- Cỡ mẫu xác định tỷ lệ thấpcòi theo tính toán sẽ là: 308 trẻ em/nhóm tuổi 5 nhóm tuổi = 1.540 Do chọn mẫu chùm nên cỡ mẫu được nhân đôi để đảm bảo độ tin
2.3.2. Xét nghiệm hoá sinh máu và vi chất dinh dưỡng.
Trẻ nhịn ăn và không uống bất kỳ một loại nước giải khát nào để làm xét nghiệm hemoglobin và chiết tách huyết thanh xét nghiệm IGF 1, kẽm. Sau khi lấy máu xét nghiệm trẻ em được tổ chức để các bà mẹ cho ăn sáng tại chỗ. Mỗi trẻ em lấy 2 ml máu cho vào ống nghiệm, chiết tách huyết thanh rồi chia vào 2 ống Eppendoff để đo hàm lượng IGF-1, kẽm. Các mẫu huyết thanh đều được bảo quản trong tủ lạnh âm sâu ở nhiệt độ -800C cho đến khi phân tích. Các dụng cụ phân tích máu, đặc biệt dùng cho đo kẽm đều được tráng rửa bằng acid chlohydric HCl 1%, sấy khô trước khi dùng để loại trừ nhiễm kẽm từ môi trường.
+ Định lượng nồng độ kẽm huyết thanh tại labo khoa Vi chất, Viện Dinh dưỡng quốc gia. Kẽm huyết thanh được định lượng theo phương pháp quang phố hấp phụ nguyên tử (AAS), bước sóng 213,9 nm, khe sáng 0,7 với tốc độ hút 3 ml/phút, kẽm chuẩn Zn(NO3)2 (Wako Puro Chemical Industry Ltd. Japan), được pha theo các nồng độ 0,2 mg/L, 0,4 mg/L, 0,6 mg/L và 0,8 mg/L. Đánh giá tình trạng thiếu kẽm: trẻ được coi là thiếu kẽm khi nồng độ kẽm huyết thanh < 10,7 ^mol/L, hoặc < 70 ^g/dL [78].
+ Định lượng IGF-1 huyết thanh tại labo Khoa Vi chất, Viện Dinh dưỡng quốc gia. Mẫu huyết thanh được tách và giữ ở nhiệt độ -800C cho đến khi phân tích. IGF-1 được đo bằng phương pháp ELYSA (KIT IGF-1 6000, DRG, USA).
+ Định lượng Hemoglobin (Hb) theo phương pháp đo trực tiếp trên máy HemoCue Hb301 Distributor USA, sử dụng 1 giọt máu tĩnh mạch, phân loại thiếu máu theo tiêu chuan của WHO ở trẻ từ 6 tháng đến 5 tuối thiếu máu khi Hb dưới 11g/dL [145]. Nguyên lý: Hemoglobin và dẫn xuất của nó bị ôxy hóa thành methemoglobin với sự có mặt của kali kiềm ferricyanide. Methemoglobin phản ứng với kali cyanide hình thành nên cyanmethemoglobin mà độ hấp phụ cao nhất của nó đạt được ở 540 nm. Cường độ màu đo được tại bước sóng 540 nm tỷ lệ với nồng độ Hb.