... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... cân hợp dNTP Công ngh DNAtái t h.p đầu 3’ + Tổng hợp sợi thứ hai cDNA tạo dòng cDNA + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro 1. 3 DNA...
... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... bacteriophage λ CôngnghệDNAtáitổhợp (DNA recombinant technology) Hệ thống phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ sinh vật để ghép nối vào DNA sinh vật khác tạo phân tử DNAtáitổ hợp...
... thương mại phát triển côngnghệDNAtáitổhợp dược phẩm dùng điều trị bệnh rối loạn người Năm 19 79, Tổhợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất thương mại insulin người côngnghệDNAtáitổhợp Trước thời điểm ... thời gian dài trước dùng kết phát tín hiệu lai nhanh 32 VI Các ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp có nhiều ứng dụng đời sống Các ứng dụng bao gồm sản xuất dược phẩm loại ... phage Genome táitổhợp phage λ sau đóng gói vỏ protein bổ sung vào E coli Các phage λ gây xâm nhiễm DNAtáitổhợp chúng vào tế bào vật chủ, nơi tái Chỉ đoạn DNA có kích thước thích hợp mang gen...
... truyền 2 .1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiên cứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... bảng 10 .1) đoạn DNA nối đầu dính đầu dính đầu dính + DNA ligase DNAtáitổhợp Hình 10 .1 Enzyme giới hạn (EcoRI) cắt DNA khác nhau, nhờ kiến tạo phân tử DNAtáitổhợp in vitro (bắng enzyme DNA...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... truyền 2 .1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiên cứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... bảng 10 .1) đoạn DNA nối đầu dính đầu dính đầu dính + DNA ligase DNAtáitổhợp Hình 10 .1 Enzyme giới hạn (EcoRI) cắt DNA khác nhau, nhờ kiến tạo phân tử DNAtáitổhợp in vitro (bắng enzyme DNA...
... DNAtáitổhợp dùng để thiết lập ngân hàng gen, cDNA tổng hợp protein, enzyme, hormone, Hình 1.1 Cấu tạo phân tử DNAtáitổhợp1. 3 Quy trình tạo DNAtáitổhợp Quy trình côngnghệ tạo DNAtái ... phân tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2 .1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành ... v.v… nhờ kỹ thuật ADN táitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành tựu đạt 2 .1 Khái niệm DNAtáitổhợp phân tử DNA nhỏ, lắp ráp từ đoạn DNA lấy từ thể truyền gen cần chuyển Năm 19 73, Staley Cohen...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... Chương CôngnghệDNAtáitổhợp I Mở đầu CôngnghệDNAtáitổhợp hình thành từ năm 19 70 nhờ phát triển phương pháp kỹ thuật dùng nghiên cứu...
... vật (công nghệ sinh học ) Theo nghĩa phổ biến trình sản xuất sử dụng giống sinh vật mới, tạo côngnghệDNAtáitổhợp (công nghệ sinh học ) Trong côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp ( ... để tổng hợp mRNA từ khuôn mẫu DNA Phiên mã ngược (reverse transcription) Quá trình tổng hợpDNA từ khuôn mẫu mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase) CôngnghệDNAtáitổhợp 19 3 ... viện cDNA (cDNA library) xây DNA khuôn mẫu (template DNA) (sao chép) khuếch đại DNA (PCR) mẫu DNA polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 18 1 Năm 19 59, hai nhà khoa học người Mỹ Kornberg Ochoa nhận...
... cm - DNA ( >1 : 1.1 .1 CôngnghệDNAtáitổhợp : 37 - -acrylamide) - 1 TBE - 10 % ammonium persulphate silicon lúc để miếng đệm 2.4) 35 3,5% 5,0% 8,0% 12 ,0% 20,0% 11 ,6 16 ,6 26,6 40,0 66,6 ... đoạn DNA nhỏ (500-800 bp) không hiệu đoạn lớn ( >15 kb) liên kết với hạt thủy tinh khác sợi DNA bị phá vỡ suốt chu kỳ rửa CôngnghệDNAtáitổhợp 32 Cho 1% type- - 10 0 mL 0,5 60o : DNA (1 g /1 ... phân tách tốt gel 1% , đoạn nhỏ thích hợp với gel 2% CôngnghệDNAtáitổhợp 27 A B C 2 Hình 2.3 Điện di mẫu DNA giống nồng độ agarose khác A: 1% , B: 1, 5% C: 2% - - Nhìn chung, DNA plasmid mạch...
... 10 20-200 Enzyme Taq pol pol 1- 2,5 unit cho 10 0 0,5 unit/25 pol pol pol pol - 0 ,1% (v/v) Triston X -10 0 57 0 ,1 20-mer) 25 : gia DNA Thông thường, nồng độ DNA khuôn mẫu sử dụng khoảng từ 10 -10 0 ... mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi làm khuôn ... phần sau: Đệm 10 PCR 4,5 L ) L Primer-F (10 pmol/ L) 2,5 L Primer-R (10 pmol/ L) 2,5 L Thêm H2 40 L pol: 10 L Taq pol (5 units/ L) L Thêm H2 20 L 10 .3 Bổ sung L DNA khuôn mẫu (10 0 ng) vào 40...
... CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể táitổhợp Khuẩn lạc xanh-thể không táitổhợp Bảo quản riêng rẽ dòng táitổhợp Hình 4 .16 Tạo dòng BAC vector CôngnghệDNAtáitổhợp 97 - BAC vector cắt enzyme ... đoạn DNA ngoại lai Những phân tử đóng gói in vitro đầu phage , chúng gây nhiễm sau thêm phần đuôi CôngnghệDNAtáitổhợp 87 A B λ DNADNA Đuôi Đầu cos Hình 4 .10 Phân tử DNA phage A: Tự táiDNA ... vector táitổhợp vào vi khuẩn/tế bào vật chủ Sau tạo vector táitổhợp mang gen ngoại lai, việc biến nạp vào tế bào vật chủ Trong trường hợp tế bào vật chủ thường CôngnghệDNAtáitổhợp 82...
... LuriaBertani broth CôngnghệDNAtáitổhợp 10 8 nucleic acid quan tâm (mẫu dò) , thường 32 5.2) (smear) gel (Hình 5.3) (2 -10 Hind - Southern blot CôngnghệDNAtáitổhợp 10 9 A B E E C E E E ... (%f ) - 500/n (1) thể lai RNA -DNA: Tm (oC) = 79,8oC + 18 ,5 (log10M) + 0,58 (%G + C) - 11 ,8 (%G + C)2 - 0,56 (%f ) - 820/n hóa + (2) ) (%f n CôngnghệDNAtáitổhợp (theo base) 11 3 ba Tm sung ... kỹ DNase I (tụy bò): enzyme xúc tác phản ứng thủy phân liên kết nằm sau pyrimidine chuỗi DNA Trong trưởng hợpDNA sợi đôi, chỗ cắt xảy hay hay sợi (xem chương 1) CôngnghệDNAtáitổhợp 11 9...
... thư viện cDNA sau: bỏ 27 CôngnghệDNAtáitổhợp 15 1 bacteriophage 10 6 hóa bacte u , gt 11, - ZAP dephosphoryl hóa E coli - chèn cDNA mười hai hoàn hoàn hóa CôngnghệDNAtáitổhợp 15 2 hóa ... hoàn CôngnghệDNAtáitổhợp 75 13 3 bốn loại 200-250 + + + - hóa 2+ Mg2+ hoàn 6 -10 mM 1. 5 cDNA hoàn HCl H E coli (hairpin loop )1 (primer) E coli 6.4) M CôngnghệDNAtáitổhợp 13 4 , cho ... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c CôngnghệDNAtáitổhợp enzyme -cDNA 13 2 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase...
... promoter bacteriophage T7 Promoter PL Promoter PL (31oC), promoter PL CôngnghệDNAtáitổhợp 16 1 gen c L L như: pPLa 2 311 , pPLa pKC30 EcoRI HindIII 6000 10 00 Amp r PL PL nutL N pKC30 HpaI (6,4 kb) ... protein hòa tan không hòa tan E coli CôngnghệDNAtáitổhợp 17 11. 2 Phương pháp hòa tan thể vùi 1. 2 .1 Làm tan tế bào Ly tâm thu tiểu thể tế bào E coli, tái huyền phù tiểu thể phenylmethylsulfonylfluoride ... Kiểm tra khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong muốn cách tách chiết DNA (DNA miniprep) plasmid vector, CôngnghệDNAtáitổhợp 15 9 sau cắt enzyme hạn chế thích hợp điện di kiểm tra agarose...
... 1.1CôngnghệDNAtáitổhợp gì? CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học Côngnghệ ... 1. 2 Quy trình tạo DNAtáitổhợp mong muốn 1. 4 MộtTài liệu chiatrình nghiên cứu côngnghệ vài công sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn DNAtáitổhợp - Năm 19 72, phân tử DNAtáitổhợp tạo trường Đại ... v.v… nhờ kỹ thuật ADN táitổhợpCôngTài liệuDNA táitổhợp thành nghệ chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn tựu đạt 2 .1 Khái niệm DNAtáitổhợp phân tử DNA nhỏ, lắp ráp từ đoạn DNA lấy từ thể truyền...
... chiêu dài lơn han 20 kilobases Gen 14 exon 13 intron, dơ câc intron kỵch thc lơn hom rat nhiêu câc exon (hïnh 1. 1) [ 61] , [63] p l2 r r r w trri 11 1 n in i u Hinh 1.1 Vi tri câu tao cüa gen tPA i) ... c/l 1- 3C57 MUC LUC Trang D A T VAN D E I T Ơ N G Q U A N 1.1 Dâc diëm ngn goc, câu trûc vai trơ cüa Alteplase 1.1 .1 Tên vi tri thong phân loai Enzymcüa Alteplase 1. 1.2 ... nâm 19 93, Viên Tim mach hoc gâp 95 ca, Bênh viên Hûu Nghi gâp 66 ca, Bênh viên Viêt Tiêp 18 gâp 16 ca Ơ Thành Phơ H6 Chi Minh nâm 19 88 313 ca nhung nâm 19 92 (sau nâm) co 639 ca (tâng 10 4%) [ 31] ...