am, 25(3), pp.541-555.
[26]. Miller J.C. Miller J.N. (1988), Statistics for analytical chemistry, Ellis Horwood Limited, England.
[27]. Nam Y S, I K Kwon et al, (2012), Quantitative monitoring of corticosteroids in cosmetic products manufactured in Korea using LC- MS/MS. Forensic Scient. 220 (1-3), pp.23-28.
[28]. Wu Da-nan, Zheng He-Hui, Wang Ping, Li Jie, (2008), Determination of 8 glucocorticoids in cosmetics by ultra performance liquid chromatography. Chinese journal of health laboratory technology.