Khảo sát tác dụng cỏ mực (eclipta alba hassk) trên mô hình chuột thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch nghiên cứu khoa học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƯỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KHẢO SÁT TÁC DỤNG CỎ MỰC (Eclipta alba Linn Hassk) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THỰC NGHIỆM GÂY SUY GIẢM MIỄN DỊCH Thuộc nhóm ngành khoa học: Y Dược Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƯỞNG SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KHẢO SÁT TÁC DỤNG CỎ MỰC (Eclipta alba Linn Hassk) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT THỰC NGHIỆM GÂY SUY GIẢM MIỄN DỊCH Thuộc nhóm ngành khoa học: Y Dược Sinh viên thực hiện: Phạm Thị Ngọc Bích Nam, Nữ: Nữ Lý Thị Tuyết Ngọc Nam, Nữ: Nữ Nguyễn Thị Bích Thảo Nam, Nữ: Nữ Phan Thị Phượng Hằng Nam, Nữ: Nữ Dân tộc: Kinh Lớp, khoa: Công Nghệ Sinh Học Năm thứ: /Số năm đào tạo:4 Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Trịnh Hữu Phước ThS Lao Đức Thuận Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2014 LỜI CẢM ƠN Trước tiên nhóm nghiên cứu chúng tơi, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến giảng viên PGS.TS Trịnh Hữu Phước ThS Lao Đức Thuận, người tận tình hướng dẫn để chúng tơi hồn thành tốt báo cáo Sinh Viên Nghiên Cứu Khoa Học, người truyền đạt cho nhiều kiến thức niềm đam mê nghiên cứu khoa học Kế đến xin cảm ơn đến Trường Đại học Mở Tp.HCM, Khoa Cơng Nghệ Sinh Học phịng thí nghiệm Sinh Lý Động Vật, nơi giúp học tập thực thí nghiệm đến đề tài SVNCKH, không quên cảm ơn bạn, em sinh viên phòng hỗ trợ, giúp đỡ nhiều suốt thời gian vừa qua Cuối cùng, xin gửi lời tri ân sâu sắc đến Cha Mẹ, người có cơng sinh thành dưỡng dục, bên động viên nỗ lực gặp khó khăn thất bại sống TĨM TẮT CƠNG TRÌNH Mục tiêu nghiên cứu đề tài “Khảo sát tác dụng cỏ mực (Eclipta alba (L.) Hassk.) mơ hình chuột thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch”: - Xây dựng mơ hình chuột suy giảm miễn dịch ứng dụng nghiên cứu y sinh, đặc biệt việc sàng lọc loại thuốc hỗ trợ hóa trị ung thư, thuốc có tác dụng bảo vệ hay phục hồi chức tạo máu - Xây dựng quy trình thu nhận cao cồn cỏ mực khảo sát tác dụng cao cồn mơ hình chuột suy giảm miễn dịch - Gây nhiễm độc gan chuột suy giảm miễn dịch khảo sát khả giải độc gan cao cồn cỏ mực Các nội dung đề tài bao gồm: - Thu nhận cao cồn cỏ mực - Khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao cồn mơ hình LD50 theo thị tổ chức OECD - Xây dựng mơ hình chuột suy giảm miễn dịch thuốc cyclophosphamide - Xây dựng mơ hình chuột phơi nhiễm carbon tetrachloride chuột suy giảm miễn dịch - Khảo sát khả giải độc gan cao cồn cỏ mực chuột suy giảm miễn dịch bị nhiễm độc gan - Khảo sát tác dụng tăng cường miễn dịch cao cồn cỏ mực MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC CHỮ KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 KHÁI QUÁT CHUNG VỀ CÂY CỎ MỰC 1.1.1 Đặc điểm hình thái phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.2 KHÁI QUÁT CHUNG VỀ BỆNH SUY GIẢM MIỄN DỊCH 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại 1.2.2.1 Suy giảm miễn dịch bẩm sinh 1.2.2.2 Suy giảm miễn dịch mắc phải 1.2.3 Chẩn đoán suy giảm miễn dịch 1.2.3.1 Biểu lâm sàng 1.2.3.2 Bệnh lý 1.2.3.3 1.2.3.4 Nghiên cứu sàng lọc phòng thí nghiệm Kiểm tra thiếu hụt tế bào B (kháng thể) 1.2.3.5 Kiểm tra thiếu hụt tế bào T 1.2.3.6 1.2.3.7 Các thử nghiệm thiếu hụt tế bào thực bào Kiểm tra thiếu hụt tế bào bổ thể 1.3 KHÁI QUÁT CHUNG VỀ VIÊM GAN 1.3.1 Khái niệm viêm gan…………………………………………………9 1.3.2 Bệnh nguyên……………………………………………………… 1.3.3 Bệnh học…………………………………….………………………10 1.3.4 Bệnh sinh……………………………………………………………10 1.3.4.1 Cơ chế phát sinh xơ hóa gan 10 1.3.4.2 Các tế bào tiềm phát sinh xơ hóa khác 11 1.3.5 Phân loại viêm gan 11 1.3.6 Chẩnđoán - xét nghiệm 12 1.3.6.1 Xét nghiệm sinh hóa 12 1.3.6.2 Sinh thiết - Xét nghiệm mô học…………………………………………….13 1.3.6.3 Các xét nghiệm khác 13 1.3.7 Chữa trị 14 1.3.7.1 Bằng thuốc 14 1.3.7.2 Ghép gan liệu pháp tế bào 14 1.4 SỬ DỤNG MƠ HÌNH ĐỘNG VẬT TRONG NGHIÊN CỨU Y SINH 14 1.4.1 Ý nghĩa sử dụng mô hình động vật nghiên cứu y sinh 14 1.4.2 Phương pháp gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamide mơ hình động vật 15 1.4.2.1 Khái quát chung cyclophosphamide 15 1.4.2.2 Cơ chế hoạt động cyclophosphamide 15 1.4.2.3 Ý nghĩa ứng dụng mô hình động vật nghiên cứu suy giảm miễn dịch 16 1.4.3 Phương pháp gây tổn thương gan carbon tetrachloride mơ hình động vật 17 1.4.3.1 Khái quát chung carbon tetrachloride 17 1.4.3.2 Cơ sở lý thuyết gây độc carbon tetrachloride (CCl4) 17 1.4.4 Một số tiêu sinh lý chuột…………………………………….19 2.1 VẬT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.1.1 Đối tượng thí nghiệm 20 2.1.2 Dụng cụ - Thiết bị - Hoá chất 20 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Thu nhận cao cồn cỏ mực (Eclipta alba Linn Hassk) 22 2.2.2 Khảo sát độc tính cao cồn cỏ mực 22 2.2.2.1 Quy trình khảo sát độc tính cấp 22 2.2.2.2 Quy trình khảo sát độc tính bán trường diễn 23 2.2.3 Xây dựng mơ hình chuột suy giảm miễn dịch cyclophosphamide 24 2.2.3.1 Theo dõi trọng lượng……………… ………………………… 24 2.2.3.2 Theo dõi tổng lượng hồng cầu 24 2.2.3.3 Theo dõi tổng lượng bạch cầu 25 2.2.4 Xây dựng mơ hình chuột phơi nhiễm carbon tetrachloride chuột suy giảm miễn dịch 26 2.2.5 Khảo sát khả giải độc gan cao cồn cỏ mực chuột suy giảm miễn dịch bị phơi nhiễm CCl4 26 2.2.6 Khảo sát tác dụng tăng cuờng miễn dịch cao cồn cỏ mực 27 2.2.7 Thống kê xử lý số liệu 28 3.1 KẾT QUẢ THU NHẬN CAO 29 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CỦA CAO CỒN CỎ MỰC 30 3.2.1 Kết khảo sát độc tính cấp 30 3.2.2 Kết khảo sát độc tính bán trường diễn 33 3.3 KẾT QUẢ GÂY THỬ NGHIỆM CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH BẰNG CYCLOPHOSPHAMIDE 35 3.3.1 Chỉ tiêu trọng lượng chuột 35 3.3.2 Chỉ tiêu hồng cầu 37 3.3.3 Chỉ tiêu bạch cầu 38 3.3.4 Tỉ lệ sống sót chuột 40 3.3.5 Các biểu khác 40 3.4 KẾT QUẢ GÂY VIÊM GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH 41 3.5 KẾT QUẢ TÁC DỤNG HẠ MEN GAN CỦA CAO CỒN CỎ MỰC TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH BỊ PHƠI NHIỄM CCl4 43 3.5.1 Chỉ số SGOT 43 3.5.2 Chỉ số SGPT 44 3.6 KẾT QUẢ TĂNG CƯỜNG MIỄN DỊCH CỦA CAO CỒN CỎ MỰC 47 4.1 KẾT LUẬN 50 4.2 ĐỀ NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 DANH MỤC BẢNG PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU Bảng 1.1 Bảng phân loại suy giảm miễn dịch mắc phải Bảng 1.2 Một số tiêu sinh lý chuột PHẦN KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN Bảng 3.2 Tình trạng chuột sống/chết sau cho uống cao cồn cỏ mực liều lượng 2000 mg/kg Bảng 3.3 Trọng lượng trung bình chuột sau cho uống cao cồn cỏ mực liều lượng 2000 mg/kg Bảng 3.4 Tình trạng chuột sống/chết sau cho uống cao cồn cỏ mực liều lượng 5000 mg/kg Bảng 3.5 Bảng giá trị trọng lượng trung bình lơ thí nghiệm khảo sát độc tính bán trường diễn Bảng 3.6 Bảng kết thể trọng lượng trung bình chuột (gram) qua ngày thí nghiệm lơ đối chứng lô sử dụng Endoxan Bảng 3.7 Bảng kết thể tiêu tổng lượng hồng cầu chuột (Nx104 tế bào/mm3) qua ngày thí nghiệm lơ đối chứng lô sử dụng Endoxan Bảng 3.8 Bảng kết thể tiêu tổng lượng bạch cầu chuột (tế bào/mm3) qua ngày thí nghiệm lơ đối chứng lô sử dụng Endoxan Bảng 3.9 Hoạt độ SGOT, SGPT, tỷ số SGOT/SGPT sau mười ngày tiêm phúc mạc CCl4 - dầu oilve chuột suy giảm miễn dịch Bảng 3.10 Bảng kết thể hoạt độ SGOT (UI/L) lơ thí nghiệm tác dụng hạ men gan Bảng 3.11 Bảng kết thể hoạt độ SGPT (UI/L) lơ thí nghiệm tác dụng hạ men gan Bảng 3.12 Bảng tỷ số SGOT/SGPT lơ thí nghiệm tác dụng hạ men gan DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU Hình 1.1 Cây cỏ mực Hình 1.2 Các thay đổi cấu trúc gan với xơ hóa phát triển (B) so với gan bình thường (A) Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo cyclophosphanide PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Hình 2.1 Cỏ mực chuột bạch Mus musculus var Albino Hình 2.2 Dầu olive nguyên chất (A), carbon tetrachloride (Guangdong Guanghua Scitech Co., Ltd) (B) Endoxan 200 mg dạng bột pha tiêm ( Baxter Oncology GmbH, Đức) (C) Hình 2.3.Sơ đồ thí nghiệm tác dụng giải độc gan cao cồn cỏ mực mơ hình chuột suy giảm miễn dịch phơi nhiễm CCl4 Hình 2.4 Sơ đồ thí nghiệm tác dụng tăng cường miễn dịch cao cồn cỏ mực PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hình 3.1 Dịch chiết cồn cao cồn cỏ mực Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn trọng lượng trung bình chuột sau 10 ngày cho uống cao cồn cỏ mực liều 2000 mg/kg Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn biến thiên trọng lượng trung bình chuột lơ khảo sát độc tính bán trường diễn qua ngày thí nghiệm Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn biến thiên trọng lượng trung bình chuột lơ qua ngày thí nghiệm sử dụng Endoxan Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn biến thiên tổng lượng hồng cầu chuột Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn biến thiên tổng lượng bạch cầu chuột Hình 3.7 Biểu diễn biến thiên tiêu men gan SGOT SGPT chuột Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn biến thiên tiêu men gan SGOT chuột qua ngày thí nghiệm sau cho uống cao cồn cỏ mực ... tiêu nghiên cứu đề tài ? ?Khảo sát tác dụng cỏ mực (Eclipta alba (L.) Hassk.) mơ hình chuột thực nghiệm gây suy giảm miễn dịch? ??: - Xây dựng mơ hình chuột suy giảm miễn dịch ứng dụng nghiên cứu y... có tác dụng bảo vệ hay phục hồi chức tạo máu - Xây dựng quy trình thu nhận cao cồn cỏ mực khảo sát tác dụng cao cồn mơ hình chuột suy giảm miễn dịch - Gây nhiễm độc gan chuột suy giảm miễn dịch. .. mơ hình chuột suy giảm miễn dịch thuốc cyclophosphamide - Xây dựng mơ hình chuột phơi nhiễm carbon tetrachloride chuột suy giảm miễn dịch - Khảo sát khả giải độc gan cao cồn cỏ mực chuột suy giảm